针刺“阳陵泉”穴对豚鼠oddi括约肌肌电、胆囊压力及胆汁流量的影响

赵敬军　荣培晶　罗　曼　张金铃　李　亮　梁繁荣

(1 中国中医科学院针灸研究所，北京，100700； 2 成都中医药大学针灸推拿学院，成都，610075)



针刺“阳陵泉”穴对豚鼠oddi括约肌肌电、胆囊压力及胆汁流量的影响

赵敬军1荣培晶1罗曼1张金铃1李亮1梁繁荣2

(1 中国中医科学院针灸研究所，北京，100700； 2 成都中医药大学针灸推拿学院，成都，610075)

目的：通过观察针刺“天枢”“期门”“阳陵泉”对豚鼠胆囊压力、oddi括约肌肌电及胆汁流量的影响，探讨针刺“阳陵泉”穴调节肝外胆道系统运动功能的效应是否优于其他穴位及其可能的作用机制。方法：选用成年豚鼠15只，雌雄不限，分成“天枢”“期门”“阳陵泉”组，实验采用oddi括约肌双钩金属电极埋植测肌电场电位与胆囊内置小型人工球囊技术测压，对麻醉豚鼠行在体记录oddi括约肌肌电活动及胆囊内压力变化，并记录干预前后胆汁流量情况，针刺激频率为60r/min，刺激穴位为：单侧“期门”“天枢”“阳陵泉”，每次刺激1 min，选取连续刺激5次的数据用来分析。结果：针刺“天枢”“期门”穴，oddi括约肌肌电频率与幅值与针刺前相比均明显增多(均P<0.05)，胆囊压力幅值无明显变化(P>0.05)；针刺“阳陵泉”，oddi括约肌肌电频率和幅值与针刺前相比明显下降(P<0.01)，胆囊压力幅值明显上升(P<0.01)；针刺“阳陵泉”1 min，胆汁流量有显著性升高(P<0.001)，针刺“天枢”或“期门”1 min，胆汁流量略有升高但是无统计学意义(P>0.05)。结论：1)针刺豚鼠“期门”“天枢”能明显抑制胆囊的运动、促进oddi括约肌的肌电发放，减少进入十二指肠的胆汁流量，而针刺“阳陵泉”能显著促进胆囊的收缩运动、抑制oddi括约肌的肌电发放，促进豚鼠胆汁流量的增加;2)“阳陵泉”的效果要明显于其他穴位，由于“阳陵泉”为本经穴位，因此在本研究中存在明显的循经特异性。

胆囊压力；针刺；肌电；运动功能；oddi括约肌；豚鼠

肝外胆道运动功能障碍类疾病属于中医胁痛范畴，长期的临床实践证实[1-3]，针刺“阳陵泉”“肩井”“胆俞”“期门”等对胆道系统疾病具有良好疗效，随着医疗技术的进步和基础研究的深入，越来越多的证据指出肝外胆道系统的运动功能障碍可能是导致各类胆道系统疾病的重要因素[4-7]。肝外胆道系统的主要观察对象是胆囊和oddi括约肌。正常情况下，胆囊和oddi括约肌的活动相互协调，而在病理情况下，胆囊的功能障碍与oddi括约肌的功能状态息息相关[8]。

本研究在豚鼠生理状态下，采用胆囊内放置人工小型气囊的技术和用金属双钩电极穿过oddi括约肌导出肌电的方法，观察针刺“期门”“天枢”“阳陵泉”对豚鼠胆囊压力和oddi括约肌及胆汁流量的影响，以进一步探讨针刺“期门”“天枢”“阳陵泉”调整肝外胆道系统运动功能的效应及影响因素，为针灸临床提供生理学的实验依据。

1　材料与方法

1.1实验动物成年豚鼠15只，雌雄不限，体重在450～600 g，由北京西山动物养殖场提供，生产许可证号为：SCXF-(京)-2011-0010。动物自购置后先进行适应性饲养，时间为1周，使用标准草料喂养，由于豚鼠体内无法合成充足维生素，故而每周在标准草料之外加入胡萝卜与青菜喂养，标准为其体重的一半/d，动物可自由饮水与摄食，室温为23～25 ℃。动物实验得到中国中医科学院针灸研究所动物实验伦理委员会许可，实验过程中对动物的处置严格遵循2006年中华人民共和国科技部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》。

1.2实验方法穴位定位及操作：穴位定位主要参照“常用实验动物的针灸穴位”之方法[9]、结合采用模拟人体经穴进行豚鼠穴位定位。豚鼠“天枢”穴位于脐中旁开5 mm，操作为直刺进针2～3 mm；豚鼠“期门”穴位于第6肋间隙处，操作为平刺进2～3 mm；豚鼠“阳陵泉”穴位于后三里(膝关节后外侧，在腓骨小头下约3 mm处取穴)上外侧4 mm，操作为直刺进针2～3 mm。以上诸穴采用捻转刺激，频率60次/min，针刺1 min。

