Roche Cobas 501生化分析仪血清肌酐分析测量范围的验证

陈永传,崔亚利，李　艳，任飒爽

(1.北京善方医院检验科　100027；2.北京丰台医院检验科　100071)



Roche Cobas 501生化分析仪血清肌酐分析测量范围的验证

陈永传1,崔亚利2△，李艳1，任飒爽1

(1.北京善方医院检验科100027；2.北京丰台医院检验科100071)

目的通过对血清肌酐分析测量范围(AMR)的验证，探讨临床实验室如何按照国际标准要求进行生化分析仪定量检测项目分析测量范围的验证，保证检验结果准确、可靠。方法采用酶法在Roche Cobas 501生化分析仪上检测7个浓度水平美国病理学家协会(CAP)线性范围能力测试样品，这7个样品靶值涵盖厂家说明书标示肌酐分析测量范围低、中、高值，每个样品检测两次取其均值，计算其与靶值的偏倚。另外参照美国临床和实验室标准协会(CLSI )指南文件 EP6-P 的要求，收集含高值肌酐的新鲜患者血清，按一定比例混合、离心，计算混合物的浓度并将之作为高值样品(H)，与经同样处理获得的低值样品(L)分别按 5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的关系配制，形成系列样品，在Roche Cobas 501 生化分析仪上对各样品的肌酐进行检测，每个样品检测4次，数据进行回归分析。结果7个水平的CAP样品与靶值的偏倚均小于北京善方医院检验科设定的允许误差±7.5%[(1/2×TE)%]。新鲜患者混合血清样品回归方程为Y=0.988 6X+16.614，b=0.988 6，介于0.97～1.03，截距a与0经t检验，ta0.05，说明截距与 0 无明显差异，回归直线事实上通过0点。结论厂家说明书标示的血清肌酐分析测量范围验证通过，实验室可以采用。

肌酐；定量检测；分析测量范围；验证

分析测量范围(AMR)是指一种方法不需要经过任何稀释、浓缩或者其他非常规检测步骤的预处理，直接测量标本得到分析值的范围[1]。AMR在试剂说明书上一般都会标示，但由于温、湿度等实验条件不同，每个临床实验室都应该对厂家说明书标示的AMR进行验证，如有不符，应及时调整[2]。美国《临床实验室修正法案最终法规》、 ISO 15189 医学实验室认可标准、美国病理学家协会(CAP)的认可标准[1-4]，均要求实验室对引进或改变的检测系统做性能验证后方可应用于常规工作，而性能验证中的一个重要指标就是对定量检测系统的AMR进行验证[5]。本文以血清肌酐为例，报告北京善方医院检验科对在Roche Cobas 501生化分析仪上定量检测项目进行的AMR验证。

1　材料与方法

1.1AMR验证材料CAP线性范围能力测试样品LN2-B 2013，共7个水平(LN-28、LN-29、LN-30、LN-31、LN-32、LN-33、LN-34)。另外，收集高浓度肌酐的患者新鲜血清，要求外观澄清，无溶血、脂血，浓度接近或超过厂家提供的分析测量范围上限，将几份血清混和离心，形成高值样品(H)；另外收集低浓度肌酐的患者新鲜血清，同上处理形成低值样品(L)。

1.2仪器与试剂Roche Cobas 501生化分析仪。校准品：Roche原装配套CFAS。质控品：Roche原装配套生化多项质控品，两个水平。试剂：Roche原装配套肌酐试剂，试剂盒标明其分析测量范围为5～2 700 μmol/L。

1.3验证方法定标通过，检测质控在控后，进行AMR验证品的检测，将7个水平的CAP验证品各检测两次，取其均值，计算其与靶值的偏倚[6]。将收集的患者新鲜血清混合样品 H 和 L分别按 5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的关系各自配制，形成系列样品。将系列样品1 d内做2次测定，第1次从低浓度到高浓度，每个样品做2次重复测定；第2次从高浓度到低浓度，每个样品做2次重复测定。每个样品共检测4次。记录结果，将结果进行统计分析。具体计算方法参照 EP6-P文件[7]。采用平均斜率来确定高值样品应含有的待测物的值，然后依照试验样品配制稀释关系，推算出不同样品中应具有的待测物的值[8]。这些值成为分析测量范围的预期值(X)，每一样品的检测均值减去低值样品的检测均值为实测值(Y)。

1.4统计学处理用SPSS 20.0统计软件进行方差分析、线性回归分析以及t检验，计量资料用Duncan检验判定组间差异。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1CAP AMR验证物检测结果选取CAP 7个验证物对肌酐的测量范围进行验证，结果如表1。每个验证物测量的均值与已知的靶值间差异均无统计学意义(P>0.05)。

表1　　CAP 样品AMR验证物检测结果

2.2CAP验证物的均值与靶值间相关性分析验证物的均值与靶值间相关性显著，这反映两者的测量具有较好的一致性(图1)。

7个水平的CAP AMR验证物的检测值与靶值的偏倚均在可接受范围±7.5%[(1/2×TE)%]，验证物浓度范围覆盖厂家说明书标示的血清肌酐分析测量范围(5～2 700 μmol/L)，验证通过，厂家说明书标示的AMR本实验室可以采用(图2)。

