黄体酮对妊娠绒毛表达肝素结合性表皮生长因子的影响

刘素菊,刘卫艳,兰红贺,马慧娟，李　杰

(一汽总医院 妇产科,吉林 长春130011)



黄体酮对妊娠绒毛表达肝素结合性表皮生长因子的影响

刘素菊,刘卫艳,兰红贺,马慧娟，李杰*

(一汽总医院 妇产科,吉林 长春130011)

早孕期流产是产科并发症之一，影响者很多女性的生殖健康。其中自然流产率为10%到15%，且80%为早期流产，40%-60%为不明原因的流产。流产有着较为复杂的病因，如环境饮食因素、血型不合、生殖道的解剖畸形、胚胎染色体异常、免疫因素、感染性疾病、内分泌失调等。HB-EGF是近年来发现的一种肽类生长因子，该因子与早期妊娠及女性生殖等关系密切。据研究HB-EGF与妊娠着床相关，导致妊娠子宫内膜容受性差，从而引起胚胎种植失败，使临床妊娠率降低[1]。据报道肝素结合性表皮生长因子为着床窗期必须的重要参与因子，该因子在着床期可直接进行调控胚胎着床[2]。Stavreus-Evers等[3]研究了人类胚胎种植窗期子宫内膜中HB-EGF和胞饮突的关系，证实肝素结合性表皮生长因子参与者人类胚泡着床时受精卵的黏附和穿透，并为重要参与因子之一。另有报道，肝素结合性表皮生长因子增进间质细胞及子宫内膜细胞增殖，促进分泌中期的高表达及介导胚泡着床，促使滋养层细胞的生长、分化，进而侵入子宫内膜，维持胎盘的形成和成功妊娠[4]。综合上述，可见在妊娠早期，肝素结合性表皮生长因子扮演者十分重要的角色。本研究是采用免疫组化技术方法检测黄体酮保胎治疗后妊娠绒毛中HB-EGF表达水平，探讨黄体酮是否可对体内HB-EGF表达有影响。

1　资料和方法

1.1资料来源

选用2013年1月至2015年01月在吉林大学第四医院(一汽总医院)妇产科就诊患者，选取正常妊娠绒毛组织20例作为对照组，同时期正常妊娠通过黄体酮治疗保胎的绒毛组织20例作为实验组，采用免疫组化方法检测各组绒毛组织中HB-EGF的表达。分组依据及诊断标准以丰有吉主编的《妇产科学》(第2版)作为参考，组间年龄均值及妊娠天数无明显差异(P>0.05)；所有研究对象均无吸烟及孕期大量服药史；无孕期感染史；无输血及免疫治疗史；无其他妊娠合并症及并发症。

1.2方法

1.2.1标本的采集及制备由同一术者采用400-500mmHg负压吸宫术将妊娠绒毛完整吸出，取出后5min内使用生理盐水冲洗后，用10%福尔马林固定液固定，固定24h后，石蜡包埋、切成厚度约4μm切片。1.2.2检测方法使用兔抗人HB-EGF多克隆抗体进行1∶100稀释，免疫组织化学SP-9710及DAB试剂盒，操作过程严格依照试剂盒的使用说明书进行、DAB显色、苏木精复染、光学显微镜下观察。

1.3结果判定

在光学显微镜下观察组织切片的显色，以镜下观察到细胞浆内及细胞膜淡黄至棕黄色颗粒为标准，着色强度高于背景非特异性染色者为阳性。评估标准依照阳性细胞百分率及染色强度得分之和进行判定。染色强度:0 分为无(不着色)；1分为弱阳性(淡黄色) ；2分为中等阳性(黄色) ；3分为强阳性(棕黄色)。 阳性细胞百分率:无阳性细胞判定为0分；阳性细胞总数小于25%判定为1分；阳性细胞数介于25%到50%之间者判定为2分；阳性细胞总数介于50%至75%之间者判定为3分；阳性细胞数大于75%判定为4分。两项之和:0分为(-)，2分为(+)，3-4分为(++)，5-7分为(+++)。

1.4统计学方法

统计学软件选用SPSS17.0对实验数据进行统计学分析，等级资料采用秩和检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2　结果