实验步骤：10%乌拉坦溶液(4.5 mL/kg)腹腔缓慢推注麻醉，剑突下沿腹正中线做长约8 mm的切口，充分的暴露胆囊，十二指肠和胆总管。胆囊插管：在胆囊底部剪2 mm的小口，将装有生理盐水的测压小囊放入胆囊内，荷叶边结扎切口，手术结固定。由一软橡胶管将小囊与压力换能器(MLT1199)相联，压力换能器的插头插入生物信号放大器；oddi括约肌放置双钩电极，电极连线与十二指肠纵轴平行，电极的另一端通过生物信号放大器，2种信号均输入到PowerLab S/4数据采集系统。术后待动物的状态平稳以后，能记录到稳定的肌电和压力曲线再行针刺操作。Chart5.0记录系统采样频率为200Hz；在线oddi括约肌肌电记录滤波参数为低通10Hz，线下数字滤波低通1 Hz；胆囊压力记录参数为低通2 Hz，线下数字滤波低通1 Hz。

1.3针刺操作针刺方法：豚鼠“天枢”穴位于脐中旁开5 mm，“期门”穴位于第6肋间隙处，“阳陵泉”穴位于后三里(膝关节后外侧，在腓骨小头下约3 mm处取穴)上外侧4 mm，采用捻转行针，频率60次/min，行针1 min。

2　结果

2.1针刺阳陵泉穴对豚鼠oddi括约肌肌电的影响正常豚鼠的oddi括约肌肌电由每隔3～5 s产生的包含1～8个峰电位放电所组成,在安静状态下，括约肌放电较为稀少，但始终是有规则的节律性发放。

针刺干预前，豚鼠的oddi括约肌肌电表现为单发或簇发，频率3～7次/min，平均频率：3.71±1.56(times/min)；最大幅值：16.7 mV，平均幅值：(13.72±2.71)mv；针刺阳陵泉前平均频率为：4.75±0.50(times/min)，平均幅值为：(10.60±0.55)mV,针刺1 min oddi括约肌肌电平均频率3.4±0.55(times/min)(P<0.01)，平均幅值(9.40±0.55)mV(P<0.01)；针刺期门前平均频率为：3.60±0.55(times/min)，平均幅值为：(10.40±0.55)mV,手针刺激1 min，oddi括约肌肌电平均频率4.60±0.55(times/min)(P<0.05)，平均幅值(11.40±0.55)mV(P<0.05)；针刺天枢前平均频率为：4±0.71(times/min)，平均幅值为：(10.40±0.55)mV,手针刺激1 min，oddi括约肌肌电平均频率5.2±0.84(times/min)(P<0.05)，平均幅值(11.20±0.45)mv(P<0.05)。

2.2针刺阳陵泉穴对豚鼠胆囊压力的影响胆囊的压力比较平稳，每分钟有2～5次收缩，呼吸波与胆囊收缩波复合出现。针刺阳陵泉穴干预前，豚鼠胆囊压力平均幅值为(3.2±0.45)mmHg，针刺阳陵泉1 min，观察发现豚鼠胆囊压力幅值上升为4.8±0.84(P<0.01)；针刺期门前，豚鼠胆囊压力平均幅值(3.4±1.14)mmHg，针刺期门1 min，观察发现豚鼠胆囊压力幅值下降为2.8±0.45(P>0.05)；针刺天枢前，豚鼠胆囊压力平均幅值为(3.8±0.84)mmHg，针刺天枢1 min，观察发现豚鼠胆囊压力幅值下降为3.2±0.45(P>0.05)。

图1　针刺前和针刺过程中oddi括约肌肌电的 频率变化情况(n=5)

注：△P<0.01；*P<0.05；针刺激“阳陵泉”穴1 min，oddi括约肌肌电频率和针刺前相比显著减少(P<0.01)；手针刺激“期门”或“天枢”穴1 min，oddi括约肌肌电频率和针刺前相比显著增加(P<0.05)。

图2　针刺前和针刺过程中oddi括约肌肌电的 幅度变化情况(n=5)

注：△P<0.01；*P<0.05；针刺激“阳陵泉”穴1 min，oddi括约肌肌电幅度和针刺前相比显著降低(P<0.01)；手针刺激“期门”或“天枢”穴1 min，oddi括约肌肌电频率和针刺前相比显著升高(P<0.05)。

