女性压力性尿失禁动物模型的建立

孙 涛，翁国斌，朱伟智，高文波，刘晓明，杜洲舸，周克文，周 永，郑 斌，吴齐全

女性压力性尿失禁动物模型的建立

孙 涛，翁国斌，朱伟智，高文波，刘晓明，杜洲舸，周克文，周 永，郑 斌，吴齐全

目的 通过手术切除耻骨联合的方法，建立女性压力性尿失禁新西兰兔动物模型。方法 健康清洁级雌性纯种新西兰兔40只，随机分组分为实验组与对照组，各20只。实验组切开皮肤进入腹腔，膀胱内注入0.9%氯化钠溶液，充盈膀胱，辨认膀胱位置，游离膀胱及其周围组织游离尿道周围组织由尿道近端至尿道外口水平，沿着耻骨联合两侧耻骨支及坐骨支起始部剪除耻骨联合；对照组同实验组切开皮肤进入腹腔，膀胱内注入0.9%氯化钠溶液，充盈膀胱，辨认膀胱位置，即缝合手术切口。分别于手术前、手术后、术后3个月及术后6月测量腹压漏尿点压（ALPP）。结果 两组手术前ALPP无差异（＞0.05）；对照组ALPP在术前、术后、术后3个月及6个月差异均无统计学意义（均＞0.05）；实验组术后、术后3个月及6个月ALPP与术前相比差异均有统计学意义（均＜0.05）；术后3个月、6个月ALPP与术后相比呈先升高后降低的趋势，差异均有统计学意义（均＜0.05）。结论 去除耻骨联合建立女性压力性尿失禁动物模型具有可复制性强、操作简单、成功率高及作用时间持久等特点，对进一步研究女性压力性尿失禁产生机理和治疗具有一定的意义。

压力性尿失禁；尿动力学检查；动物模型

女性压力性尿失禁(SUI)是泌尿外科十分常见的症状，影响着患者生活质量。随着我国老龄化程度的发展和卫生保健强调生活质量的提高，此病成为越来越引人注目的公共健康问题。为了更好地研究压力性尿失禁的病理生理学发展进程，评价干预措施对实验的影响，需要建立操作简便、稳定可靠、重复性强的理想动物模型，为女性压力性尿失禁动物模型的基础、临床等各项研究提供一个支持平台。本文采用新西兰兔建立女性压力性尿失禁动物模型，拟深入探讨SUI发生机制及其应对措施，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 实验动物 健康清洁级雌性纯种新西兰兔 (宁波大学动物中心提供)40只，随机分为实验组及对照组，各20只。分笼饲养于室温20～25℃，光线适中，清洁安静的环境。实验操作过程符合中华人民共和国科学技术部《关于善待实验动物的指导性意见》要求。本实验经宁波大学附属泌尿肾病医院伦理委员会论证、批准实施。喂饲标准饲料，自由饮水。对照组平均月龄（5.81±0.15）个月，体质量（2.83±0.35）kg；实验组平均月龄（5.77±0.48）个月，体质量（2.88±0.27）kg。采用加拿大LABORIE尿动力检测系统(型号UDS-E-130)尿动力学分析仪检查膀胱压力容积测定。两组一般资料差异均无统计学意义（＞0.05）具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 动物模型制备 实验组：将兔仰卧于兔台加以固定，下腹部脱毛备皮，沿腹白线打开腹腔在尿道近耻骨联合处剪开一个6 cm的纵行切口，膀胱内注入0.9%氯化钠溶液，充盈膀胱便于辨认；充分暴露膀胱及耻骨周围，由尿道近端向尿道口方向游离尿道周围组织，将耻骨充分游离后，沿着耻骨联合两侧耻骨支及坐骨支起始部剪除耻骨联合。保护尿道周围组织尽量不予破坏，缝合手术切口。对照组同实验组切开皮肤进入腹腔，膀胱内注入0.9%氯化钠溶液，充盈膀胱，辨认膀胱位置，即缝合手术切口，不游离膀胱及其周围组织。

1.2.2 尿动力检查方法 耳缘静脉注射20%乌拉坦溶液，7 ml/kg。麻醉时通常给80%的剂量，观察动物的反应。如果实验兔意识消失，即可开始实验。如果实验时仍清醒，再将余下的药物推入腹腔。兔仰卧位将测压用导尿管（LABORIE，CAT208）由尿道插入膀胱后，尿道外口旁2cm处缝1结扎线固定导尿管[1]，肛管（LABORIE，CAT-411）作为腹压测定管导入兔直肠，缝1结扎线固定肛管。改变兔体位为俯卧位，排空兔膀胱，测压管与压力传感器相连，注水管连接微量注射泵，速度为1ml/s。体内置零后开启微量注射泵向膀胱内灌注0.9%氯化钠溶液，此过程中注意观察尿道外口有无液体溢出。以注射器抽出膀胱内尿量，即膀胱最大容量[2]。排空膀胱后，重新灌注至膀胱最大容量一半时，水银血压计袖带绑住兔上腹部，缓缓充气可见膀胱压逐渐升高直到尿道外口见到尿液漏出，若有尿液溢出，此时记录的膀胱压即为腹压漏尿点压（ALPP）。重复测压3次，取其平均值。分别于手术前、手术后、术后3个月及术后6个月重复测量ALPP。