HB-EGF在正常妊娠绒毛组织中表达显著低于经黄体酮保胎治疗后妊娠绒毛组织中表达，两组间差异具有统计学意义(P<0.05)；结果见表1。

表1　HB-EGF在正常妊娠组与黄体酮保胎治疗组妊娠绒毛组织中的表达

经计算 χ2=11.127，P<0.05。可以说明实验组与对照组之间存在统计学差异。

3　讨论

肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)广泛分布于人体的多种组织中，它可以由平滑肌细胞、巨噬细胞等分泌产生，具有广泛的生物学作用[5]。研究发现，HB-EGF与EGF有相类似的生物学活性，有着较强的促细胞分裂活性，和肝素亲和性强[6]。肝素结合性表皮生长因子在子宫内膜、早孕绒毛等组织中均有表达，增加子宫内膜生长及分化，介导胚泡的黏附与着床、维持胎盘功能，并参与骨骼肌发育、肾小管形成及组织修复及多种肿瘤的形成[7]。

经研究早期妊娠流产患者滋养细胞中肝素结合性表皮生长因子表达显著低于正常妊娠者，这与滋养细胞的增殖抗原PCNA表达正相关，这提示我们滋养细胞增殖被其抑制，而滋养细胞对缺氧的耐受及血管发育不良不利于胚胎及胎盘发育，直接影响早期妊娠流产[8]。可见，肝素结合性表皮生长因子是一种重要的妊娠相关蛋白，它通过参与孕早期的胚胎着床与植入、促进囊胚发育、维持胎盘功能，为早期妊娠成功发挥重要作用。目前HB-EGF通过什么样的机理在异常妊娠流产中发挥作用，尚不明确，妊娠早期体内的HB-EGF表达不足，可导致胎盘形成不良，从而致流产。对妊娠流产患者体内肝素结合性表皮生长因子表达的研究仍处于起步探索阶段，该因子是否为流产发病的决策性因素，其能否作为流产的预测性指标，未来人重组HB-EGF能否作为流产的治疗手段等等，这些均有待于进一步探讨与验证。那些多次胚胎着床失败所引起的不孕,是否存在肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的缺陷，应用重组人肝素结合性表皮生长因子是否可以有效改善妊娠的结局,这也将是生殖医学研究的新领域。

HB-EGF在妊娠中扮演者重要角色，而黄体酮治疗通过某些机制促进该因子高表达，从而提高妊娠的成功率，从而为早期流产患者带来福音。黄体酮作为临床常用的一线保胎药物之一，其作用机制除了目前我们已经掌握的机制外，是通过什么样的途径促进体内肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)高表达，促使早期妊娠的着床、粘附等，起到保胎意义，从而减少自然流产的发生，有待大样本临床研究进一步证实。

[1]HannaA,ArielR.Endometrialreceptivitymarkes,thejourneytosuccessfulembryoimplantation[J].HumanReproductionUpdate,2006,12(6):731-746.

[2]李巍,岳瑛,李杰,等.自然流产患者绒毛组织中肝素结合性表皮生长因子免疫组化分析[J].中国实验诊断学,2008,12(10):1244.

[3]StavreusEversA,AghajanovaL,BrismarH,etal.Co-existenceOfheparinbindingepidermalgrowthfactor-likegrowthfactorandpinopodesinhumanendometriumatthetimeofimplantation[J].MolHumReprod,2002,8(8):765.

[4]HannaA.ArielR.Endometrialreceptivitymarkes.thejourneytosuccessfulembryoimplantation[J]HumanReproductionUpdate,2006.12(6):731．

[5]ZhengL,QiT,YangD,etal.MicroRNA-9suppressestheproliferation,invasionandmetastasisofgastriccancercellsthroughtargetingcyclinD1andEts1[J].PLoSOne,2013,8(1):50.

[6]GuoLM,PuY,HanZ,etal.MicroRNA-9inhibitsovariancancrcellgrowththroughregulationofNFkappaB1[J].FEBSJ,2009,276:5537-5546.

[7]BartelDP.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanismandfunction[J].Cell,2004,116:281-297.

[8]胡昌东,归绥琪.自然流产患者滋养细胞肝素表皮生长因子的表达及意义[J].上海医学,2004,27(7):491.

1007-4287(2016)08-1329-02

2015-08-14)