非小细胞肺癌患者化疗后淋巴细胞恢复的影响因子

袁琪　林勇



·论著·

非小细胞肺癌患者化疗后淋巴细胞恢复的影响因子

袁琪林勇

目的 通过测定肺癌患者化疗前后不同时间点外周血淋巴细胞的变化，探讨化疗后各类型淋巴细胞的恢复特点以及临床和病理方面的影响因素。方法 采用流式细胞术检测非小细胞肺癌患者（87例）在化疗前1周、化疗后2周、3个月和9个月外周血NK、CD8+、CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞的水平，分析化疗前后淋巴细胞亚群的变化，并根据化疗方案及临床特点的不同进行亚组分析。结果 外周血T、B和NK细胞水平在化疗2周后均明显降低（P＜0.01），NK细胞和CD8+T细胞在3月内可恢复至化疗前水平，但CD4+T细胞和B细胞在化疗后9月后仍不能恢复至化疗前水平（P＜0.05）；采用含多西他赛方案的患者和使用其他方案的患者相比，淋巴细胞恢复的时间明显减慢（P＜0.05）。结论 化疗对非小细胞肺癌患者的免疫系统可能存在长期影响，在制定化疗方案时需要结合多方面因素综合考虑。

非小细胞肺癌；化疗；T淋巴细胞；B淋巴细胞

原发性肺癌（以下简称肺癌）是我国最常见的恶性肿瘤之一，2006～2011年我国肺癌5年患病率是130.2/10万。居男性恶性肿瘤第2位。居女性恶性肿瘤第4位［1］，其中大约有30%确诊肺癌的患者会接受全身化疗［2］。药物的作用机理为攻击迅速生长分裂的细胞，主要为肿瘤细胞，但其他正常细胞也会受到化疗药物的破坏而导致损伤。目前在肺癌［3］和其他实体瘤［4］中，都已经有研究发现在化疗最后疗程之后的3个月内会发生外周血淋巴细胞的下降，但报道多限于CD4+、CD8+等T淋巴细胞，而有关肺癌患者的B淋巴细胞在化疗后的变化以及各类型淋巴细胞在化疗之后的较长时间内的恢复情况尚不明确。本研究主要通过观察肺癌患者化疗前和之后不同时间点外周血中NK、CD8+、CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞的水平，探讨化疗后各类型淋巴细胞的动态变化以及临床和病理方面的影响因素。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2013年8月～2014年4月在南京市胸科医院确诊并治疗的原发性肺癌患者共87例为观察组，观察组的所有患者均经过病理明确诊断并接受过4～6个周期全身化疗，入选患者中男性59例，女性28例；年龄33～74岁，平均年龄为（62±11.0）岁；其中：腺癌56例，鳞状细胞癌31例；术后辅助化疗24例，晚期一线化疗63例；化疗的方案包括：培美曲塞或多西他赛联合顺铂方案。排除标准：（1）年龄＞75岁；（2）有长期糖皮质激素或其他免疫抑制药物的服药史；（3）合并有其他恶性肿瘤、血液系统疾病；（4）入组本试验前10年内有全身化疗病史。本研究中所有患者均签订了知情同意书。

1.2方法

1.2.1标本采集 所有研究对象分别在化疗前1周，化疗后2周、3个月、9个月留取外周血标本，均于清晨空腹采集肘正中静脉血4 ml，置于抗凝管中，由乙二胺四乙酸抗凝，24 h内流式细胞术检测外周血中NK、CD8+、CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞数目。

1.2.2检测方法 流式细胞术检测淋巴细胞表型：离心抗凝管中的血液后，取下层细胞悬液2 ml置离心管中，加入红细胞裂解液8 ml，静置10 min后再次离心，取离心管底部白色物质，用PBS缓冲液将其溶解，置于EP管中，加红细胞裂解液再次离心，留取底部白色物质。PBS液溶解后，加入带荧光标记的单克隆抗体检测，采用美国BD公司生产的BD FACS calibur流式细胞仪检测血液中NK、CD8+、CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞的数目。

