丹参在炮制大生产过程中丹酚酸B的损失情况研究

方欢乐，陈衍斌，卢新义，孙宝平

(1.西安培华学院医学院，西安　710125；2.陕西步长制药有限公司，西安　710075)



丹参在炮制大生产过程中丹酚酸B的损失情况研究

方欢乐1，陈衍斌2，卢新义2，孙宝平2

(1.西安培华学院医学院，西安710125；2.陕西步长制药有限公司，西安710075)

目的考察丹参药材炮制大生产过程中指标性成分丹酚酸B的含量变化及损耗情况。方法进行10批次丹参饮片炮制生产，应用HPLC法，在生产过程各主要工艺点进行跟踪取样，测定丹酚酸B的含量并计算损耗；同时在其中一个批次药材炮制大生产过程中，检测每个工艺环节对丹酚酸B的含量的影响。结果原药材、水洗药材、润透药材和切片4个取样点丹酚酸B的平均含量分别为6.83%，4.72%，4.46%和3.55%，相对原药材的损失情况分别为30.84%，34.59%和47.99%。水洗工艺直接导致丹酚酸B损失22.11%，最终损失高达47.48%。结论严格控制(优化)水洗工艺，可有效保留丹酚酸B的含量，提高丹参的炮制效率。

丹酚酸B；丹参；炮制；损耗

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根茎；具有活血调经、凉血消痈和养血安神的功效[1]；用于胸痹心痛、脘腹胁痛、瘕瘕积聚、热痹疼痛、心烦不眠、月经不调、痛经经闭和疮疡肿痛等症状。丹参的化学成分包括脂溶性有效成分、水溶性有效成分及其他成分，丹酚酸B是主要的水溶性有效成分，被《中国药典》列为丹参含量测定指标之一。丹酚酸B是丹参治疗心血管疾病的主要药效物质基础成分之一[2]，具有抗氧化、抗凝血、抗血栓形成、调血脂及细胞保护等药理作用，同时还具有保护心血管系统、肝脏、肾脏和肺等组织器官、防治糖尿病并发症及抗肿瘤等药理作用[3]。

丹参片是常用的炮制品，《中国药典》[4]规定其加工过程为：除去杂质和残茎，洗净，润透，切厚片，干燥。在饮片炮制时，存在于根皮中的水溶性有效成分丹酚酸B极易损失，李慧芬等[5]对丹参炮制前后丹酚酸B的含量变化进行了研究，陆小华[6]考察了不同炮制方法对丹参药材中丹酚酸B的影响，李懿[7]、闫东晖[8]通过不同实验研究考察了炮制对丹参有效成分含量的影响，不同炮制品中丹酚酸B的含量均明显降低，张喜锋等[9]在建立丹参饮片炮制质量标准的过程中发现，丹参片、酒丹参和醋炙丹参中水溶性成分转移率偏低。在工业化大生产过程中，受到炮制设备、炮制时间等多种因素影响，饮片中有效成分变化情况更为复杂，目前针对丹参饮片工业化大生产中丹酚酸B的含量变化情况还未见报道。本研究通过跟踪10批丹参片产业化大生产中的关键环节(水洗、浸润和切制工艺)，通过大量数据测定及分析，累积多批次丹参饮片中丹酚酸B的含量变化数据，确定丹参药材炮制过程中丹酚酸B的损耗变化规律，为丹参饮片大生产提供理论依据和炮制方法改进建议。

1　仪器与试药

1.1仪器GZX-GFC.101-1-BS型电热恒温鼓风干燥箱(上海博泰实验设备有限公司)；FW200A型高速万能粉碎机，HSYZ-SP型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)；MA30型快速水分测定仪(德国赛多利斯公司)；AR1140型电子天平(美国梅特勒奥豪斯公司)；LC-2010AHT型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；ZSX-PD-3004型切药机(江阴市奔达药化机械设备厂)；010411型带式干燥机(常州市一新干燥设备有限公司)。

