高效液相色谱法测定糕点中丙酸钠、丙酸钙的不确定度评定

□ 吴佳佳　瑞安市食品检验检测中心

高效液相色谱法测定糕点中丙酸钠、丙酸钙的不确定度评定

□ 吴佳佳瑞安市食品检验检测中心

材料与方法

（1）检验依据：《食品中丙酸钠、丙酸钙的测定高效液相色谱法》（GB/ T 23382-2009）。

（2）检验仪器：高效液相色谱仪Varian920/940-LC二极管阵列检测器。色谱条件：色谱柱C18 4.6 mm×250 mm 5μm不锈钢柱；流动相为1.5 g/ L磷酸氢二铵溶液，用1 mol/L磷酸溶液调pH2.7~3.5（使用时配制），经0.45 μm微孔滤膜过滤；流速1.0 mL/ min；柱温25℃；进样量20 μL；波长214 nm

（3）试剂:丙酸标准样品。

（4）样品处理：称取5 g样品在容量瓶中，20 mL和0.5 mL 1mol/L磷酸溶液，进行超声，用1mol/L磷酸溶液调pH为3，用超纯水定容，经0.45 μm微孔滤膜过滤后进行测定。

（5）标准溶液配制。称取丙酸0.05 g，用超纯水定容至25 mL。

数学模型

X——样品中丙酸的含量，g/kg；C0——标准使用液的浓度，mg/mL；

A1——样品中丙酸的峰面积mv·s；m——样品的重量，g；

V——样品定容体积，mL；A0——丙酸标准使用液的色谱峰面积,mv·s。

计算标准不确定度各分量

标准曲线拟合的不确定度U1rel

空白和标准系列分别做一个平行，空白调零，它包含了峰面积重复测量产生的不确定度，仪器数据处理系统引入的不确定度和标准溶液进样量及曲线拟合相关性不确定度，测定结果见表1。

用最小二乘法拟合直线，利用线性回归方程求出曲线y=0.2897x-0.0915，a=-0.0915，b=0.2879,峰面积标准偏差：

表1　标准曲线拟合相关数据

测量时，被测样品测量两次，故p=2，设平均值为Xpj，根据吸光度平均值测得样品溶液中最佳丙酸含量Xpred=3.02 g/kg。

相对标准不确定度：

U1rel=0.001406/3.02=0.000486

标准物质的相对不确定度U2rel

丙酸标准样品（纯度98.3%），从标准物质证书上查得相对扩展不确定度为1.0%，k=2，U2rel=1.0%/2=0.0050。

标准样品称量引起的相对不确定度U3rel

用0.1 mg的电子天平称取样品4.757×102mg，按检定证书给出的在95%的置信概率时为±0.1 mg，按矩形分布，一次称量测定引起的不确定度为：0.1/=0.058 mg，相对标准不确度：

U3rel=0.058/4.757×102=1.2×10-4

标准溶液制备引起的不确定度U4rel

相对标准不确定度：

U4rel=0.023/25.0=0.00092

样品称量引起的不确定度U5rel

相对标准不确度：

U5rel=0.0082/5.09=0.0016

样品溶液制备引起的相对标准不确定度U6rel

（1）50.0 mL容量瓶体积的不确定度分析Ucrel。①50.0mL容量瓶体积的不确定度，查检定证书给定的为±0.05 mL，按三角分布，换算成标准偏差为0.05/=0.041；②容量瓶的变动性，查检定证书标准偏差为0.020 mL。以上两项合成得：

相对标准不确定度：

Ucrel=0.053/50.0=0.0011

（2）样品处理不确定度：

样品处理液峰面积重复性引起的标准不确定度U7rel

1峰面积重复测量产生的不确定度

通过重复进样进行评定，它包含进样量的不确定度，测试数据见表2。

2仪器数据处理系统引起的不确定度

目前，应用于液相色谱仪峰面积处理的最大误差为0.2%～1.0%，取1.0%，则该峰面积的相对不确定度为：

3样品处理液峰面积重复性引起的不确定度：

样品均匀性和处理过程产生的不确定度U8rel

对同一样品进行多次重复测定，其重复实验结果见表3。

表2　样品重复进样6次测定结果

表3　样品6次平行处理测定结果

检测食品中丙酸钠、丙酸钙含量不确定度

计算扩展不确定度

取包含因子k=2，则相对扩展不确定度：

Urel=2×Urel=0.0194=0.0388

根据实验平均值测得最佳丙酸估计值为3.02 g/kg，扩展不确定度：

U=C×Urel=3.02×0.0388=0.117

测量结果的不确定度报告

丙酸含量：3.02 g/kg，标准不确 定 度0.117 g/kg； 丙 酸 含 量：（3.02±0.117）g/kg；k=2。

吴佳佳（1989-），女，浙江省温州人，本科，助理工程师。研究方向：食品检验。