双孢蘑菇菌种生产规范与技术要点

周林，郭尚，萧晋川，赵照林，吴风明，郭宵飞，刘晓钢

(山西省农业科学院食用菌研究所，太原030031)



双孢蘑菇菌种生产规范与技术要点

周林，郭尚，萧晋川，赵照林，吴风明，郭宵飞，刘晓钢

(山西省农业科学院食用菌研究所，太原030031)

食用菌产业大发展，菌种是非常重要的关键，起着巨大的作用。介绍了双孢蘑菇菌种生产基本流程和操作技术，分析了菌种生产过程中的重点技术特点，推荐了双孢蘑菇菌种生产技术规程，供我国特别是山西的广大双孢蘑菇生产者和菌种生产者以及关联业务人员参考应用。

双孢蘑菇；菌种；菌种生产；生产技术规范

随着我国经济实力的大发展，工农业产量产值在世界中占有越来越重要的位置，我国的食用菌产业不断扩大，生产总量达到3000万t左右，在世界食用菌生产量中占据第一位[1]。食用菌生产量的增长，菌种作为生产资料是至关重要的。

双孢蘑菇(Aagaricusbisporus)是主要的食用菌产品之一，微生物学分类隶属担子菌亚门(Basidiomycotina)、伞菌目(Agaricales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇属(Agaricus)的草腐菌，在全国乃至世界上都是占有重要地位的，对食用菌产业发展具有重大的影响。双孢蘑菇的菌种生产是其双孢蘑菇生产的重要环节，是生产量和产品质量的第一关键。菌种生产技术的要求和规范以及菌种产品的质量标准和检验，直接影响食用菌的生产和产品质量。为了实现双孢蘑菇菌种生产的技术规范化，质量标准化，推进我国特别是山西食用菌产业走向现代化，维护菌种生产者、经营者和使用者的合法权益，根据我国国家机关，质量管理部门的有关标准，规范，我们系统地，精准地将双孢蘑菇的菌种生产技术与质量管理标准总结出来，供广大双孢蘑菇企业，栽培农户者，菌种生产者以及管理者参考应用。本文系统地介绍双孢蘑菇菌种生产规范与技术要点。

1　我国双孢蘑菇及其菌种生产的标准规范介绍

我国各级政府以及食用菌管理部门都非常重视食用菌产业的发展和产品质量，制定了很多相关的法规标准，技术规范等，监查管理有关食用菌产业的生产、流通、加工、销售各个环节。双孢蘑菇也有很多相应的国家标准，行业标准以及各省的地方标准和企业标准。我们在制定本技术规范时也参照了很多国家有关标准和双孢蘑菇的有关技术标准，如《中华人民共和国种子法》[2]；《食用菌菌种管理办法》[3]；《GB/T12728-2006 食用菌术语》[4]；《GB/T 23190-2008双孢蘑菇》[5]；《NY/T 528-2010食用菌菌种生产技术规程》[6]；《NY/T 1846-2010食用菌菌种检验规程》[7]；《NY/T 1731-2009食用菌菌种良好作业规范》[8]；《GB/T 19171-2003 双孢蘑菇菌种》[9]；《GB/T 7096-2003 食用菌卫生标准》[10]；《GB/191-1990包装储运图示标准》[11]《GB4789.28-2013》[12]等。在本论文中引用的有关上述标准中的条文，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误内容)或改订版，均不适用本规程。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规程。

2　菌种生产包含的内容与菌种生产的流程

菌种生产所包含的内容一般是菌种生产制作涉及到的，生产条件，设备，人员，技术，操作，质量检验，入库，运输，储藏等全过程。

菌种生产的流程包括，生产场地选择—环境水源整备—厂区布局与厂房设置—设备与设施—生产原料储备—卫生检验与消毒—培养基制成—分装—灭菌—冷却—接种—培养(检验)—成品—检验合格—入库管理。

3　菌种生产场(机关，企业)的责任与义务

菌种场生产食用菌菌种必须经过国家有关管理部门审批合格，持有生产食用菌菌种的资质证明。

生产或出售菌种的企业或科研单位，对所生产的菌种以及出售的菌种质量负有责任，并有义务将所生产的菌种的使用方法和注意事项向菌种使用者说明。

4　双孢蘑菇菌种生产技术与工程管理

4.1菌种生产的产品保证与质量管理检验

产品保证主要是指保证提供经过质量检验合格的具有良好农业生产性能的菌种产品，以及保证所提供的菌种产品出现质量问题时要承担责任。

菌种质量管理与检验是菌种生产单位的重要环节，必须配备专门机构，专业专职技术人员，有职有权，有责任有担当，制定严格的质量管理与检验制度，监督全生产单位坚决执行，行之有效。菌种质量管理检验主要包括厂区环境卫生安全—水源及厂房卫生检验—生产原料检验—生产工序检验—菌种质量检验—菌种生产单位审核—菌种档案。