1.2试药丹参药材，产地山东，按照2010年版《中国药典》检验，全部合格，批号：20120202，20120203，20120204，20120205，20120206，20120301，20120302，20120303，20120304，20120305，每批5kg；丹酚酸B对照品，批号111562-201110，含量测定用，中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯；水为高纯水；其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1丹参饮片炮制方法参照2010年版《中国药典》一部[4]丹参炮制项下方法进行操作：将丹参药材中的杂质和残茎去除，将去除了杂质和残茎的丹参药材置于洗药机中，迅速用水冲洗药材表面的泥土，冲洗过程约1min，将洗净的药材置于中转物料槽中，加盖，闷润，至药材全部润透，将润透药材用切药机ZSX-PD-3004切厚片，干燥，得丹参饮片。

2.2丹酚酸B含量测定方法

2.2.1色谱条件及系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相；流速为1mL·min-1；检测波长为286nm。理论板数按照丹酚酸B峰计算应不低于5 000。

2.2.2对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品74.1mg，置于50mL量瓶中，加体积分数为70%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为1.482mg·mL-1的对照品储备溶液；精密吸取2mL，置于20mL量瓶中，加体积分数为70%的甲醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.148 2mg·mL-1的对照品溶液，。

2.2.3供试品溶液的制备样品在60±5 ℃干燥后用FW200A高速万能粉碎机粉碎，过3号筛，作为供试药粉。取供试药粉0.2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为75%的甲醇50mL，称定质量，加热回流1h，放冷，再称定质量，用体积分数为75%的甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.4对照品标准曲线的制备精密吸取质量浓度为1.482mg·mL-1的丹酚酸B对照品储备溶液2，2，5，2，2和5mL，分别置于200，100，100，20，10和10mL量瓶中，配制成质量浓度分别为0.014 82，0.029 64，0.074 1，0.148 2，0.296 4和0.741mg·mL-1的丹酚酸B对照品，按照上述色谱条件，依次精密吸取对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品质量浓度为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，得回归方程：Y=12 891 035 X-19 687(r=0.999 9)。结果表明，进样量为0.148 2～7.41μg时，丹酚酸B呈良好的线性关系。

2.2.5精密度实验取丹参药材，按照2.2.3项下方法进行操作，精密吸取质量浓度为0.148 2mg·mL-1的对照品溶液和供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，供试品溶液连续进样6次，测定峰面积，计算丹酚酸B的含量，RSD值为0.52%(n=6)，表明精密度良好。

2.2.6稳定性实验取丹参药材，按照2.2.3项下方法进行操作，分别在0，3，6，9，12和18h测定峰面积，计算丹酚酸B的含量，RSD值为1.02%(n=6)。表明供试品溶液在18h内稳定。

2.2.7重复性实验取丹参药材(批号20120202) 粉末6份，每份0.2g，精密称定，按照2.2.3项下方法进行操作，计算丹酚酸B的含量，结果丹酚酸B的平均含量为6.58%，RSD值为1.09%(n=6)，表明重复性良好。2.2.8加样回收率实验取丹参药材(批号20120202)粉末6份，每份0.1g，精密称定，加入质量浓度为1.482mg·mL-1的丹酚酸B对照品储备液3，4和5mL各2份，按照2.2.3项下方法分别制备供试品溶液，测定丹酚酸B的含量，计算回收率。结果丹酚酸B的平均回收率为99.55%，RSD值为1.23%(n=6)，表明回收率良好。结果见表1。

2.2.9样品测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算丹酚酸B的含量。色谱图见图1。

2.310批丹参炮制生产丹酚酸B的损耗情况跟踪10批丹参饮片大生产，按照2.2项下方法，在4个关键点进行取样。第1个点为打开包装后取样，即原药材；第2个点为丹参药材除去杂质和残茎，快速洗净后取样，即水洗药材；第3个点为润透的丹参药材，即润透药材；第4个点为切厚片、干燥后取样，即丹参饮片。处理4个取样点的样品，测定丹酚酸B的含量，计算相对原药材的累计损失率，结果见表2。

表1加样回收率实验结果

Tab.1Resultsofrecoverytest

取样量/g样品中量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%0.09906.514.44611.03101.5899.551.230.10436.864.44611.2498.440.10757.075.92812.9699.400.10707.045.92812.99100.250.09706.387.41013.7599.390.10056.617.41013.9098.27

