RT-PCR检测SALL4在卵巢生殖细胞肿瘤中的表达*

郑君涛　杨丽娟

(1.威海市中心医院妇产科; 2.威海市妇幼保健院,山东 威海　264400)



RT-PCR检测SALL4在卵巢生殖细胞肿瘤中的表达*

郑君涛1杨丽娟2

(1.威海市中心医院妇产科; 2.威海市妇幼保健院,山东 威海264400)

目的研究SALL4与卵巢生殖细胞肿瘤的关系，探讨卵巢生殖细胞肿瘤的发生机制及相关基因的功能，寻找卵巢生殖细胞肿瘤早期检测、诊断的新指标。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例卵巢生殖细胞肿瘤、40例卵巢非生殖细胞肿瘤中SALL4的表达，分析SALL4与卵巢生殖细胞肿瘤的关系。结果SALL4在正常卵巢组织中均无表达，在卵巢生殖细胞肿瘤中的阳性表达率90.00﹪(36/40)显著高于卵巢非生殖细胞肿瘤17.50﹪(7/40),两者比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论SALL4在正常卵巢组织中无表达，在卵巢非生殖细胞肿瘤中极低表达，而在卵巢生殖细胞肿瘤中高表达，提示SALL4可能是一种新的卵巢生殖细胞肿瘤早期检测、评估恶性程度及预后的肿瘤标记物。

卵巢生殖细胞肿瘤；婆罗双树基因4(SALL4)；逆转录聚合酶链反应

卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统的三大恶性肿瘤之一，发病机制尚未明确，发病多为年轻女性，且缺乏早期诊断的有效指标，晚期治疗效果差，严重威胁女性的健康。临床实践中，外科手术、化疗和放疗一直是治疗卵巢生殖细胞肿瘤的主要方法，并对降低死亡率方面取得了一定的进展。但因为卵巢生殖细胞肿瘤缺乏有效的早期检测指标，治疗一直没有突破性的进展，且传统的卵巢肿瘤标志物，如CA199、CEA、AFP目前已证实缺乏特异性，因此，从基因水平上探讨卵巢生殖细胞肿瘤的发生机制及相关基因的功能，寻找卵巢生殖细胞肿瘤早期诊断及预后监测的肿瘤标志物，将是提高卵巢生殖细胞肿瘤治疗效果，降低其死亡率的关键所在。

婆罗双树基因(SAL)是最早克隆自果蝇体内，其编码蛋白具有多个C2H2型的双锌指结构序列，婆罗双树基因4(SALL4)是果蝇SAL/Spalt基因的同源异型基因[1-2]。SALL4在人体组织中广泛分布，且具有高度的保守性，有国外学者提出SALL4可能是细胞肿瘤的特异性标志物之一，已逐步成为研究热点[3-4]。本研究通过对所选取的卵巢标本采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定其中的SALL4的表达及其与临床病理特征、预后的关系，探讨其临床意义。

1　材料与方法

1.1标本收集选取烟台及威海市各级医院妇科2010年8月—2014年2月收治的卵巢生殖细胞肿瘤标本40例(未成熟畸胎瘤18例，无性细胞瘤12例，卵黄囊瘤10例；中位年龄36岁，年龄28～50岁)，术前均未接受任何化疗、放疗，同时取卵巢非生殖细胞肿瘤40例(浆液性肿瘤20例，粘液性肿瘤12例，卵泡膜细胞瘤8例；中位年龄41岁，年龄30～56岁)和正常卵巢组织10例(中位年龄45岁，年龄38～53岁)做为对照,组间年龄差异无统计学意义。肿瘤离体后即刻无菌取材，处理后-80℃冻存。所有标本临床资料完整，且均经两家三级甲等医院病理科病理学确诊，所有操作均符合伦理学规定。

1.2方法组织总RNA提取→单细胞悬液的制备→采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)→RNA纯度及浓度检测。

1.3统计学处理应用SPSS19.0软件，率的比较采用χ2检验，P≤0.05为差异具有统计学意义。

2　结　果

2.1RT-PCR扩增结果提取90例组织标本的总RNA，反转录后检测内参照基因GAPDH的表达，结果表明所有标本内参照基因GAPDH均稳定表达，证明RNA提取和逆转录反应成功[5]。经RT-PCR检测，10例卵巢正常组织均未扩增出293 bp条带，即不表达SALL4；7例卵巢非生殖细胞肿瘤和36例卵巢生殖细胞肿瘤检测到293 bp扩增条带，SALL4基因表达阳性[6]，部分标本扩增结果见图1。

2.2SALL4在3种卵巢组织中的表达在正常卵巢组织中无表达，在卵巢生殖细胞肿瘤的阳性表达率为90.00﹪,明显高于其在卵巢非生殖细胞肿瘤中的阳性表达率17.50﹪，差异有显著性，结果见表1。