2.3针刺阳陵泉穴对豚鼠胆汁流量的影响针刺阳陵泉穴干预前，豚鼠胆囊压力平均幅值为10.8±0.84(g/min)，针刺阳陵泉1 min，观察发现豚鼠胆囊压力幅值上升为14.6±0.55(P<0.001)；针刺期门前，豚鼠胆囊压力平均幅值10.2±1.09(g/min)，针刺期门1 min，观察发现豚鼠胆囊压力幅值下降为11±0.71(g/min)(P>0.05)；针刺天枢前，豚鼠胆囊压力平均幅值为10.2±0.84(g/min)，针刺天枢1 min，观察发现豚鼠胆囊压力幅值下降为10±1(g/min)(P>0.05)。

图3　针刺前和针刺过程中胆囊压力的变化情况(n=5)

注：△P<0.01；针刺激“阳陵泉”穴1 min，豚鼠胆囊压力幅度和针刺前相比显著升高(P<0.01)；针刺激“期门”或“天枢”穴1 min，豚鼠胆囊压力幅度和针刺前相比无显著性变化(P>0.05)。

图4　针刺前和针刺过程中胆汁流量的变化情况(n=5)

注：△△P<0.001；针刺激“阳陵泉”穴1 min，豚鼠胆汁流量和针刺前相比显著升高(P<0.001)；针刺激“期门”或“天枢”穴1 min，豚鼠胆汁流量和针刺前相比无显著性变化(P>0.05)。

3　讨论

针刺对急慢性胆道系统疾病及其常见症状具有良好疗效，现代大量临床观察[1-3，10]显示，针刺足少阳胆经“阳陵泉”、足厥阴肝经穴“期门”等对胆道系统疾病具有良好的治疗效果，然而目前依然缺乏相关的效应机制研究。

在本实验中，“阳陵泉”为足少阳胆经上合穴，为本经五输穴，刺之有疏肝利胆之功，早在《黄帝内经》中就已经有关于“阳陵泉”治疗胆病的记载，《灵枢·邪气藏府病形篇》曰：“胆病者，善太息，口苦，呕宿汁，……，亦视其脉三陷下者炙之，其寒热者，取阳陵泉”；“期门”穴是足厥阴肝经之募穴，且为足太阴、厥阴、阴维之会穴，功能健脾理气，疏肝活血，对胆结石症，肝炎、胆囊炎等肝胆病的康复保健具有良好疗效；“天枢”穴为足阳明胃经穴位，位于脐旁两寸，亦为手阳明大肠经之募穴，功善理气行滞。从实验结果而言，针刺胆经上合穴“阳陵泉”穴能有效促进胆汁流量的生成，能抑制oddi括约肌的活动增加胆囊的压力，其针刺产生的效应最为明显，远优于“天枢”和“期门”2个穴位产生的效应；在循经特异性效应的层面来说，本经的穴位其效果要优于相表里的肝经穴位“期门”穴和近端的“天枢”穴，因此，针刺本经的“阳陵泉”穴对胆道系统疾病具有特异性效应，这为肝外胆道系统疾病的治疗提供了有意义的临床参考。

现代医学研究证实，针刺“期门”穴、“天枢”穴、“阳陵泉”穴对oddi括约肌肌电、胆囊压力和胆汁流量的调节主要经由交感和迷走神经协调完成，在消化间期迷走神经参与了oddi括约肌与胆囊协调运动的调控[11]；从神经分布的节段性支配情况来看，支配胆囊运动的交感神经元主要分布在T4-T10脊髓侧角，支配oddi括约肌的交感神经元主要分布在T6-T12脊髓侧角，“天枢”区域的躯体传入信号主要投射到T9-T11，“期门”区域的躯体传入信号主要投射到T3-T6，“阳陵泉”区域的躯体传入信号主要投射到L4-L5，因此，针刺“期门”“天枢”的躯体传入信息与胆囊、oddi括约肌的交感神经支配基本上处在脊髓的同节段或者重叠节段，因此,针刺“期门”“天枢”能有效抑制胆囊活动促进oddi括约肌舒缩。因而可以认为，胆道系统运动可以由针刺刺激引发抑制或者易化，而且抑制和易化都在很大程度上依赖于刺激部位的节段，“天枢”和“期门”的刺激通过Aδ类纤维或者C类纤维传入，在脊髓水平通过激活交感神经反射性抑制胆道系统运动，而来自阳陵泉的针刺冲动，可能通过无髓传入纤维经由脊髓上中枢的整合反射性经由副交感迷走神经传出纤维发挥促进胆道运动和胆汁分泌的作用。

[1]Burduli NM，Raniuk LG.Effects of laser reflex therapy on a motor function of the gall bladder and physical properties of bile in patients with chronic acalculous cholecystitis[J].Ter Arkh，2009，81(2):57-61.