图1HPLC图

A.对照品；B.供试品；1.丹酚酸B

Fig.1HPLCchromatograms

A.referencesubstance；B.sample；1.salvianolicacidB

表2丹酚酸B的损耗实验结果

Tab.2LosstestresultsofsalvianolicacidB

批次原药材含量/%水洗药材含量/%累计损失率/%润透药材含量/%累计损失率/%丹参饮片含量/%累计损失率/%201402026.924.4735.404.0841.043.9143.50201402038.175.4832.934.5544.313.7953.61201402046.525.889.825.6713.043.9439.57201402055.944.4525.084.4225.592.8851.52201402066.553.7642.604.2035.883.2051.15201403016.264.0135.944.7024.923.7140.73201403026.504.8924.774.3233.543.7542.31201403037.134.3538.993.3353.303.0157.78201403047.554.6138.944.8935.233.6851.26201403056.715.3021.014.4833.233.6345.90x±s6.82±0.654.72±0.6730.55±10.164.46±0.6034.01±11.193.55±0.3847.73±6.15

注：累计损失率=(原药材含量-样品含量)/原药材含量×100%。

由表2可知，在水洗、润透、切片和干燥的炮制大生产过程中，丹参原药材、水洗药材、润透药材和丹参饮片中丹酚酸B的含量呈递减趋势，同原药材相比丹酚酸B的累计损失量不断增加。由表2可知，4个取样点10批样品的平均含量分别为6.83%，4.72%，4.46%和3.55%。水洗药材、润透药材和丹参饮片与原药材比较，丹酚酸B的损失情况分别为30.84%，34.59%和47.99%。由此可见，在丹参饮片炮制大生产过程中，水洗工艺使丹酚酸B损失量最大。

2.4大生产条件下按照工艺步骤多次随机抽取样品实验跟踪20140305批药材生产过程，针对每个工艺环节进行多次取样，考察在大生产过程中，各个环节丹酚酸B的损耗情况。

打开商品包装后，按照《中国药典》取样原则直接取原药材，为1#样品；原药材拣净杂质，经洗药机清洗后取样，为2#样品；洗净药材闷润1h取样，为3#样品；洗净药材闷润2h取样，为4#样品；洗净药材闷润3h取样，为5#样品；闷润3h，药材润透，开始用切药机切厚片，经带式干燥机在70±5 ℃干燥后取样，为6#样品；闷润4h，切厚片，干燥后取样，为7#样品；闷润5h，切厚片，干燥后取样，为8#样品。每个取样点取样3份，处理各取样点的样品，测定丹酚酸B的含量，计算损耗率，其含量变化见表3。

表3按照工艺步骤多次取样测定结果

Tab.3Testresultsformultiplesamplingbyprocesssteps

取样点丹酚酸B含量/%样1样2样3平均含量/%累积损耗率/%1#6.716.726.806.74±0.05—2#5.305.185.275.14±0.0622.11±1.003#4.674.714.824.73±0.0829.82±0.644#4.484.414.394.43±0.0534.27±1.105#4.124.164.234.17±0.0538.13±0.416#4.254.224.274.25±0.0236.94±0.317#3.883.823.933.88±0.0542.43±0.568#3.633.453.543.54±0.0947.48±1.43

由表3可知，水洗工艺直接导致22.11%的丹酚酸B损失，3#～5#为浸润工艺过程的样品、6#～8#为切制工艺过程的样品。由数据可见，在水洗过程中丹酚酸B的含量损失较大，浸润和切制工艺中丹酚酸B的含量随时间推移而不断损失，随着炮制大生产的进行，最终丹酚酸的累积损耗率高达47.48%。

3　讨论

丹参为常用中药材，饮片用量非常大，丹参饮片与丹参药材中丹酚酸B的含量有明显差异，有效成分的大量损耗导致药效降低和药材资源浪费。通过研究，掌握丹参有效成分在大生产过程中损失的规律，有益于提高丹参饮片中有效成分的含量，是一项非常有意义的课题。

丹酚酸B是丹参发挥疗效作用的主要水溶性成分之一，炮制过程中，成分损失的主要原因有：生产过程中，水洗和浸润需要大量用水，丹酚酸B溶解在水中，随洗药水的排放而流失；丹酚酸B在水中不稳定，而大生产批量大、切片时间长、未切片药材的浸润时间相对延长、含量随分解和氧化等反应发生而不断降低；切制后药材需要进一步干燥，加热过程又导致丹酚酸B的损失。

