CHOP在不同级别胶质瘤中的表达和意义

熊学华，邓健平，吕明学，曾春，唐爽，蒋永明



CHOP在不同级别胶质瘤中的表达和意义

熊学华1，邓健平2，吕明学1，曾春1，唐爽1，蒋永明1

目的：检测CHOP在不同级别胶质瘤中的表达，探讨其临床价值及意义。方法：选取手术切除的人脑胶质瘤病理标本85例为胶质瘤组，Ⅰ级18例，Ⅱ级25例，Ⅲ级22例，Ⅳ级20例，低分级胶质瘤（Ⅰ级+Ⅱ级）43例，高分级胶质瘤（Ⅲ级+Ⅳ级）42例。另选择颅脑外伤后行颅内减压患者的手术切除正常脑组织80例为对照组，按照免疫组化S-P法，检测CHOP在正常脑组织以及不同级别人脑胶质瘤组织中的表达情况。结果：CHOP在对照组正常脑组织中的阳性表达率为8.75%（7/80），在胶质瘤组中的阳性表达率为64.71%（55/85），差异有统计学意义（P＜0.05）。CHOP在低分级胶质瘤阳性表达51.16%（22/43），明显低于高分级胶质瘤阳性表达76.19%（32/42）（P＜0.05）。结论：CHOP在正常脑组织中低表达，在脑胶质瘤中高表达，在高分级脑胶质瘤中表达较低分级中的表达明显增强。

CHOP；脑胶质瘤；表达

脑胶质瘤起源于神经外胚层肿瘤，在颅脑肿瘤中发病率最高，约占全部脑肿瘤的40%～50%，且有逐年增多的趋势[1]。因其生长迅速，且易侵袭转移，给治疗带来很大的困难。外科切除仍是临床治疗脑胶质瘤的最主要手段，放疗、化疗及生物治疗的综合运用，对脑胶质瘤的治疗在一定程度上有所改善，但总体预后仍然较差。内质网是真核细胞中重要的细胞器之一，内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）是内质网生理功能在氧化应激、缺血损伤、内环境紊乱等情况下发生功能紊乱的一种病理状态，是机体自我防御的一种机制。研究表明，内质网过度应激将导致细胞凋亡，ERS是近年发现的一种新的细胞凋亡途径。ERS的发现为控制脑胶质瘤的增殖找到了一种新的途径，为治疗脑胶质瘤带来了曙光。本文通过研究ERS下C/EBP同源蛋白（C/EBP-homologous protein，CHOP）在不同级别脑胶质瘤中的表达，为临床治疗脑胶质瘤提供理论依据。

1　资料与方法

1.1一般资料

收集2010年2月至2014年1月我科手术切除的人脑胶质瘤病理石蜡标本85例为胶质瘤组，男44例，女41例；年龄12～74岁，平均46.56岁。所有石蜡标本重新切片，HE染色后由经验丰富的两位病理科医生行双盲镜检读片，按WHO制定的神经系统肿瘤分类标准（2000版），对标本进行组织学及病理学分级，其中Ⅰ级18例，Ⅱ级25例，Ⅲ级22例，Ⅳ级20例，低分级胶质瘤（Ⅰ级+Ⅱ级）43例，高分级胶质瘤（Ⅲ级+Ⅳ级）41例。另选择颅脑外伤后行颅内减压患者的手术切除脑组织80例为对照组，男48例，女32例；年龄17～65岁，平均41.25岁；选择无胶质细胞增生、无细胞坏死及水肿的组织进行切片。2组年龄、性别差异无统计学意义（P>0. 05）。

1.2方法

1.2.1免疫组化 将2组石蜡切片标本，采用免疫组化SP法，切片常规脱蜡脱水，微波进行抗原修复，过氧化物酶室温作用封闭内源性过氧化物酶，滴加血清封闭，滴加适当稀释的兔抗人一抗（CHOP，工作浓度1∶100），湿盒孵育，4℃过夜，滴加HRP标记山羊抗兔二抗，37℃恒温箱孵育30 min，蒸馏水洗涤后DAB显色，苏木素复染，常规脱水、透明、中性树脂封片，显微镜观察。