[2]温峰云,李双成,王国明,等.针刺肩井穴对慢性胆囊炎患者胆囊收缩功能影响的随机对照研究[J].针刺研究，2012，37(5):398-402.

[3]王国明,温峰云,李丽霞,等.针刺肩井穴对胆囊收缩功能影响的观察[J].中国针灸，2011，31(10):910-912.

[4]Kline LW，Karpinski E.The Resveratrol-induced Relaxation of Cholecystokinin Octapeptide-or KCl-induced Tension in Male Guinea Pig Gallbladder Strips Is Mediated Through L-type Ca2+Channels[J].J Neurogastroenterol Motil，2015，21(1):62-68.

[5]Chen Y，Kong J，Wu S.Cholesterol gallstone disease：focusing on the role of gallbladder[J].Lab Invest，2015，95(2):124-131.

[6]章琳,董蕾.高胆固醇饮食对胆囊结石形成和胆囊运动的影响[J].西安交通大学学报:医学版,2005,3:260-262.

[7]Woods SE，Leonard MR，Hayden JA，et al.Impaired cholecystokinin-induced gallbladder emptying incriminated in spontaneous “black” pigment gallstone formation in germfree Swiss Webster mice[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2015，308(4):G335-349.

[8]Behar J，Corazziari E，Guelrud M，et al.Functional gallbladder and sphincter of oddi disorders[J].Gastroenterology，2006，130(5)：1498-1509.

[9]He W，Jing XH，Zhu B，et al.The auriculo-vagal afferent pathway and its role in seizure suppression in rats[J].BMC Neurosci，2013，doi：10.1186/1471-2202-14-85.

[10]Walter WA，Curtis HC.Self-administered electroacupuncture provides symptomatic relief in a patient with sphincter of Oddi dysfunction：a patient′s report[J].Acupunct Med，2013，31(4):430-434.

[11]Liu CY，Liu JZ，Zhou JH，et al.TRH microinjection into DVC enhances motility of rabbits gallbladder via vagus nerve[J].World J Gastroenterol，1998，4(2):162-164.

(2016-06-16收稿责任编辑：洪志强)

Effects on Guinea Pig′s Oddi Sphincter, Pressure of Gallbladder, Bile flow When Acupuncturing at GB34

Zhao Jingjun1，Rong Peijing1，Luo Man1，Zhang Jinling1，Li Liang1，Liang Fanrong2

(1InstituteofAcupunctureandMoxibustion,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;2SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuina,ChengduUniversityofTCM,Chengdu610075,China)

Objective: To observe the effects of acupuncturing at “Qimen” (LR14)、“Tianshu” (ST25), “Yanglingquan” (GB34) on pressure of gallbladder, bile flow and motor function of oddi sphincter on guinea pig, so as to explore the efficacy and mechanism of acupuncture on regulating extra-hepatic biliary system movement and its advantages compared with the other different acpoints. Methods: Total 15 adult guinea pigs, no matter male or female, were were divided into LR14 group, ST25 group and GB34 group. The technology of implanted electrodes with double hooks was adopted for electrical detection of oddi sphincter, changes of gallbladder pressure, as well as bile flow. The frequency of acupuncture is 60r/min, acpoints were ST25、LR 14、GB34 for the single side, 1 min every time. And the results were obtained from the continues five time′s statistic. Results: Stimulation at ST25 or LR14 significantly increased the frequency and amplitude of oddi sphincter(P<0.05); but there was no significant decrease in the gallbladder pressure(P>0.05); On the contrary, stimulation at GB34 significantly decreased oddi sphincter and increased the gallbladder pressure(P<0.01). Bile current capacity of gallbladder had no significant change following one minute′s stimulation at the ST25 or LR14, but had significant change following one minute′s stimulation at the GB34(P<0.01). Conclusion: 1)Acupuncture at ST25 and LR14 could obviously inhibit the movement of gallbladder and promote the myoelectricity release of oddi sphincter. Acupuncturing at GB34 can apparently promote the shrinking movement of gallbladder and inhibit the myoelectricity release of oddi sphincter. 2)The effects of acupuncture at GB34 in this study had most significant changes than the ST25 or LR14.

Gall bladder pressure；Acupuncture；Myoelectricity；Motor function；Oddi sphincter; Guinea pig

科技部“973”课题(编号：2012CB518503)——“经穴效应循经特异性靶器官响应的生物学基础研究”，负责人：荣培晶

赵敬军，硕士研究生，研究方向：针灸效应机制，E-mail:tongchengzjj@163.com

荣培晶，研究员，博士研究生导师，研究方向：针灸效应机制，E-mail:drrongpj@163.com

R245

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.08.049