实验器具污染对酶抑制率法检测农药残留的影响

□ 李肖霞　禅城区张槎街道农产品检测和动物防疫检疫站

实验器具污染对酶抑制率法检测农药残留的影响

□ 李肖霞禅城区张槎街道农产品检测和动物防疫检疫站

酶抑制法是现阶段常用的有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测方法，具有检测速度快、成本低、操作简单的优点，得到了广泛应用，并已成为蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药快速检测的国家标准方法。而在实际操作中实验器具重复使用造成的污染往往会导致检测结果出现假阳性，因此为弄清样品污染的原因，对该实验器具的污染情况进行检测，并对需要注意的环节进行分析，以期对今后从事残留分析的同行有所帮助。

材料与方法

仪器与试剂

1仪器

全自动/高感度农药残留速测仪（台湾绿辉）、超声波清洗仪（上海睿祺电子设备有限公司）。

2试剂

农药残留检测试剂盒（台湾绿辉）、敌敌畏（佛山市大兴生物化工有限公司）。

实验器具中污染物的提取

本实验仅针对重复使用的实验器具。在做农药残留试验时，前处理用到镊子、剪刀、平底小试管，检测时用到反应盘（96孔），因此通过不同方法对这些器具进行清洗，再对农药残留情况进行检测。

1镊子、剪刀

取10个，每个用2 mL农药残留缓冲溶液反复冲洗，收集冲洗液，待测定。

2平底小试管

取10个，每个用2 mL农药残留缓冲溶液荡洗内壁，收集荡洗液，待测定。

3反应盘

取10个反应盘，每个用2 mL农药残留缓冲溶液反复冲洗反应孔，收集冲洗液，待测定。

实验器具清洗方法对农药残留祛除效果的考察

主要考察实验室常用的2种清洗方法。先取0.5 mL敌敌畏，加入5 000 mL自来水，混匀。取镊子、剪刀、平底小试管和微孔板，浸泡10 min后取出，晾干，作为阳性实验器具。按以下方法清洗。

1方法1

取镊子、剪刀、平底小试管和反应盘各10个，先用自来水反复冲洗5次，然后置于5 000 mL自来水中，加入10 g洗衣粉，浸泡10 min，取出用毛刷刷洗（反应盘禁止刷洗），然后用自来水冲洗5次，再用蒸馏水冲洗3次，于40 ℃恒温干燥箱中烘干。按照1.2.1、1.2.2、1.2.3项下方法制备污染物提取液。

2方法2

取镊子、剪刀、平底小试管和反应盘各10个，先用自来水反复清洗5次，然后置于盛有4 000 mL蒸馏水的超声波清洗机中，加入8 g洗衣粉，超声清洗15 min，取出用自来水冲去泡沫，再次用蒸馏水重复超声清洗2次，每次5 min，于40 ℃恒温干燥箱中烘干。按照1.2.1、1.2.2、1.2.3项下方法制备污染物提取液（注意：反应盘应单独清洗）。

检测

1准备

试剂盒取出放置回温，按要求用蒸馏水配备缓冲液、酵素和混合剂待用。

2检测

按试剂盒方法进行检测：于反应盘内依次加入50 μL样品待测液，50 μL酵素，静置反应3 min，加入50 μL混合液，同时用缓冲液代替样液作对照，于405 nm波长下读取结果。

结果

检测结果见表1、表2。可以看出，经方法1清洗后，大部分器具的农药残留抑制率（标准值50%）仍然较高，其中剪刀和反应盘检出了农药残留阳性，并且反应盘由于不能刷洗所以残留量较高。经方法2清洗后，无器具检出农药残留阳性，抑制率也较方法1降低，但清洗后的实验器具也仍有农药残留，说明清洗方法未能将农药残留彻底去除。

表1　方法1的阳性检出率（%）

表2　方法2的阳性检出率（%）

讨论

从试验结果来看，清洗不干净会使实验器具残留农药，由此产生的污染可对酶抑制率法检测农药残留试验产生干扰。首先，镊子、剪刀、平底小试管上残留的农药，在样品提取过程中，可将样品严重污染。其次，在样品检测过程中，反应盘上的有机磷农药经过累加后，可造成抑制率增大。因此，在做农药残留的检测时，实验样品就容易出现假阳性。

由实验可见，超声波清洗方法对农药的祛除效果较好，但仍然有农药残留。因此建议今后应用酶抑制率法做农药残留分析最好用一次性实验器具。如果要重复使用，应使用大功率的超声波清洗机，若有检出阳性样品，应增加清洗时间，因为清洗时间越长，超声波功率越大，气泡越大对有机磷去除效果越好。