1.2.2结果判别CHOP阳性细胞表现为细胞或细胞核呈棕黄色或棕褐色。采用半定量记数方法计算结果。观察组织切片免疫组化结果，根据其染色细胞的着色强度及密度进行综合评分。着色强度：未见细胞着色计0分，细胞着色为淡黄色计1分，细胞着色为棕黄色计2分，细胞着色为棕褐色计3分。着色密度（高倍镜下随机5个视野）：细胞未见着色为0分，平均细胞着色<25%计1分，细胞着色在25%～50%计2分，细胞着色>50%计3分，上述两种评分结果相加，即为结果。阴性：评分＜2分，阳性：3～6分。

1.3统计学处理

采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，计量结果以（均数±标准差）（）表示，组间统计采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.12组CHOP表达比较

对照组中CHOP阳性表达7例（8.75%，图1A），胶质瘤组中阳性表达55例（64.71%，图1B），差异有统计学意义（χ2=15.29，P＜0.05），表明CHOP在正常脑组织中的表达较少，在脑胶质瘤中高表达。

2.2CHOP在不同级别脑胶质瘤中的表达

CHOP在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤中的阳性表达率 分 别 为 44.44%（8/10）、48.00%（14/25）、77.27% （17/22）、80.00%（16/20）；与CHOP在Ⅰ级脑胶质瘤中的阳性表达率比较，Ⅲ、Ⅳ级中CHOP阳性表达率差异有统计学意义（P=0.03，P=0.02）。CHOP在低分级胶质瘤中阳性表达率为51.16%（22/43），在高分级胶质瘤中阳性表达率为76.19%（32/42）；前者低于后者，差异有统计学意义（χ2=5.74，P=0.02）。

图1　CHOP在对照组（A）和胶质瘤组（B）中的表达（SP染色，× 400）

3　讨论

内质网是真核细胞中重要的细胞器，是蛋白质翻译合成以及细胞内钙离子储存的重要场所。在细胞内外环境变化时，内质网可出现功能紊乱，从而使蛋白质翻译合成出现错误以及细胞内钙离子失衡，即ERS，从而引起机体平衡功能紊乱。

CHOP，也即GADD153（Growth arrest and DNA damagein-ducible gene 153）[3]，最先发现于DNA损伤反应中。CHOP在哺乳动物细胞中广泛表达，是ERS的特异性转录因子，属于C/EBP转录因子家族[4]。在正常生理条件下，CHOP少量表达于真核细胞的细胞浆中，当细胞发生应激反应、细胞钙失衡等时，CHOP大量聚集并表达于真核细胞细胞核中[5,6]，激活细胞凋亡传导途径，通过影响Bcl-2抗凋亡蛋白表达[7]、干扰细胞氧化反应或影响Caspase-12的活性等促使细胞发生凋亡。大量研究表明，以CHOP作为靶点开发新型的抗肿瘤药物具有一定的可行性，通过激活CHOP启动子中的AP1及AARE1区域对CHOP激活，促进其转录表达，从而引起其下游信号蛋白Bcl2的表达下降，导致肿瘤细胞死亡，达到有效抗肿瘤的目的。

本研究通过免疫组化反应，发现CHOP在人脑胶质瘤中高表达，在正常脑组织中表达较低，表明在胶质瘤中，细胞的增殖紊乱，打破了细胞的内环境，从而激活内质网系统，使内质网发生应激，促使异常增殖细胞发生凋亡[8]。在对不同分级胶质瘤的研究中，发现CHOP在低分级胶质瘤的表达，明显低于在高分级胶质瘤的阳性表达（P＜0.05）。提示在高分级胶质瘤中，ERS更强烈，诱导细胞凋亡更显著。不同级别间对比，发现CHOP在Ⅰ级中的阳性表达与Ⅲ、Ⅳ级比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其余组间对比差异无统计学意义，提示相邻两胶质瘤级别间其表达相差不大，可能与人为的计分或CHOP在相近级别胶质瘤间的恶性程度区分不大相关。