4.2生产技术人员与质量管理人员

菌种生产人员和菌种质量检验人员必须经过省级人民政府农业主管部门考核合格，并持有上岗证明。

菌种生产单位要建立菌种生产技术人员和质量管理人员的培养计划，并按计划认真培训所有从业人员。新员工上岗前要接受食用菌生产技术以及菌种生产技术，质量检验等教育和培训，并在以后的每一年都进行新技术培训进修。

4.3生产条件与设备

4.3.1生产条件

场地选择：生产双孢蘑菇菌种的厂址要选择地势高、干燥、通风良好、排水畅通、交通方便的地方。

环境卫生要求：厂区周围300m内不允许存在有禽畜舍，垃圾粪便堆积点，污水废水废渣点等污染源。50m内不允许有食用菌生产场地，以及农贸市场。厂区布局与厂房设置：如表1所示。

表1　双孢蘑菇菌种生产厂区布局与厂房设置

4.3.2生产设备与设施，如表2所示

表2　菌种生产常用设备与设施

4.4生产原料与菌种

4.4.1用于双孢蘑菇菌种生产的原料主要是农作物谷粒及农副产品的废弃下脚料如稻秆、麦秆、棉籽皮等，还有其他生物制剂如酵母粉、蛋白胨等。另外还要添加一些化学药品如硫酸镁、磷酸二氢钾等。

4.4.2菌种以及种源的确认。菌种的引种来源要确实可靠，一般应从国家正式科研机关，或具有菌种出售资质的菌种生产单位。要有正式的菌种质量保证书。引种的菌种质量检验及种性鉴定是保证菌种生产质量的第一关健。在菌种生产开始时，要对菌种的质量和种性做正规的栽培试验。

4.5生产技术与良好操作

4.5.1培养原料来源及成分确认。用于双孢蘑菇菌种生产的原料主要是农作物谷粒及农副产品的废弃下脚料如稻秆，麦秆，棉籽皮等，这些原料的作物生产地以及作物的品种不同，其下脚料的物质成分含量也不尽相同，有的作物下脚料可能会含有重金属污染，以及农药残留，会影响到双孢蘑菇菌种的质量。因此在扩繁菌种时要进行确认。应确认农作物下脚料的原产地，作物种类及品中，农药使用情况并进行登记记录。

4.5.2培养基配制与分装

4.5.2.1母种培养基。一般使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，也可以使用综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基(CPDA)，严格掌握pH值。

4.5.2.2原种与栽培种培养基。双孢蘑菇原种和栽培种的生产培养基，可根据当地的原料资源、农作物生产情况以及农药使用状况选用合适的原材料，可以选择以下的培养基配方，注意调配pH值。

腐熟麦秆或稻秆(干)77%，腐熟牛粪粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量62%±1%,pH7.5。

腐熟棉籽壳(干)97%，石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量55%±1%, pH7.5。

谷粒(小麦，谷子，玉米，高粱)98%，石膏粉2%,含水量50%±1%, pH7.5。

4.5.2.3培养基分装。母种培养基的分装量掌握在试管长度的1/4～1/5，灭菌后摆放成的斜面顶端距试管口不少于50mm。原种和栽培种培养基装至距瓶(袋)口不少于50mm，灭菌后不少于45mm。

4.5.3灭菌及灭菌效果检查。母种的培养基配制分装后应立即灭菌;原种和栽培种培养基配制后应在4h内灭菌。母种培养基灭菌0.11～0.12MPa,30min，原种和栽培种培养基灭菌应使用0.14～0.15MPa,2.5h(参照NY/T528-2010[6])。

双孢蘑菇的菌种培养基灭菌应使用高压灭菌，不宜使用常压法。灭菌后药进行灭菌效果检查。母种培养基可直接放入28℃恒温培养，原种和栽培种培养基可先取一点培养基接入PDA培养基中，置于28℃恒温培养，48h后检查有无微生物长出，判断培养基灭菌是否合格。

4.5.4冷却。冷却室在使用前要进行清洁和消毒处理。将灭菌后的原种瓶(袋)或栽培种瓶(袋)放置在冷却室中自然冷却到料温降至适宜温度。

4.5.5接种

4.5.5.1接种室(箱)的清洁灭菌处理。接种室为专门接种用，室内要求清洁无菌，在搬入接种物和被接种物前要卫生清洁处理，然后进行消毒处理。接种超净台(接种箱)药用药物消毒(75%酒精)并用紫外灯照射。

