迟发型放射性脑病患者外周血CD4＋CD28－T细胞的变化

卢晔芬，黄跃金，黄慧芬，曾婷婷，程伟进，余琳玲，陈建军，饶 杰

迟发型放射性脑病患者外周血CD4＋CD28－T细胞的变化

卢晔芬，黄跃金，黄慧芬，曾婷婷，程伟进，余琳玲，陈建军，饶 杰

目的 探讨迟发型放射性脑病（REP）患者外周血CD4＋CD28－T细胞亚群的变化及意义。方法 选择迟发型REP患者45例（迟发型REP组），另选取因脑瘤及鼻咽癌接受放射治疗患者45例（放射对照组）及未接受放射治疗正常对照45例（正常对照组）。均采用流式细胞仪检测外周血CD4＋CD28－T细胞占CD4 T细胞比例。结果 迟发型REP组CD4＋CD28－T/CD4T细胞比例明显高于放射对照组及正常对照组（均＜0.05），放射对照组与正常对照组差异有统计学意义（＜0.05）。结论 迟发型REP患者外周血CD4＋CD28－T细胞升高，可能在迟发型REP发生、发展中起重要作用。调节T淋巴细胞亚群可能是迟发型REP潜在治疗靶点。

迟发型放射性脑病；T淋巴细胞亚群；抗原，CD4；抗原，CD28

恶性肿瘤是当前威胁我国居民健康的主要疾病之一。近年来，随着放射治疗技术的进步，肿瘤控制率增高，患者生存时间延长，但迟发型放射性脑病（REP）发生率逐年增多。迟发型REP症状往往较重，治疗困难，严重影响患者生存质量，甚至导致死亡，已引起临床医生的广泛重视。随着对其研究机制的不断深入，免疫炎症机制在其病理损害中的作用逐渐受到人们的关注和认可[1]。既往研究表明，CD4＋CD28－T细胞是一种促炎性反应细胞。本研究通过观察迟发型REP患者外周血CD4＋CD28－T细胞亚群表达情况，为免疫炎性反应广泛参与迟发REP的发生、发展提供了一定的理论依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年6月至2015年6月在温州医科大学附属第五医院收治的迟发型REP患者45例（迟发型REP组），均经颅脑CT、MRI或PET检查证实，诊断参考郭韬等[2]提出的标准：（1）有头颈部放射治疗史，放射耐受量（TD）≥50 GY；（2）放疗6个月后发生，放射性脑坏死及严重的神经功能障碍，表现为定向力障碍，进行性认知功能障碍，甚至出现痴呆、癫痫发作、人格改变及精神异常等，脑功能区损伤可造成相应的神经功能缺失，如偏瘫、失语及失认等；（3）影像学检查显示病变部位与照射野的范围基本一致，病灶主要分布在颞叶、脑干及小脑；（4）有典型的影像学表现；（5）除外新生肿瘤或肿瘤复发。所有研究对象近期内未应用免疫调节剂，并排除炎症、自身免疫性疾病。每例患者均签知情同意书。其中男25例，女20例；平均年龄（47.62±12.75）岁。另选同期因脑瘤及鼻咽癌接受放射治疗患者45例（放射对照组）及未接受放射治疗正常对照45例（正常对照组）。放射对照组男23例，女22例；平均年龄（49.78±13.83）岁。正常对照组男20例，女25例；平均年龄（52.24±10.29）岁。3组性别、年龄差异均无统计学意义（均＞0.05）。

1.2 主要试剂和设备 荧光素偶联抗体：CD3-硫氰酸荧光素（FITC）抗体，CD-ALEXA700抗体，MS IgG1 APC，CD28-藻红蛋白（PE）抗体，MS IgG 1 PE，红细胞裂解液（BD公司）；流式细胞仪：FACS CantoII。