ERS与细胞凋亡密切相关，肿瘤的发生、发展以及凋亡对肿瘤的增殖具有重要意义。ERS的发现，为脑胶质瘤的治疗开辟了新的研究道路，细胞内环境失衡时，使ERS过表达，并抑制细胞增殖，使肿瘤细胞凋亡明显强于细胞增殖，从而使肿瘤细胞死亡，达到治疗胶质瘤的目的，值得深入研究。

[1]宋姗姗,马骊.脑肿瘤干细胞与胶质瘤生物治疗研究进展 [J].中华神经医学杂志,2011,10:960-963.

[2]Wang G,Yang ZQ,Zhang K.Endoplasmic reticulum stress response in cancer:molecular mechanism and therapeutic potential[J].Am J Transl Res, 2010,2:65-74.

[3]Moriya S,Miyazawa K,Kawaguchi T,et al.Involvement of endoplasmic reticulum stress-mediated CHOP(GADD153)induction in the cytotoxicity of 2-aminophenoxazine-3-one in cancer cells[J].Int J Oncol,2011,39: 981-988.

[4]Oyadomari S,Mori M.Roles of CHOP/GADD153 in endoplasmic reticulum stress[J].Cell Death Differ,2004,11:381-389.

[5]Tang JR,Nakamura M,Okura T,et al.Mechanism of oxidative stress-induced GADD153 gene expression in vascular smooth muscle cells [J].Biochem Biophys Res Commun,2002,290:1255-1259.

[6]Ubeda M,Habener JF.CHOP gene expression in response to endoplasmic-reticular stress requires NFY interaction with different domains of a conserved DNA-binding element[J].Nucleic Acids Res,2000,28: 4987-4997.

[7]Chiribau CB,Gaccioli F,Huang CC,et al.Molecular symbiosis of CHOP and C/EBP beta isoform LIP contributes to endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis[J].Mol Cell Biol,2010,30:3722-3731.

[8]霍军丽,甄海宁,刘卫平,等.藏红花素诱导人胶质瘤U251细胞内质网应激性凋亡的研究[J].现代生物医学进展,2011,11:4212-4214.

（本文编辑：王晶）

Expression of CHOP in Different Grade Gliomas

XIONG Xue-hua1,DENG Jian-ping1,LV Ming-xue1,ZENG Chun1,TANG Shuang2,JIANG Yong-ming1.1.Department of Neurosurgery,Suining Center Hospital, Sichuan 629000,China;2.Department of Neurosurgery,The Fourth Renmin Hospital of Chongqing City, Chongqing,400014,China

AbstractObjective:To detect the expression of CHOP in different grade gliomas,and to explore its clinical significance.Methods:Eighty-five cases with glioma were enrolled for glioma group.Based on surgical resection specimens,43 cases were with low-grade gliomas(gradeⅠ+gradeⅡ),and 42 cases with high grade gliomas (gradeⅢ+gradeⅣ).The tissue from craniocerebral trauma surgical removal of the normal brain were selected for control group.The expression of CHOP in all the participents were detected by immunohistochemical method. Results:The expression rate of CHOP in the control group was 8.75%(7/80),significantly lower than that in in the glioma groups(64.71%,55/85)(P<0.05).The expression of CHOP was detected in the 22 cases with low-grade glioma group,significantly lower than that in the 32 cases with high-grade gliomas(P<0.05).Conclusion:The expression of CHOP is low in normal brain tissue.However,the expression is significantly increased in gliomas, The degree of gliomas determine the expression.

CHOP;glioma;expression

·综述·

R741;R730.264

A

10.16780/j.cnki.sjssgncj.2016.01.013

1.遂宁市中心医院神经外科

四川629000

2.重庆市第四人民医院神经外科

重庆400014

四川省卫生和计划生育委员会科研课题（No.150245）

2015-04-21

邓健平

231883670@qq. com