Podop lanin在肝细胞癌组织中的表达及与淋巴管转移的关系

姜　杨　高恒宇　刘　丹　郭林娜齐齐哈尔医学院解剖教研室，黑龙江齐齐哈尔 161001

Podop lanin在肝细胞癌组织中的表达及与淋巴管转移的关系

姜杨高恒宇刘丹郭林娜
齐齐哈尔医学院解剖教研室，黑龙江齐齐哈尔 161001

目的 探讨Podoplanin在肝细胞癌组织中的表达及与淋巴管转移的关系。方法 选取2003年1月～2014 年1月在大庆油田总医院和齐齐哈尔医学院病理中心手术切除并病理证明为肝细胞癌的标本存档蜡块53例为研究对象，有淋巴结转移35例，无淋巴结转移18例。其中肝细胞癌组织35例，癌旁组织35例，另选正常肝组织9例，采用免疫组化检测Podoplanin的阳性表达，观察Podoplanin在肝细胞癌组织、癌旁组织、正常肝组织中的表达情况，分析Podoplanin的阳性表达与肝细胞癌淋巴管转移的关系。结果Podoplanin在肝细胞癌组织中高表达，在正常肝组织中低表达（P＜0.05）。Podoplanin阳性表达在肝细胞癌淋巴管转移中明显高于无淋巴管转移（P＜0.05）。结论Podoplanin在肝细胞癌中高表达可能与淋巴管生成和淋巴管转移密切相关。

肝细胞癌；Podoplanin；淋巴管

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是一种人类最常见的五大恶性肿瘤之一，全世界范围内排名第五位，在肿瘤相关疾病的致死原因中排名第三位［1-6］。目前，HCC的治疗手段主要是手术、介入治疗、化疗等，但效果都不是很理想。因此，寻找新的诊断和治疗靶点是目前HCC研究的热点之一。

Podoplanin作为特异的淋巴管内皮标志物，被广泛地应用于探讨淋巴管密度/淋巴管面积与癌症患者术后生存及预后之间的关系等方面研究［7-9］，作为一种肿瘤新生淋巴管的测定标志已被广泛应用［10-11］，但Podoplanin在HCC组织内的表达及与HCC恶性程度关系的报道很少。本研究主要检测Podoplanin在HCC组织内的表达情况，探讨其表达与HCC恶性程度的关系，同时检测其在淋巴管转移及未转移中的表达情况，明确其与淋巴管转移的关系。

1　材料与方法

1.1材料

选取2003年1月～2014年1月在大庆油田总医院和齐齐哈尔医学院病理中心手术切除并病理证明为HCC的标本存档蜡块53例，其中男36例，女17例；有淋巴管转移35例，无淋巴管转移18例。其中35例HCC组织及癌旁组织，另选取9例正常肝组织进行免疫组化检测。Podoplanin人抗兔单克隆抗体购自Proteintech公司；二抗、浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2方法

1.2.1SP法免疫组化染色取4μm的组织切片，铺片，于60℃烤片机上烘烤过夜。梯度酒精脱水，磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗5min×3次。0.3%过氧化氢37℃恒温箱中孵育30 min，以阻断内源性过氧化物酶。PBS冲洗5min×3次，0.01%柠檬酸盐缓冲液抗原修复，高压2min，冷却至室温。PBS冲洗5min×3次，滴加一抗Podoplanin 4℃过夜。PBS冲洗5min×3次，滴加二抗，室温孵育30min。PBS冲洗5min×3次，DAB显色，苏木精复染、封片，光镜观察。PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2结果判断在显微镜下观察切片，阳性为棕黄色颗粒，记录阳性细胞数量：①阳性细胞数＜10%为阴性；②10%≤阳性细胞数＜25%或多数阳性细胞显色较弱为弱阳性；③强阳性细胞数占25%～75%为阳性；④强阳性细胞数＞75%为强阳性。

1.3统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析和处理，计数资料采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1免疫组化检测Podoplanin在3种肝组织中的表达