1.3统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，计量资料用（均数±标准差）表示，多组间比较采用F检验，组内比较采用t检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1化疗前后各类型淋巴细胞的动态变化和特点

在化疗2周后，四种淋巴细胞数目均较化疗前明显下降（P＜0.01），在化疗3个月后，NK细胞和CD8+细胞可基本恢复至化疗前水平，但直到化疗9个月后，B细胞和CD4+的水平仍不能恢复至化疗前水平（P＜0.05）。见图1。

2.2不同化疗方案对淋巴细胞恢复的影响

使用培美曲塞联合方案的患者与使用多西他赛联合方案的患者相比，化疗前的B细胞和CD4+T细胞水平无差异。对于B细胞，在化疗后2周、3个月和9个月，多西他赛组的细胞数目明显低于培美曲赛组（P＜0.05）；在化疗后9个月，培美曲塞组B细胞可基本恢复至化疗前水平（P=0.248），但多西他塞组仅恢复至化疗前51%。对于CD4+T细胞，在化疗后2周，多西他赛组的细胞数目也明显低于培美曲赛组（P＜0.05），但在之后的各时间点，两种方案的CD4+T细胞恢复情况并无差异。见图2。

3　讨论

虽然分子靶向治疗在非小细胞肺癌领域的进展日新月异，但目前传统化疗无论在早期术后辅助治疗还是在相关靶点基因野生型的晚期治疗中仍占有重要的地位。在日常临床工作和研究中，我们往往重视化疗的疗效评估和预防控制常见不良反应如骨髓抑制等，但随着治疗总生存期的延长，有学者认为需要提高对化疗后长时间内其他方面受益的关注［5］，而目前对全身化疗对免疫系统的长期影响所知甚少。有研究发现机体的免疫功能和生物免疫制剂的疗效有关，而化疗引起的免疫功能受抑制可能会降低如单克隆抗体的反应［6］；在2015年，生物免疫治疗在非小细胞肺癌中进展迅速，我们推测了解化疗对机体免疫系统的影响机制将对生物制剂的应用有重要的指导意义。

我们的研究结果发现，化疗在短时间内（3～6个月）可以引起各主要淋巴细胞亚型的下降，但化疗对NK细胞和CD8+T细胞的影响时间较短，化疗9个月后基本可恢复至化疗前水平；这和既往的研究结果相同，但类似研究中均缺乏B细胞的观察［7］，本研究发现对于B细胞和CD4+T细胞，即使在末次化疗9个月后仍受到抑制，而且以B细胞尤为严重。结合本研究结果，我们认为化疗可能会对患者的免疫系统产生较为长期的抑制作用，在临床化疗后需要长期对T细胞亚群等指标进行检测。

非小细胞肺癌患者化疗后免疫功能改变的情况较为复杂，各淋巴细胞亚群表现出不同的表型［8］。为了明确不同化疗药物对研究结果是否有影响，本研究进行了亚组分析。我们发现多西他赛联合顺铂方案对B细胞和CD4+T细胞，在化疗后短时间内的抑制作用均明显严重于培美曲赛联合顺铂方案，而且使用多西他赛联合方案后，B细胞水平在长时间后仍然不能恢复至化疗前水平。我们推测，原因可能主要与化疗药物本身的细胞毒特性有关，因为多西他赛与培美曲赛相比，骨髓抑制的不良反应更为严重。那么我们推测，对于同时进行化疗和免疫治疗的非小细胞肺癌患者，似乎培美曲赛的联合铂类方案优于多西他赛联合铂类方案。通过亚组分析的结果，我们认为使用多西他赛联合方案是影响机体免疫系统恢复的不良因素，在临床上应避免合并这种不良因素的情况。综合本研究的结果，我们认为化疗对非小细胞肺癌患者的免疫系统可能存在较长的影响，因此在化疗后需要定期进行检测；在制定化疗方案时，需要综合多方面因素考虑。