2.3患者新鲜血清混合样品验证物结果以X表示各样品的预期值，Y表示各样品的实测值，利用SPSS 20.0统计软件得出回归方程Y=0.988 6X+16.614，r2=0.999 7(图3)。斜率b=0.988 6，接近1(介于0.97～1.03)；截距a与0经t检验，ta=1.250 3，t0.05=1.734，ta0.05，差异无统计学意义，说明截距与0无明显差异，回归直线事实上通过0点。 据此，可以计算得出Roche Cobas 501生化分析仪肌酐分析测量范围为4.25～2 739.18 μmol/L，覆盖厂家提供的分析测量范围5～2 700 μmol/L，验证通过，厂家说明书标示的AMR本实验室可以采用。

图1　　CAP样品均值与靶值的相关性分析

图2　　CAP样品AMR验证物检测偏倚图(%)

图3　　　　　患者新鲜血清混合样品肌酐分析测量范围验证散点图

3　讨　　论

AMR验证是临床实验室质量管理中的重要环节，每个临床实验室都应对厂家声明的AMR进行验证，如有不符，应及时调整。因为当检测值超出AMR，被测物质的检测值与实际浓度可能不存在线性关系，测量结果不可靠。对于患者标本而言，只有当检测值落在AMR(或者可以通过稀释、浓缩标本使检测值落在AMR)时，其结果才能报告。当检测值在AMR之外，其结果应报告为“小于”或者“大于”AMR限制阈[1]。用于AMR验证的物质应具有合适的基质，北京善方医院检验科选用CAP线性范围能力测试样品和患者新鲜血清混合样品，尽量减少基质效应影响。用于AMR验证的物质必须覆盖低、中、高各浓度，至少需要4个以上验证品，验证过程应形成文件[9-11]。

当开始应用一种新方法时，就有必要对该方法进行AMR验证，如果某种方法是全点定标(3点以上)，则之后无需再进行AMR验证，但如果是一点或者两点定标，则此后至少每6个月应再验证一次[1]。当不可获得CAP或其他权威机构验证标本时，实验室可使用患者新鲜血清混合样品进行AMR验证，如上文所述，所使用验证品不同时验证过程也不尽相同。

每个实验室都应规定可接受的质量指标，对于CAP标本 AMR验证的可接受偏倚，参照CAP能力验证线性评估的允许偏倚，本室采用1/2×美国临床实验室改进修正法案规定的允许总误差。对于患者新鲜血清混合样品AMR验证的可接受质量指标，可参照行业标准或相关文献设定[12]。

本研究中CAP验证品以及患者新鲜血清混合验证品测量值与靶值(或预期值)间无明显差异，具有较好的相关性，且偏倚范围、差异都在可接受范围内。这反映厂家说明书标示的血清肌酐在Roche Cobas 501生化分析仪上的分析测量范围验证通过，厂家说明书标示的AMR本实验室可以采用。

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Verification of analytical measurement range of serum creatinine detected by Roche Cobas 501 Biochemistry Analyzer

CHENYongchuan1,CUIYali2△,LIYan1,RENSashuang1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingSanfineHospital,Beijing100027,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingFengtaiHospital,Beijing100071,China)

ObjectiveTo investigate how the clinical laboratory conducting the verification of analytical measurement range(AMR) of quantitative items detected by the biochemical analyzer according to the requirements of the international standards by verifying the serum creatinine AMR for ensuring the accuracy and reliability of detection results.MethodsThe enzyme method was adopted to detect the 7-concentration levels test specimens of CAP linear range proficiency test on the Roche Cobas 501 biochemical analyzer.These 7 specimens target values covered the low,middle and high values of creatinine AMR marked by the manufacturer′s instructions.Each specimen was detected twice and the mean value was taken,then the bias between the mean value and target value was calculated.In addition,referring to the requirements of CLSI guiding document EP6-P,the patients′ fresh serum containing high value creatinine was collected,then mixed with certain proportion and centrifuged.The mixture concentration was calculated and served as the high value specimen(H),and the low value specimen was obtained by the same treatment.Then the high and low value specimens were dispensed with the relations of 5L,4L+1H,3L+2H,2L+3H,1L+4H and 5H and formed the series specimens.The creatinine levels in each specimen was detected on the Roche Cobas 501 biochemical analyzer,each specimen was detected 4 times.The obtained data were performed the regression analysis.ResultsThe bias of 7-level CAP specimen and target value was less than the allowable error ±7.5%[(1/2×TE)%] set by the clinical laboratory of the Beijing Sanfine Hopsital.The regression equation of fresh mixed serums from patients wasY=0.988 6X+16.614,b=0.988 6,between 0.97-1.03,intercept a and 0,ta0.05,which showed no significant difference between intercept and 0,the regression line was through 0 point in fact.ConclusionThe verification of creatinine AMR marked by the manufacturer′ s instructions is passed,which can be adopted by the clinical laboratory.

creatinine;quantitative measurement;analytical measurement range;verification

陈永传，男，主管技师，主要从事临床生化研究。△

，E-mail:chenyc717@126.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.027

A

1673-4130(2016)16-2275-03

2016-04-01

2016-06-18)