液质联用分析黄芪注射液中的有机小分子化学成分

张纲，胡雪娇，姜国志，刘艳丽，巴晓雨

(神威药业集团有限公司 河北省中药注射剂工程技术研究中心，河北 石家庄 051430)

·基础研究·

液质联用分析黄芪注射液中的有机小分子化学成分

张纲*，胡雪娇，姜国志，刘艳丽，巴晓雨

(神威药业集团有限公司 河北省中药注射剂工程技术研究中心，河北 石家庄 051430)

目的：对黄芪注射液中的黄酮类、异黄酮类、皂苷类成分等有机小分子化学成分进行定性研究。方法：采用高效液相色谱-电喷雾线性离子阱质谱(HPLC-ESI/MS)检测技术对黄芪注射液中的成分进行分析。结果：黄芪注射液中的18种成分得以鉴定结构，其中紫云英苷等6种成分此前未见报道。结论：明确黄芪注射液中的化学成分为其物质基础研究提供了依据。

黄芪注射液；有机小分子；定性研究；液质联用

黄芪是多年生草本豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，系传统补气中药，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌功能[1]。黄芪注射液是黄芪经提取浓缩制成的灭菌水溶液，临床上用于心气虚损、血脉瘀阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虚湿困之肝炎[2]。

关于黄芪中的化学成分，国内外同仁已进行了较多的研究，但对黄芪注射液中的成分尤其是小分子化学成分的研究报道不多[3]。我们用HPLC-ESI/MS检测技术对黄芪注射液中的有机小分子化学成分进行了鉴定，研究发现，除了已经公知的成分外，黄芪注射液中还有紫云英苷、异鼠李素、异鼠李素-3-O-β-龙胆二糖苷、(3R)-8，2′-二羟基-7，4′-二甲氧基异黄烷、美迪紫檀素、鹅掌楸树脂酚B等化学成分。对黄芪注射液中化学成分的研究不仅有利于提高产品的质量标准，而且对其物质基础和药理活性研究也具有重要意义。

1 仪器与样品

Accela高效液相色谱仪(PDA 检测器)，Hyper Gold C18色谱柱(50 mm×2.1 mm，1.9 μm)，Thermo LTQ XL质谱仪，INOPAK C18固相萃取柱(SPE)。

黄芪注射液由神威药业集团有限公司提供，规格：10 mL，批号：11062131。

2 方法

2.1 样品处理

取本品1支，经固相萃取柱萃取，加2 mL甲醇淋洗，再加2 mL水淋洗，使SPE柱活化，加样1 mL注射液，弃去滤液，加1 mL蒸馏水，弃去滤液，加1 mL甲醇，滤液进收集容器，重复上述萃取过程。精密吸取过滤后的样品2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2 液相条件

流动相：甲醇-0.1%甲酸水，梯度洗脱程序见表1；流速：0.25 mL·min-1；进样量：10 μL。PDA扫描波长范围：200～400 nm；三通道检测：214 nm(Channel A)，254 nm(Channel B)，280 nm(Channel C)。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.3 质谱条件

电喷雾电离，正离子模式(喷雾电压：4.5 kV)、负离子模式(喷雾电压：3.5 kV)；鞘气压力：30 arb；辅助气压力：10 arb；离子传输管温度：300 ℃；扫描模式：全扫描和多级扫描(1～4级)；扫描范围：m/z 100～1500。

3 结果

利用LC/MS技术对黄芪注射液的化学成分进行研究，分别采用正、负离子源ESI检测，初步分析鉴定出18种化学成分，以黄酮、异黄酮和皂苷类成分居多，正、负离子源的HPLC-MS总离子流图见图1和图2，鉴定结果见表2，化学结构式见图3。图4～9分别给出了紫云英苷、异鼠李素等6种新鉴定的化学成分的MS图，图10～13给出了部分代表性成分的裂解途径。

图1 正离子源HPLC-MS总离子流图

图2 负离子源HPLC-MS总离子流图

表2 黄芪注射液中推测鉴定的18种化学成分

4 讨论

黄芪注射液为蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根经提取制成的灭菌水溶液，具有益气养元，扶正祛邪，养心通脉，健脾利湿的功能。临床上适用于心气虚损、血脉瘀阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虚湿困之肝炎。现代药理实验证实其具有增强心肌收缩力、扩张血管、抗病毒、增加免疫功能等特点，由于其疗效确切、不良反应小，在临床上应用日益广泛[4]。

图3 黄芪注射液中推测鉴定的18种成分化学结构

注：A.样品；B.目标化合物；下同。图4 紫云英苷MS(黄酮类)图

图5 异鼠李素MS(黄酮类)图

图6 异鼠李素-3-O-β-龙胆二糖苷MS(黄酮类)图

图7 (3R)-8，2′-二羟基-7，4′-二甲氧基异黄烷MS(黄酮烷类)图

图8 美迪紫檀素MS(紫檀烷类黄酮)图

图9 鹅掌楸树脂酚B MS(木脂素类)图

图10 紫云英苷的质谱裂解途径

图11 (3R)-8，2′-二羟基-7，4′-二甲氧基异黄烷的质谱裂解途径

图12 美迪紫檀素的质谱裂解途径

图13 鹅掌楸树脂酚B的质谱裂解途径

黄芪注射液的质量标准中仅对黄芪甲苷进行了质量控制[5]，其余成分尚不明确，这在一定程度上也限制了黄芪注射液的临床应用。

在对黄芪注射液的HPLC-ESI/MS分析研究中，共鉴定出18种小分子化学成分，其中紫云英苷、美迪紫檀素、鹅掌楸树脂酚B等6种成分均系首次报道。明确黄芪注射液中的化学组成，不仅有利于提升产品的质量标准，而且对于进一步阐明黄芪注射液的药理作用机理也具有重要的指导意义。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：302-303.

[2] 窦辉，付铁军，张帆，等.黄芪注射液的化学成分[J].天然产物研究与开发，2002，14(6)：14-17

[3] 李凤艳.黄芪注射液的药理及临床应用[J].黑龙江中医药，2004(2)：59-60.

[4] 胡胜平，焦建民，李伟华，等.黄芪注射液在临床治疗中的新应用[J].中医临床研究，2010，2(11)：105-107.

[5] 国家药典委员会.黄芪注射液质量标准[J].中国药品标准，2002，3(1)：32-34.

IdentificationofSmallMolecularOrganicCompoundsofAstragalusInjectionbyLC/MS

ZHANGGang，HUXuejiao，JIANGGuozhi，LIUYanli，BAXiaoyu

(ShinewayPharmaceuticalGroupCo.，Ltd.，HebeiProvincialEngineeringTechnologyResearchCenterofTraditionalChineseMedicineInjections，Shijiazhuang051430，China)

Objective：Small molecular organic compounds in Astragalus injection such as flavonoids，isoflavonoids and astragalosides were identified by LC/MS.Methods：The chemical constituents of Astragalus injection were analyzed by Liquid chromatography-electrospray-ionization mass spectrometry(HPLC-ESI/MS).Results：18 compounds from Astragalus injection were elucidated，and six compounds including astragalin were firstly reported.Conclusion：This study laid a basis for elucidation of biologically active substancesin Astragalus injection。

Astragalus injection；small molecular organic compounds；identification；LC/MS

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.004

2015-04-30)

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张纲，博士，研究方向：中药新药；Tel：(0316)5759866-8665，Email：shyflysky@126.com