图1　淋巴细胞各亚型在化疗前后不同时间点的数目（个/ul，n=87，*表示P＜0.05，差异具有统计学意义；ns表示P＞0.05，差异无统计学意义）

图2　不同方案化疗后B细胞和CD4+T细胞水平的变化（个/ul，细胞数%，n=87，*表示P＜0.05，差异具有统计学意义；ns表示P＞0.05，差异无统计学意义）

［1］石远凯，孙燕，于金明，等.中国晚期原发性肺癌诊治专家共识（2016年版）［J］.中国肺癌杂志，2016，16（1）:33-38.

［2］Lin J，Carter CA，McGlynn KA，et al.A Prognostic Model to Predict Mortality among Non-Small-Cell Lung Cancer Patients in the U.S.Military Health System［J］.J Thorac Oncol，2015，10（12）: 1694-1702.

［3］邹静，刘斌，陈雪华，等.肺癌患者化疗后外周血T淋巴细胞亚群变化特点及临床意义［J］.中国免疫学杂志，2010，26（11）: 1016-1020.

［4］吴建忠，陈琳，刘晓安，等.肿瘤浸润性淋巴细胞比例在乳腺癌新辅助化疗中的意义［J］.肿瘤防治研究，2015，42（11）:1114-1118.

［5］Ozeki N，Kawaguchi K，Fukui T，Fukumoto K，et al.Which variables should be considered in patients with stage II and III nonsmall cell lung cancer after neoadjuvant therapy？［J］.Nagoya journal of medical science，2015，77（3）:475-480.

［6］Stewart EL，Mascaux C，Pham NA，et al.Clinical Utility of Patient-Derived Xenografts to Determine Biomarkers of Prognosis and Map Resistance Pathways in EGFR-Mutant Lung Adenocarcinoma［J］.Journal of clinical oncology，2015，33（22）: 2472-2480.

［7］Zhao Z，Liao H，Ju Y.Effect of compound Kushen injection on T-cell subgroups and natural killer cells in patients with locally advanced non-small-cell lung cancer treated with concomitant radiochemotherapy［J］.Journal of Traditional Chinese Medicine，2016，36（1）:14-18.

［8］Verma R，Foster RE，Horgan K.Lymphocyte depletion and repopulation after chemotherapy for primary breast cancer［J］.Breast Cancer Res，2015，18（1）:1-12.

The Influence Factor of Lymphocyte Recovery After Chemotherapy in Patients With Non-small Cell Lung Cancer

YUAN Qi LIN Yong Department of Pulmonary Disease，Nanjing Chest Hospital，Nanjing Jiangsu 210029，China

Objective To investigate change of lymphocyte subsets before and after chemotherapy in patients with NSCLC，to explore the infuences of current regimens and clinic-pathological factors on circulating lymphocyte levels and phenotypes.Methods We used fow-cytometry to assess circulating lymphocyte levels and phenotypes in 87 NSCLC patients before chemotherapy and at time-points from 2 weeks to 9 months after chemotherapy completion.Results Levels of B，T and NK cells were signifcantly reduced 2 weeks after chemotherapy （P＜0.01），levels of all cells recovered to some extent，although B and CD4+T cells remained signifcantly depleted even 9 months post chemotherapy differences in chemotherapy regimen were associated with significant differences in depletion extent or repopulation dynamics （P＜0.05）.Conclusion Chemotherapy of NSCLC is associated with long-term changes in immune parameters that should be considered during clinical management.

NSCLC，Chemotheraphy，T Lymphocyte，B Lymphocyte

R453

A

1674-9308（2016）21-0029-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.016

南京市胸科医院呼吸内科，江苏 南京 210029

林勇，E-mail:linyong63@163.com