免疫荧光法检测阴道加德纳菌的方法学评价

丁亚利，梁晶晶，薛新娜，卢丽娟，曹　婷，莫绍伶

(广东省东莞市中医院检验科　523000)



免疫荧光法检测阴道加德纳菌的方法学评价

丁亚利，梁晶晶，薛新娜，卢丽娟，曹婷，莫绍伶

(广东省东莞市中医院检验科523000)

目的探讨运用免疫荧光法检测阴道加德纳菌(GV)的临床应用价值。方法选取2015年4～12月进行细菌性阴道炎检测的2 612例患者作为研究对象，每例患者取双份阴道分泌物标本，分为两组，观察组采用免疫荧光法进行检测，对照组采用分离培养法进行检测，分析免疫荧光法检测GV的敏感度、特异度、准确度以及阳性检出率。结果免疫荧光法检测GV的敏感度为94.31%，特异度为90.75%，准确度为91.20%；分离培养法阳性检出率为34.99%，免疫荧光法阳性检出率为39.01%，两者比较，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论免疫荧光法检测GV具有灵敏度高、特异性强、阳性检出率高、诊断时间短的优点，适用于临床检测。

阴道加德纳菌；免疫荧光法；分离培养法

细菌性阴道病(BV)是育龄妇女最常见的阴道感染性疾病，其发病率约18%[1]。Marrs等[2]研究发现，阴道加德纳菌(GV)是引起BV的主要病原体之一。GV感染不仅引起阴道炎、尿道炎，还引起早产、低体质量儿、绒毛膜炎、羊水感染、子宫内膜炎、急性输卵管炎、手术后感染[3]和男性不育[4]，GV感染还可以通过性活动传播，被称为第三代传染病[5]。GV感染产生的不良后果，已严重危害妇女健康，影响家庭和谐，成为严重的社会问题。目前GV感染的常规检测方法有革兰染色找线索细胞法、分离培养法。因线索细胞的识别受显微镜的质量、标本的采集以及操作者的经验等诸多因素影响，主观性强，因此革兰染色法准确率并不高；分离培养法虽作为GV感染检测的金标准，但GV生长缓慢，24～48 h后见针尖大小菌落，耗时长，目前在临床较少用；因此有必要对GV感染做出快速、准确、有效的诊断。本研究中采用免疫荧光法与分离培养法进行比较，确定免疫荧光法检测GV的敏感度、特异度等临床技术指标，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取本院2015年4～12月在本院进行细菌性阴道炎检测的2 612例患者作为研究对象。年龄16～71岁，平均(31.5±5.3)岁。用无菌棉拭子取女性阴道后穹隆分泌物两份，一份采用免疫荧光法检测，另一份采用分离培养检测。

1.2仪器与试剂荧光显微镜(德国莱卡仪器有限公司)，水浴箱(常州中捷试验仪器制造有限公司)，GV选择性平板(江门凯林)，马尿酸盐试剂(广东环凯生物科技有限公司)，茚三酮试剂(广东环凯生物科技有限公司)，GV免疫荧光法检测试剂盒(深圳市迈科龙生物技术有限公司，批号20150321)。

1.3方法

1.3.1对照组采用分离培养法将采集的标本直接涂抹接种于GV选择培养基上，置CO2培养箱培养24～48 h后观察结果，挑取可疑菌落做革兰染色及生化鉴定，挑取一接种环实验菌加入1 mL马尿酸试剂中，37 ℃ 2 h，滴入5滴茚三酮试剂，10 min内观察颜色变化，变成蓝色为阳性；结合涂片镜检找到革兰小棒状杆菌，临床即可报告检出GV[6-7]。

1.3.2观察组采用免疫荧光法将标本轻缓涂抹在载玻片上，充分晾干，加50 μL无水乙醇固定10 min，自然晾干，使用移液器及一次性吸嘴汲取5 μLGV免疫荧光试剂，均匀滴加在玻片涂样处，置于37 ℃水浴箱孵育30 min，用去离子水或蒸馏水缓缓冲洗玻片多次，每次5～10 s，再将玻片自然晾干。用合适的荧光显微镜进行阅片，在100×物镜下寻找发苹果绿色荧光的典型细杆形GV。发现10个及以上苹果绿色典型细杆形GV即为阳性。发现完整暗红色上皮细胞，且未发现可定义为阳性的典型特异性染色即为阴性[8]。

1.4统计学处理所有数据采用SPSS16.0软件进行分析，计数资料采用率表示，两组间的比较采用χ2检验。计算免疫荧光法检测GV的敏感度、特异度、准确度和阳性检出率。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1两种方法的检测结果见表1。免疫荧光法阳性1 019例，假阳性157例；免疫荧光法阴性1 593例，假阴性52例。两种方法学间差异有统计学意义(P<0.05)。

表1　　两种方法检测结果对比(n)

2.2免疫荧光法诊断效能本研究中，免疫荧光法诊断敏感度94.31%(862/914)，特异度90.75%(1 541/1 698)，准确度91.20%(2 403/2 612)，提示此方法具有较好的诊断效能。

2.3两种方法检测的阳性率免疫荧光法与分离培养法阳性检出率分别为39.01%(1 019/2 612)和34.99%(914/2 612)，两种方法检测的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，说明免疫荧光法具有更高的阳性检出率。

3　讨　　论

GV是一类革兰阴性或阳性的短杆菌、厌氧、嗜血、生长缓慢、培养困难、培养环境和设备要求较高，再加上临床上不正规的应用抗生素，导致细菌的生长受到抑制，分离培养阳性检出率较低。本次分离培养法阳性检出率(34.99%)与免疫荧光法阳性检出率(39.01%)比较，差异有统计学意义(P<0.05)。因此分离培养法临床一般不采用，主要用于科研和新方法的方法学评价标准。

免疫荧光法是将不影响抗体活性的异硫氰酸荧光素(FITC)标记在GV单克隆抗体上，GV抗原与GV抗体特异性结合，形成抗原-抗体-荧光素结合物，此结合物在荧光显微镜495 nm波长激发光照射下发出苹果绿色荧光，检测特异的绿色荧光[9]，此标记技术增加了检测的敏感度，检测过程只需1 h，且受外界干扰少；而分离培养检测过程耗时48～72 h，干扰因素较多。本研究选取国际确认的GV检测金标准——分离培养法作为标准方法，对2 612例患者进行双份标本平行试验，研究结果显示：免疫荧光法敏感度高94.31%、特异度强90.75%、准确度高91.20%。表明免疫荧光法检测GV敏感度高、特异性强、检测周期短，外界干扰少。此检测技术的准确性、快速性和有效性等优点适合临床诊断，具有极大推广意义。

本研究中，采用免疫荧光法检测GV与分离培养法对比，得到了较好的效果：免疫荧光法阳性1 019例，假阳性157例，免疫荧光法阴性1 593例，假阴性52例，阳性检出率39.01%。Abdelaziz等[10]报道在BV感染患者中GV检出率为87.45%，健康女性检出率26.24%。国内黄伟忠等[11]报道680例受检妇女中，免疫荧光法GV检出率41.92%；本研究中免疫荧光法GV检出率39.01%(1.019/2.612)，与该报道基本相符。

总之，本研究采用免疫荧光法和分离培养法对BV病原菌GV进行平行检测，以分离培养法为标准，验证了免疫荧光法检测GV的高敏感度、高特异性强、高准确度，证明了免疫荧光法检测GV的准确性、快速性和有效性。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.056

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1673-4130(2016)16-2337-02

2016-02-28

2016-07-17)