一例猪圆环病毒与高致病性猪蓝耳病混合感染的诊断

杜海燕　河南省新乡市动物疫病预防控制中心　453000韩俊伟　河南省新乡市动物卫生监督所　453000

一例猪圆环病毒与高致病性猪蓝耳病混合感染的诊断

杜海燕河南省新乡市动物疫病预防控制中心453000
韩俊伟河南省新乡市动物卫生监督所453000

猪圆环病毒病主要是以圆环病毒2-型为病原，常引起以体质下降、消瘦、腹泻、呼吸困难、免疫抑制和多病原继发感染为主要特征的一类病毒性传染病。高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种高度接触性传染病，以成年猪生殖障碍、早产、流产、死胎，以及呼吸异常为特征。猪蓝耳病和猪圆环病毒均是引起猪群免疫抑制的疾病，二者混合感染可导致更高的发病率和死亡率。2015年10月某猪场送检2头病死猪组织，经实验室诊断为猪圆环病毒和猪高致病性蓝耳病混合感染。

1　发病情况

据畜主反映，发病猪多为初产母猪，死亡率达30%。送检1号猪产前正常，分娩过程3～4小时，产后3天阴道有白色分泌物流出，随后用催产素、阿莫西林、鱼腥草、复合维生素B等治疗无效，8天后死亡。剖检可见整个胸、腹腔有消化道内容物（胃破裂），肝脏、肺脏表面色泽为褐色。2号猪产前2个月出现呼吸采食困难，饮水正常，体温39℃。用氨苄青霉素、阿米卡星、氟苯尼考、强力霉素、林可霉素治疗均无效，于产后13天死亡，耳、四肢、腹部发绀，剖检可见肺部严重出血。所产仔猪现存活10头。

2　病原核酸检测

（1）猪圆环病毒核酸检测。分别取2头病死猪的肺、淋巴结约1g，研磨组织匀浆液，8000rpm离心2分钟，取上清液采用离心柱提取法提取病料DNA样本。利用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的猪圆环病毒通用型（PCV-U）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）对待检病料进行检测。扩增体系根据试剂盒说明进行。标记荧光基团种类报告基团FAM，淬灭基团TAMRA。扩增反应条件：94℃2分钟，然后94℃30秒或55℃45秒采集荧光，40个循环。反应结束后，阴性质控品Ct值在40以上，Ct值小于35的为阳性，Ct值在35～40之间为灰区，需要进行重复试验。重复试验后，Ct值仍在35～40之间，判断为阳性，没有荧光值增长为阴性。结果见图1。

图1　猪圆环病毒核酸检测结果

根据荧光PCR扩增结果可知，阳性对照Ct值15.67，1号样Ct值是24.32和2号样Ct值是30.21，出现特异性荧光曲线，阴性对照未出现特异性荧光曲线。结果显示，送检病料检测到猪圆环病毒病原核酸，表明病死猪感染猪圆环病毒。

（2）高致病性猪蓝耳病病毒核酸检测。分别取病理变化明显的肺、淋巴结研磨组织匀浆液，8000rpm离心2分钟，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中，采用离心柱提取法提取病料RNA。采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的高致病性猪蓝耳病病毒核酸RT-PCR荧光探针法进行。扩增体系和循环参数设置根据试剂盒说明进行。荧光通道选择：检测通道FAM，淬灭通道NONE。检测样本Ct值≤35.0，而且曲线有明显的指数增长，曲线为阳性检测样本Ct值＞35.0，重复一次实验，如果Ct值仍大于35.0，而且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性。检测不到样本Ct值为阴性。结果见图2。

图2：高致病性猪蓝耳病病毒核酸检测结果

根据荧光RT-PCR扩增结果可知，阳性对照Ct 值12.91，1号样Ct值是21.15，2号样Ct值是22.89。出现特异性荧光曲线，阴性对照未出现特异性荧光曲线。结果显示，送检猪体内检测到高致病性猪蓝耳病毒核酸，表明病死猪感染高致病性猪蓝耳病毒。

3　结果讨论

通过对送检病死猪进行猪蓝耳病和猪圆环病毒病原核酸的实验室检测，结果可判断该猪群为猪圆环病毒感染与高致病性猪蓝耳病病毒混合感染。猪场应立即选用相关疫苗进行强化免疫。对病死猪、流产胎儿、环境污染物等进行无害化处理，严格消毒。淘汰重病猪，消除传染源。圆环病毒病和高致病性猪蓝耳病均会造成免疫抑制，使机体抵抗力下降，引起多种病原菌的侵入而发生多重疫病混合感染。因此，应当加强对猪场环境的清洁消毒及饲养管理工作，给猪群服用抗生素，减少其继发的几率。养猪场应加强饲养管理，坚持全进全出，自繁自养，严把引种关，不从疫区或发病猪场引进种猪。防重于治，严格落实猪场防疫措施，对引进猪只及时补免相关疫苗。制定科学免疫程序，针对性地对圆环病毒、高致病性猪蓝耳病及猪瘟等病免疫，以免发生多种疫病混合感染，造成重大的经济损失。