4.5.5.2接种物的灭菌。接种用培养基可以先放入培养室与培养室一起消毒灭菌。菌种在放入超净台里时，要进行表面消毒灭菌。

4.5.5.3接种操作。在无菌室(箱)或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种的品接要单品种操作，中间不得更换品种。一个品种操作完成后，再换另一品种。无论是接种母种还是原种、栽培种，接种时都应从开口处一点接种，避免打孔多点接种。

4.5.5.4接种完成后及时贴好标签、标志，按照品质管理要求，记录品种，接种时间等必要信息

4.5.5.5接种室(箱)后处理。接种室每次使用后，要及时清理清洁，排除废气，清除废物，台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦拭消毒。

4.5.6培养

4.5.6.1培养室灭菌处理。在使用培养室的前两天，采用药物消毒和紫外线消毒。

4.5.6.2培养条件。双孢蘑菇的菌种培养条件应保持适宜的温度24℃±1℃，保持空气相对湿度在75%以下，要求通风良好，避免直射阳光。

4.5.6.3培养期的检查。各级菌种培养期间应定期检查，按照本标准的要求以及制种单位的管理制度进行检查，及时拣出不合格菌种，并做好检验记录作为菌种质量管理档案资料。

4.5.7成品检验。培养结束后进行产品的最终检验。贴好标签、标志、接种日期、培养日数等，做好登记。

4.5.8入库管理。入库之前应确认产品质量合格，并做好入库登记。

母种一般在5℃±1℃冰箱中贮存，保藏期不超过90天。原种应尽快使用，在5℃±1℃下贮存，保藏期不得超过40天。短期储藏可在温度24℃±1℃、清洁、通风、干燥(相对湿度70%～75%)、避光的室内存放，但不应超出10天。栽培种应尽快使用，在温度24℃±1℃、清洁、通风、干燥(相对湿度70%～75%)、避光的室内存放谷粒种不超过10天，其余培养基的栽培种不超过20天。在5℃±1℃下可贮存90天。

[1]张俊飚，李波. 对我国食用菌产业发展的现状与政策思考 [J].华中农业大学学报(社会科学版)，2012(5)：13-21.

[2]中华人民共和国种子法.

[3]中国农业部.食用菌菌种管理办法(农业部令2015年第1号修订) [EB/OL].http://www.moa.gov.cn，20150506-4581023.htm，2015-05-06.

[4]GB/T12728-2006, 食用菌术语[S].北京：中国标准出版社，2007.

[5]GB/T 23190-2008，双孢蘑菇[S]. 北京：中国标准出版社，2008.

[6]NY/T 528-2010,食用菌菌种生产技术规程[S]. 北京：中国标准出版社，2010.

[7]NY/T 1846-2010,食用菌菌种检验规程[S]. 北京：中国标准出版社，2010.

[8]NY/T 1731-2009,食用菌菌种良好作业规范[S]. 北京：中国标准出版社，2009.

[9]GB/T 19171-2003,双孢蘑菇菌种[S]. 北京：中国标准出版社，2003.

[10]GB/T 7096-2003,食用菌卫生标准[S]. 北京：中国标准出版社，2003.

[11]GB/191-1990,包装储运图示标志[S].北京:中国标准出版社，1990.

[12]GB4789.28-2013,食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求[S].北京:中国质检出版社，2014.

Practice and Technology Point for Agaricus bisporus Spawn Production

Zhou Lin, Guo Shang, Xiao Jinchuan, Zhao Zhaolin,Wu Fengming,Guo Xiaofei, Liu Xiaogang

(Shanxi Provincial Academy of Agricultural Sciences, Institute of Edible Fungi, Taiyuan 030031)

The spawn is very important for development of edible fungus industry.This paper introduces the basic process and operation technology ofAgaricusbisporusspawn production, and analyses key technology in the process of producing.It is recommended that the technical specification ofAgaricusbisporusspawn production, and offers reference for the large number ofAgaricusbisporusproducer and the related service personnel.

Agaricusbisporus;Spawn; Spawn production; Technical specification for production

2016-06-12

2014年度山西省煤基重点科技攻关项目(FT2014-03)子项目“食用菌产品质量保证体系构建与研究”的阶段性研究成果

周林(1958-)，男，博士，主要从事食用菌资源及菌根食用菌共生机理研究，食用菌生产技术与产品质量保证体系研究，E-mail：nkysyj301@126.com。

S646.1+1

B

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.05.017