图1　RT-PCR检测SALL4表达

卵巢组织n阳性(﹪)阴性卵巢正常组织卵巢非生殖细胞肿瘤卵巢生殖细胞肿瘤1040400(0.00)7(17.5)36(90.00)10334

注：χ2=57.57，P<0.001。

3　讨　论

卵巢恶性肿瘤是妇科常见恶性肿瘤之一，起病隐匿，缺乏早期诊断的有效指标，生殖细胞肿瘤恶性程度高，多发生于年轻女性，且发病机制尚未明确，严重影响女性健康。流行病学研究发现，内分泌因素、遗传因素、不良的营养和饮食习惯等是卵巢恶性肿瘤发病重要的危险因素[5]。因此探讨卵巢生殖细胞肿瘤的发生机制，寻找卵巢生殖细胞早期检测、诊断、评估预后的新指标是目前卵巢生殖细胞肿瘤研究中的至关重要的课题和研究热点。

SALL4是一种新发现的原癌基因，定位于人类染色体20q13，包含SALL4A、SALL4B两种亚型，分别编码165 KD、95 KD的蛋白，近几年的研究证实，SALL4是维持干细胞功能的调控基因，在胚胎发育和遗传病中所起的作用已被证实[6]。本研究结果证实，SALL4在所选取的卵巢正常组织中均无阳性表达，参阅报道，亦有报道称SALL4在正常卵巢组织无表达[7]，与本研究一致。在生殖细胞肿瘤中的明显高表达于非生殖细胞肿瘤、正常卵巢组织中的表达形成鲜明对比，这充分提示,SALL4在卵巢生殖细胞肿瘤中的过度表达可能导致肿瘤细胞生长、扩散和潜在转移。

虽然SALL4可以作为卵巢生殖细胞肿瘤的一个早期检测指标，但探索一种临床实用、高效的检测方法则具有更普遍的意义。因此寻找高灵敏和实用的检测方法就至关重要，可能是下一步的研究重点和方向，将大大提高卵巢生殖细胞肿瘤早期检测率及降低死亡率。

[1]Sakaki-Yumoto M,Kobayashi C,Sato A,et al.The murine homolog of SALL4,a causative gene in okihiro syndrome,is essential for embryonic stem cell proliferation,and cooperates with Sall in anorectal,heart,brain and kidney development[J].Development,2006,133(15):3005-3013.

[2]Yang J,Chai L,Gao C,et al.Sall4 is a key regulator of survival and apoptosis in human leukemic cells[J].Blood,2008,112 (3): 805-813.

[3]Naucler P,Ryd W,Totnberg S,et al.Efficacy of HPV DNA testing with cytology triage ang/or repeat HPV DNA testing in primary cervical cancer screening [J].J Natl Cancer Inst,2010,101(2):881-889.

[4]Kobayashi D,Kuribayshi K,Tanaka M,et al.SALL4 is essential for cancer cell proliferation and is overexpressed at early clinical staages in breast cancaer [J].Int J Oncol,2011,38(4):933-939.

[5]Frecer V,Miertus J,Borozdin W,et al.Molecular Modeling of c2h2Zinc Finger Mutation of putative Human Transcription Factor SALL4[J].IEJMD,2004,3: 295-307.

[6]KohlhaseJ,Heinrich M,Schubear L,et al.Okihiro syndrome is caused by SALL4 Mutations[J].Hum Mol Gnent,2002,11:2979-2987.

[7]Al-baradie R,Yamada K,ST Hilaire C,et al.Duane radial ray syndrome (Okihiro syndrome )maps to 20q13 and results from mutations in SALL4,a new member of SAL family[J].Am J Hum Genet,2002,71:1195-1199.

Expression and clinical significance of SALL4 by RT-PCR

ZHENG Jun-tao YANG Li-juan

(Weihai City Central Hospital,Weihai 264400,China)

Objective：To study the relationship between the expression of SALL4 and human ovarian germ cell tumors in order to find out the pathogenesis of carcinogengsis and the role of the cancer associated genes in the level of geng and find out a new index for early diagnosis and prognosis detection of ovarian germ cell tumors.Methods: Reverse Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)method was employed to detect the expression of SALL4 in human germ cell tumors.Results: The positive expression rate of SALL4 in normal ovarian tissues was zero.The positive expression rate of SALL4 in germ cell tumors was 90.00% (36/40),which was higher than that in non-germ cell tumor's 17.50% (7/40)(P<0.01).Conclusion: The expression rate of SALL4 in normal ovarian tissues is zero and in germ cell tumors is low,but the expression of SALL4 in germ cell tumors is higher.So SALL4 maybe a new ovarian germ cell tumors markers that can predict the prognosis of the patients.

ovarian germ cell tumors; SALL4; chain reaction immunohistochemisty

郑君涛(1982—)，男，山东威海人，主治医师，硕士，主要从事妇科肿瘤工作。

R737.31

A

1004-7115(2016)05-0491-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.05.005

2016-02-27)