1.3 标本的采集和检测 受试者采集空腹肘静脉血12ml，其中10 ml全血样本进行常规检查；另2 ml全血样本采用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝备检。流式细胞仪四色荧光标记技术检测外周血CD4＋CD28－T细胞占CD4 T细胞比例。每例受试者标本取 2份新鲜全血100 l分别加入流式管，标记为实验管和对照管。实验管和对照管均加入 20 l CD3-FITC抗体，5 lCD4-ALEXA700抗体；实验管再加入20l CD28-PE抗体；对照管则加入20 lCD28同型对照抗体；混匀、室温避光孵育30 min，加入红细胞裂解液1 ml，混匀室温避光15 min，PBS洗涤离心2次，去上清后加入磷酸盐缓冲液（PBS）300l，混匀后用流式细胞仪检测。以对照管设门圈定CD4＋CD28－T细胞，测定其占CD4T细胞比例。

1.4 统计方法 采用SPSS 16.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用方差分析，两组比较采用 检验。＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

3组CD4＋CD28－T/CD4T比例差异有统计学意义（=26.56，＜0.05）。迟发型REP组CD4＋CD28－T/CD4T比例明显高于正常对照组及接受放射治疗组，差异有统计学意义（=6.13、4.76，均＜0.05）。放射对照组 CD4＋CD28－T细胞/CD4T细胞比例与正常对照组相比，差异有统计学意义（=2.17，＜0.05）。见表1。

表1 各组外周血CD4＋CD28－T细胞/CD4T比例 %

3 讨论

迟发型REP患者存在免疫系统的异常。研究发现，T细胞参与机体体液免疫和细胞免疫的调节。并且T细胞亚群的相对比例可能与患者的免疫功能状态和病情进展密切相关[3]。既往研究表明，CD4＋CD28－T细胞亚群数量增多与多种自身免疫性和慢性炎症疾病相关。近年来，在类风湿性关节炎、自身免疫性血管炎、动脉粥样硬化、脑梗死及不稳定心绞痛患者中，发现CD4＋CD28－T细胞显著升高，引起了人们的极大关注。CD4＋CD28－T细胞是一群高度促炎的T细胞亚群，与一般辅助T细胞不同，CD4＋CD28－T细胞的激活不需要B7/CD28协同刺激信号，该T细胞亚群CD28表达缺失，不但没有表现出细胞免疫功能的抑制，反而具有细胞毒性效应，能产生穿孔素且大量分泌干扰素-r、白介素-2，进而激活巨噬细胞。同时，由于CD4＋CD28－T细胞缺乏细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4分子的表达，对凋亡具有抵抗作用，因此，能够大量扩增，长期存活，导致损伤组织慢性炎症反应。慢性炎症时，CD28表达缺失，CD4＋CD28－T细胞数量明显增多，从而使机体表现为以Th1细胞因子为主的免疫反应[4]。

本研究发现，迟发型REP外周血中CD4＋CD28－T细胞表达明显高于正常对照组及放射对照组，而放射对照组与正常对照组差异也有统计学意义。这提示 CD4＋CD28－T细胞介导的免疫失衡可能参与迟发型REP的发生、发展。本研究因受病例数少、时间等因素限制，未再进一步进行亚组分析。血脂、激素使用、颈动脉内膜增生程度等对迟发型REP患者外周血T细胞亚群的影响有待深入研究。

[1]Carole Soussain C, Damien Ricard, John R Fike, et al. CNS complications of radiotherapy and chemotherapy [J]. Lancet, 2009, 374(9701):1639-1651.

[2]郭韬,刘斌,郑鑫.放射性脑病研究进展[J].脑与神经疾病杂志,2008,16(5):648-651.

[3]Cretney E, Xin A, Shi W, et al. The transcription factors Blimp-1and IRF4 jointly control the differentiationly and function of effector regulatory T cells[J]. Nat Immunol, 2011,12(4):304-311.

[4]Gilani SR, Vuga LJ, Lindell KO, et al. CD28 down-regulation on circulating CD4 T-Cells is associated with poor prognoses of patients with idiopathic pulmonary fib rosis[J]. PLoS One, 2010,5(1):e8959.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.06.052

R742

A

1671-0800(2016)06-0794-02

2015-08-10

（本文编辑：孙海儿）

丽水市科技局（丽水市医学重点学科项目）、丽水市科技计划项目（2012JYZB18）、浙江省医药卫生科技计划（2015120636）

323000浙江省丽水，温州医科大学附属第五医院

邱伟文，Email：m.d.wqw@ 163.com