本研究显示，丹参在炮制生产过程中，水洗工艺使丹酚酸B损失量最严重，结合文献资料，对丹参饮片大生产的炮制工艺提出几条改进建议：①采用抢水洗，缩短药材与水的接触时间，同时减少用水量，以药材洁净为度，能够有效防止有效成分丹酚酸B的流失。②李智等[10]采用气相置换法进行润药，效果明显优于普通方法，此方法可以快速软化药材，软化效果良好，能够真正做到药透水尽。同时，软化后药材的水分低、易控制，有效降低了药材有效成分的损失，生产自动化大大提高了效率。③减少切制工序时间，从而减少药材与水的接触时间，快速地进入干燥工序，防止丹酚酸B的损失。④控制好干燥温度及干燥时间，朱静等[11]、张文芯等[12]研究表明，丹酚酸B对湿热不稳定，在高于70 ℃时丹酚酸B水溶液易受热分解，因此建议应用带式干燥机等快速干燥设备，温度控制在60±5 ℃，缩短干燥时间，能有效降低丹酚酸B的损耗。

掌握丹参有效成分在大生产过程中损失的规律，进行炮制工艺优化，有益于提高丹参饮片中有效成分的含量，提高丹参的炮制效率，节约企业成本，同时推动丹参的产业化大生产。

[1] 龚千峰．中药炮制学[M]．北京:中国中医药出版社，2007:171．

[2] 江苏新医学院．中药大辞典[M].上海：上海人民出版社，1977:478.

[3] 赵先，王婧雯，陆杨，等.丹酚酸B药理作用的研究进展[J].西北药学杂志，2015，30(1)：107-110.

[4] 国家药典委员会.中国药典2010年版[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2013:57.

[5] 李慧芬，张学兰.丹参炮制前后丹酚酸B的含量变化[J].山东中医药大学学报，2009，33(5)：434-435.

[6] 陆小华.不同炮制方法对丹参药材中丹酚酸B的影响[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(2):103-105.

[7] 李懿.炮制对丹参有效成分含量的影响[J].科技资讯，2010，(22):221.

[8] 闫东晖.炮制对丹参有效成分含量的研究[J].当代医学，2011，17(33):150-151.

[9] 张喜锋，蒋传中，王鹏，等.丹参饮片炮制质量标准研究[J].西北药学杂志，2008，23(6)：367-369.

[10]李智，刘桂萍，孙玉红.改进丹参饮片的炮制方法提高丹酚酸B含量[J].中国现代药物应用，2010，4(17)：137-138.

[11]朱静，陈慧清，白鹏，等.丹酚酸B水溶液分解反应的动力学研究[J].中成药，2009，31(4):541-544.

[12]张文芯，玄律，倪健.丹酚酸B在水溶液中的稳定性研究[J].北京中医药大学学报，2009，32(12)：856-858.

Salvianolic acid B losses of Salvia miltiorrhiza in processing production

FANG Huanle1，CHEN Yanbin2，LU Xinyi2，SUN Baoping2

(1.Medical College of Xi′an Peihua University，Xi′an 710125，China；2.Shannxi Buchang Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710075，China)

ObjectiveToinvestigatethelossesofsalvianolicacidBinSalvia miltiorrhizainprocessingprocedure.Methods10batchesofSalvia miltiorrhizaslicesprocessingprocedurewereanalyzedbyHPLCandthecontentofsalvianolicacidBlosswascalculated.ResultsThesalvianolicacidBaveragecontentoftheoriginalmedicinalherbs，watermedicinalmaterials，nourishesherbs，andthesectionfoursamplingpointswere6.83%，4.72%，4.46%and3.55%，respectively，suggestingoriginalmedicinalmateriallosseswere30.84%，34.59%and47.99%，respectively.MultiplesamplingmeasurementresultsshowedthatthewashingprocesswasthekeyprocedureofsalvianolicacidBloss.Thelosswas22.11%andthefinallosswasashighas47.48%.ConclusionTostrictlycontrol(oroptimize)thewashingprocesscaneffectivelykeepthesalvianolicacidB，andimprovetheprocessingefficiencyofSalvia miltiorrhiza.

salvianolicacidB；Salvia miltiorrhiza；processing；wastagerates

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.005

R284

A

1004-2407(2016)05-0455-05

2015-11-04)