免疫组化检测结果显示，HCC组织及癌旁组织、正常肝组织中均检测到Podoplanin的表达，表现为位于细胞膜内的棕黄色颗粒（图1），分别为强阳性、弱阳性；在HCC组织中，可见淋巴管和毛细淋巴管内皮细胞的细胞膜上被Podoplanin染色呈棕黄色，染色阳性的淋巴管集中于癌组织周边区及汇管区。Podoplanin在HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中的阳性表达率分别为85.71%、77.14%、33.33%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2Podoplanin阳性表达与淋巴管转移的关系

Podoplanin阳性表达率在有淋巴管转移的HCC组织中为68.57%，在无淋巴管转移的HCC组织中为22.22%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

图1　Podoplanin在3种肝组织中的表达（SP染色,100×）

表1　Podoplanin在3种肝组织中的阳性表达情况比较（例）

表2　Podoplanin阳性表达与淋巴管转移的关系（例）

3　讨论

HCC若不进行任何治疗，5年生存率为0%～10%［12-13］。研究表明，肿瘤的发生同癌基因的激活和抑癌基因的失活引起细胞增殖失控、凋亡受阻，分化异常等密切相关［14］。因此，本研究探讨肝癌发生的分子生物学机制。

Podoplanin是特异的淋巴管标志物，主要表达于淋巴管的内腔，而在血管内皮没有表达［9］。许多实验证明，Podoplanin表达与肿瘤淋巴管转移密切相关［15-16］。研究表明，Podoplanin在正常组织中也有广泛表达［17-19］。还有学者报道，Podoplanin在许多肿瘤细胞中也有表达［20-21］。本研究通过免疫组化检测Podoplanin在HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中的表达情况，结果显示，Podoplanin阳性表达在3种肝组织中差异有统计学意义：Podoplanin在HCC组织中的表达水平高于癌旁组织及正常肝组织，在癌旁组织中的表达水平高于正常肝组织；同时Podoplanin表达水平在有淋巴管转移的HCC组织中较无淋巴管转移高，差异有统计学意义。提示Podoplanin可能与HCC的发生、发展、浸润淋巴管转移有关，这在胸腺肿瘤中已经被证实［22-23］。因此，Podoplanin检测可以作为HCC诊断、治疗及预后的新靶点。

综上所述，Podoplanin可能与HCC的淋巴管转移相关；在促进HCC淋巴管转移过程中起重要作用，阻断Podoplanin的形成有可能降低HCC淋巴管生成及转移的能力，有望利用此条途径预防HCC淋巴管转移，开发出治疗HCC更有效的手段；同时Podoplanin 在HCC组织内有较高的表达，而在癌旁组织及正常肝组织中表达低，推测其可能与HCC的发生、发展有关，进而为HCC的诊断筛选出新的标志物，为HCC的治疗提供新靶点。

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Relationship between the expression of Podoplanin and lymphatic metastasis in hepatocellular carcinoma

JIANG Yang GAO HengyuLIU DanGUO Linna
Department of Anotomy，Qiqihar Medical College，Heilongjiang Province，Qiqihar 161001，China

Objective To disscuss relationship between the expression of Podoplanin and lymphatic metastasis in hepatocellular carcinoma.Methods 53 cases of archival paraffin block with hepatocellular carcinoma were selected as study objects in Daqing Oilfield General Hospital and Pathology Center of Qiqihar Medical College from January 2003 to January 2014.35 cases were lymph node metastasis and 18 cases were no lymph node metastasis.35 cases were hepatoma tissues，35 cases were adjacent tissues and 9 cases were normal liver tissues.Immunohistochemistry was used to detect the positive expressions of Podoplanin，and the expressions of Podoplanin in hepatoma tissues，adjacent tissues and normal liver tissues were observed.The relationship between the positive expression of Podoplanin and hepatocellular carcinoma with lymph metastasis was analyzed.Results Podoplanin was high expressed in hepatoma tissues，while was low expressed in normal liver tissues（P＜0.05）.Podoplanin was higher expressed in lymph node metastasis than that in no lymph node metastasis（P＜0.05）.Conclusion The high expression of Podoplanin in hepatocellular carcinoma should have close relationship with lymphatic genesis and lymphatic metastasis.

Hepatocellular carcinoma；Podoplanin；Lymph node

R735.7

A

1673-7210（2016）01（b）-0078-03

2015-09-11本文编辑：李亚聪）

黑龙江省教育厅课题（12531831）。

郭林娜（1978-），女，硕士，从事肝细胞癌相关研究。