1.3 统计方法 采用SPSS 16.0统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差表示，两组比较采用 检验，多组比较采用方差分析。＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

表1 两组各时段ALPP水平比较 cmH2O

3 讨论

国际控尿学会(ICS)对压力性尿失禁的定义是指膀胱压大于最大尿道压时，在无膀胱逼尿肌收缩的状态下，尿液不自主地由尿道外口溢出。多在咳嗽、运动、打喷嚏、直立等腹压增大时发生，其发病原因较为复杂。压力性尿失禁是严重影响中老年妇女生活质量的常见病，是值得重视的社会学和卫生经济学问题。严重影响着广大妇女的健康及生活，主要有年龄因素、婚育因素、既往妇科手术史及长期的腹压增高史等原因。

盆底支持组织的形态结构变化，盆底支持组织雌激素水平和雌激素受体改变等与SUI关系密切，由于病因复杂性，涉及结构和功能改变，建立SUI动物模型能更深一步研究其发生机制。根据排尿期原理，膀胱的收缩力大于尿道阻力时产生尿流。而影响尿流力的主要因素为：尿道括约肌、尿道直径和长度、尿道摩擦系数、尿流轨迹以及尿道内口形态。目前压力性尿失禁动物模型多采用鼠、大鼠、兔等动物。大鼠、小鼠等小型实验动物膀胱尿道等解剖结构容量小，壁薄，操作困难性大，另外存在逼尿肌不稳定收缩的现象，对测量仪器的精度要求也越高。犬、羊及猪等大型动物适用于压力性尿失禁动物模型的建立，但经济成本较高。新西兰白兔是尿道研究的良好实验对象[3]，是理想的研究尿道损伤愈合的动物模型。

女性压力性尿失禁动物模型主要有气囊压迫阴道壁、气囊压迫阴道壁合并双侧卵巢切除、离断双侧坐骨神经、离断双侧阴部神经、游离或切除部分尿道及离断耻骨尿道韧带等方法。但是上述方法均在手术后一段时间后出现尿道压力上升，尿道关闭压力恢复，影响动物模型的稳定性，动物模型持久性差[4]。尿道周围游离可以形成压力性尿失禁的动物模型[5]。本研究在尿道周围松解游离的基础上切除耻骨联合，破坏骨盆环的完整性，减少骨盆肌肉的附着点，加重盆底肌肉的松弛。本研究中对照组ALPP在术前、术后、术后3个月及6个月差异均无统计学意义（均＞0.05），因为对照组手术仅切开皮肤进入腹腔，充盈辨认膀胱位置，即刻缝合手术切口，不游离膀胱及其周围组织。并未影响骨盆肌肉及韧带、神经等结构，所以ALPP均未发生明显改变；实验组术后3个月较术后ALPP增加，差异有统计学意义（＜0.05），考虑为术后盆底肌肉、神经等组织自我修复，以及手术后瘢痕增生牵拉尿道引起尿道压迫，扭曲等情况使尿道阻力增加；实验组术后6个月ALPP水平低于术后3个月，差异有统计学意义（＜0.05），考虑为术后3至6个月手术瘢痕逐渐软化，尿道受到瘢痕牵拉扭曲的力量减弱，ALPP因此有所下降。

综上所述，本研究在尿道松解术的基础上，彻底去除耻骨联合，游离尿道及尿道与膀胱颈交界处，改变尿道膀胱角度，削弱尿道关闭需要的支撑媒介，减少盆底肌与骨盆壁的附着点，使盆底肌较手术前相对松弛，改变膀胱尿道前角，膀胱尿道后角，减少术后尿道周围疤痕粘连固定引起尿失禁自然愈合的可能，模拟女性尿道括约肌损伤，建立动物模型，具有可复制性强、操作简单、成功率高及作用时间持久等特点。

[1]Zhang NZ,Ma L,ZhangJB,et al.Improv-eed model for the establishment and evaluation of detrusor overactivity in female wistar rats[J]. Int Braz J Urol, 2014,40(3): 414-421.

[2]邝兆进,操红缨,黄萍,等.两种不同膀胱测压方法对不同年龄大鼠尿动力测定的影响[J].中国药理学通报,2012,28(4):581.

[3]Minki Baek, Sung Hyun Paick, Seong jin Jeong, et al. Urodynamic and histological changes in a sterile rabbit vesicoureteral reflux model[J]. J Korean Med Sci, 2010, 25(9):1352-1358.

[4]M Skaff, ERS Pinto, Katia Leite, et al. Development of a rabbit's urethral sphincter deficiency animal model for anatomicalfunctional evaluation[J]. Int Braz J urol, 2012,38(1):17-24.

[5]Fu Qiang, Liao GL. Comparative study of three rat models of stress urinary incontinence[J]. Bosn J Basic Med Sci, 2011,11 (2):87-90.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.06.013

R695.1

A

1671-0800(2016)06-0726-03

2016-01-16

（本文编辑：吴迪汉）

315100宁波，宁波市泌尿肾病医院

翁国斌，Email：suntao319@ gmail.com