合煎对利口清含漱液稳定性的影响

2016-09-06薛非非王明芳赵利利王志敏张朔生山西中医学院制药与食品工程学院山西晋中03069山西华元医药集团有限公司山西太原03003

中成药 2016年6期

薛非非，李坤，王明芳，赵利利，王志敏，张朔生*（.山西中医学院制药与食品工程学院，山西晋中03069；.山西华元医药集团有限公司，山西太原03003）

合煎对利口清含漱液稳定性的影响

薛非非1，李坤1，王明芳1，赵利利1，王志敏2，张朔生1*
（1.山西中医学院制药与食品工程学院，山西晋中030619；2.山西华元医药集团有限公司，山西太原030032）

目的研究合煎对利口清含漱液稳定性的影响。方法将处方中原工艺改为合煎，并在合煎剂中加入pH稳定剂、澄清剂。单因素试验对5种制剂工艺进行研究，以绿原酸含有量为质量控制指标，验证合煎对制剂稳定性的改善效果。结果合煎与单煎相比，绿原酸含有量基本保持稳定。样品pH值在观察期内变化不大，絮状物减少。结论

通过合煎工艺及加入澄清剂、pH稳定剂等措施，可以提高利口清含漱液的稳定性。

利口清含漱液；稳定性；合煎；单因素试验

利口清含漱液主要成分为金银花和北豆根，具有清热解毒的功效，用于肺胃火热引起的复发性口疮和牙周病（牙龈炎和牙周炎）的辅助治疗，可减轻该类疾病引起的口腔局部溃疡、渗出、充血、出血、水肿和疼痛等症状［1］。原处方是通过两种药材分煎后再合并煎煮液制成，在贮藏过程中存在pH值变化较大、絮状物较多、有效成分含有量下降等问题。本实验通过采取合煎工艺［2-5］及加入壳聚糖、磷酸氢二钠等措施对现有工艺进行改进，采用单因素试验法对制剂pH值及绿原酸含有量变化情况进行分析，得出最优工艺。

1　仪器与试剂

Thermo Fisher Scientific U3000高效液相色谱仪；pHS-3C+/3C智能酸度计（成都世纪方舟科技有限公司）。

金银花（产地河南）和北豆根（产地河北）经山西中医学院张朔生教授鉴定，分别为忍冬科忍冬属植物金银花Flos Lonicerae japonicae及防己科植物北豆根Rhizoma Menisperm i。

乙腈为色谱纯；壳聚糖、磷酸氢二钠等均为分析纯；水为纯化水。

绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号140601）。样品（编号I～V），具体制备工艺见 “2.2”项。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性试验 C18色谱柱（C18烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6 mm×250 mm，5μm）；检测波长327 nm［6］；柱温25℃；体积流量1.0 mL/min；流动相乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；理论塔板数按绿原酸计算，应不低于1 000。HPLC色谱图见图1。

2.2供试品溶液的制备

图1　HPLC色谱图

2.2.1制备工艺Ⅰ 称取金银花26.25 g，加水210 mL，浸泡1 h，煎煮3次，第1次40 min，第2次30 min，第3次20min，合并煎液，滤过，滤液备用。取北豆根26.25 g，加水210 mL，浸泡4 h，煎煮3次，第1次40 min，第2次30min，第3次20min，合并煎液，滤过，将两者水煎液分别减压浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，加入乙醇至含醇量达70%，搅匀，静置过夜，回收乙醇，合并两种溶液，加水至375mL，0～4℃放置48 h，滤过，滤液备用。取苯甲酸钠1.25 g、柠檬酸1.25 g、碳酸氢钠3.75 g，加水30 mL溶解，滤过，滤液备用。取薄荷脑0.175 g，加乙醇适量使溶解，与上述两种滤液合并，加水至500 m L，搅匀，即得样品Ⅰ。

2.2.2制备工艺Ⅱ 称取金银花26.25 g，加水210 mL，浸泡1 h。取北豆根26.25 g，加水210mL，浸泡4 h，合并两种药材浸泡液，煎煮3次，第1次40 min，第2次30 min，第3次20 min，合并煎液，滤过，水煎液分别减压浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，其余制法同 “2.2.1”项，即得样品Ⅱ。

2.2.3制备工艺Ⅲ 按 “2.2.2”项下制法，在加水定容至500 m L前加入壳聚糖（0.6 g/100 mL）［7］，搅匀，即得样品Ⅲ。

2.2.4制备工艺Ⅳ 按 “2.2.2”项下制法，将原工艺碳酸氢钠3.75 g换成磷酸氢二钠7.88 g［8］，即得样品Ⅳ。

2.2.5制备工艺V 按 “2.2.2”项下制法，将原工艺碳酸氢钠3.75 g换成磷酸氢二钠7.88 g，并且在加水定容至500 mL前加入壳聚糖（0.6 g/100 mL），搅匀，即得样品V。

2.2.6供试品溶液取样品10 mL，过滤，精密量取续滤液1mL，置于10mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品4.20 mg，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成含绿原酸0.084 mg/mL的溶液，即得（10℃以下保存）。

2.4线性范围的考察精密吸取 “2.3”项下对照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，置于10m L量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀。在 “2.1”项色谱条件下，依次进样10μL，以峰面积为纵坐标（Y），绿原酸质量浓度为横坐标（X）进行线性回归，得回归方程Y=342.67X+0.003 5（r=0.999 9），表明绿原酸在0.008 4～0.050 4 mg/mL范围内线性关系良好。

2.5精密度试验精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，每次10μL，测得绿原酸峰面积RSD为0.37%，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验取同一份供试品溶液（样品Ⅱ），分别于0、1、2、4、8、24 h进样，测得绿原酸峰面积RSD为1.14%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7重复性试验取同批样品（样品II），重复进样6次，每次10μL，测得绿原酸平均含有量为0.566 2 mg/mL，RSD为0.16%，表明该方法重复性良好。

2.8加样回收率试验精密吸取9份绿原酸含有量已知的样品Ⅱ1.0mL，置于10mL棕色量瓶中，分别精密加入绿原酸对照品溶液（0.084 mg/mL）5.0、7.0、8.0 mL，加50%甲醇至刻度，摇匀，进样10μL测定。结果，绿原酸平均回收率为96.40%，RSD为0.56%。

2.95种工艺的利口清含漱液结果比较

2.9.1绿原酸含有量测定取 “2.2”项下供试品溶液，每隔20 d测定一次绿原酸含有量（外标法）。结果，改进工艺后的样品Ⅱ～V较样品Ⅰ中绿原酸含有量增加，而且在一个多月内基本保持稳定。具体见表1。

2.9.2统计学处理通过SPSS 13.0统计软件，对表1数据进行分析，数据以±s表示，组间均值比较采用LSD法（α＜0.05）。结果，0、20、40 d含有量相互差异均有统计学意义（P＜0.05）。

表1　含有量测定结果

2.9.3pH值测定样品Ⅰ的pH值随时间的延长而略有降低。经过工艺改进后，样品Ⅱ、Ⅲ能保持稳定，但有较小的浮动；样品Ⅳ、V在观察期内基本保持恒定。结果见图2。

图2　pH值变化图

2.9.4絮状物的观察样品Ⅰ在观察期内出现明显的絮状物，样品Ⅱ～V有所减少，其中样品Ⅲ、V减少显著，而且溶液也较澄清。

3　讨论

3.1意义本实验建立了利口清含漱液中绿原酸的含有量测定方法［9］，为研究金银花提取工艺奠定了基础，也为优化利口清含漱液制剂工艺和制定相关质量标准提供了依据。

3.2合煎的选择复方中药溶液制剂中的各类型有效组分若按其酸碱性分类，大致可分为弱有机酸和弱有机碱［10］。研究表明，这两类成分以游离状态存在时，大多在水中溶解度较小而出现沉淀，若采用适当方式使两者反应成盐后，不仅其溶解度会显著增加，更保证了制剂的稳定性。

利口清含漱液中金银花主要成分为绿原酸［11］，而北豆根为北豆根碱等生物碱类成分［12-13］，合煎过程中会产生酸碱反应，生成较稳定的酸碱复合物，可防止利口清含漱液在长期贮藏过程中含有量的下降。实验显示，合煎样品中绿原酸含有量高而稳定，pH值也相对稳定，而采用原工艺制成的样品中其波动较大。因此，合煎可以作为解决利口清含漱液含有量下降的方法之一。

3.3pH稳定剂的选择在复方制剂中［14］，一种成分很可能受处方中溶剂和其它成分或辅料的影响，从而发生改变。因此，一般需加入适当的酸、碱或缓冲溶液，使其处于最适pH值状态，以满足药物制剂安全、稳定、有效的要求。

由于利口清含漱液原工艺中pH值变化较大，因此改变了缓冲溶液，将原工艺中的碳酸氢钠改为磷酸氢二钠溶液，柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液［15］使利口清含漱液的pH值相对稳定，能够达到预期效果。

3.4澄清剂的选择原工艺中利口清含漱液长期贮藏时，会出现絮状物明显增多的问题，因此本实验加入澄清剂壳聚糖以提高其澄清度。壳聚糖是一种优良的澄清剂，具有良好的澄清性能，在中药提取方面具有广泛的应用［16-17］。结果表明，加入壳聚糖后样品絮状物明显减少，澄清度明显高于其他样品。此外，加入缓冲液磷酸氢二钠后，pH值相对稳定，而且絮状物也有所下降。因此，通过加入澄清剂壳聚糖和缓冲液磷酸氢二钠，同样可以有效解决这一问题。

综上所述，采用合煎工艺、加入澄清剂壳聚糖、改变pH缓冲剂等综合措施，可有效提高利口请含漱液的稳定性，而且能保证制剂中有效成分绿原酸的含有量，疗效得到保障。另外，通过HPLC法测定绿原酸的含有量时，操作简便，重复性好，可准确评价该制剂的质量。

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