小花棘豆提取物抗炎镇痛作用的研究

2016-08-30陈根元贾琦珍

中国兽医杂志 2016年7期

关键词：足趾正丁醇抑制率

陈根元，贾琦珍，邓　利，王　帅

（塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，新疆阿拉尔 843300）

小花棘豆提取物抗炎镇痛作用的研究

陈根元，贾琦珍，邓利，王帅

（塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，新疆阿拉尔 843300）

为探讨小花棘豆活性成分的抗炎镇痛作用，通过醋酸扭体法、二甲苯诱导的小鼠耳肿胀法、蛋清致小鼠足趾肿胀法和热板法，观察其作用效果。结果显示，小花棘豆氯仿相与正丁醇相均可显著抑制小鼠耳肿胀和足趾肿胀，还具有较好的镇痛效果，其作用效果与阳性药物相当。结果表明，小花棘豆活性成分具有较好的抗炎镇痛作用。

小花棘豆；活性成分；抗炎镇痛

小花棘豆（Oxytropis glabra DC）为豆科棘豆属，是我国西部草原危害最严重的有毒植物，现已严重威胁本区草地畜牧业发展。但近有研究发现小花棘豆具有一定的药用价值，能够治疗牙痛、关节炎等，具有麻醉、镇静、止痛等功效[1]。李观海等[2]从小花棘豆根中提取得到总生物碱，发现其可抑制小鼠肉瘤S180的生长，并具有较强的镇痛和镇静作用。王帅等[3]研究发现，小花棘豆黄酮类物质具有较强的自由基清除能力，并可缓解运动导致的脂质抗氧化作用。目前国内外对小花棘豆的研究主要集中在家畜的中毒机理及防治，对其利用的研究报道较少。而且由于地域差异，不同产地的小花棘豆化学成分组成差异较大[4]。本试验通过提取小花棘豆的活性成分，对其抗炎、镇痛作用进行研究，以期为进一步开发利用提供科学依据。

1　材料与方法

1.1试验材料、试剂与仪器小花棘豆2014年8月采集于新疆克州阿合奇县色帕巴依乡，取植株的地上部分，阴干、20目粉碎后备用。

BS124型精密电子天平，德国Sartorius；BR-200型智能热板仪，成都泰盟科技有限公司；Direct-Q3型超纯水系统，美国Millipore；二甲苯、醋酸等试剂均为国产分析纯；实验室用水为超纯水。

阳性药物：布洛芬缓释胶囊（国药准字H10900089），中美天津史克制药有限公司。

1.2试验动物试验动物选用6～8周龄昆明系小鼠，体重20 g左右，由塔里木大学动物科学学院实验站提供。

1.3试验方法

1.3.1小花棘豆活性物质的提取准确称取小花棘豆样品1 000 g，加入1 L超纯水，超声波协助提取30 min，过滤即得小花棘豆水提液。将水提液浓缩后依次利用5倍体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，即得小花棘豆活性成分各极性段萃取部分，分别浓缩至浸膏。各萃取相分别溶于生理盐水，制备高剂量（1 g/L）、中剂量（0.5 g/L）和低剂量（0.1 g/L）溶液，备用。

1.3.2小花棘豆活性成分对二甲苯所致耳廓肿胀的影响将小鼠随机分为试验组、阴性对照组和阳性对照组，试验组分别使用小花棘豆总提取物、石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和正丁醇相灌胃，阴性对照组使用生理盐水灌胃，阳性对照组使用布洛芬缓释剂（剂量50 mg/mL体重）。每个试验组分别设置高（1 g/L）、中（0.5 g/L）和低（0.1 g/L）3个剂量，每个剂量组3只小鼠。各组小鼠按均灌胃0.2 mL，连续7 d。末次给药1 h后，在小鼠右耳正反两面使用微量移液器均匀涂布二甲苯，剂量为50 μL/只，左耳为对照。30 min后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用打孔器在两耳同一部位扎下耳片称重，然后计算肿胀率和肿胀抑制率[3]。计算方法为：肿胀率=（右耳片重-左耳片重）/左耳片重×100%；肿胀抑制率=（对照组平均肿胀率-试验组平均肿胀率）/对照组平均肿胀率×100%。

1.3.3小花棘豆活性成分对蛋清致足趾肿胀的影响小鼠分组同1.3.2。末次给药1 h后，于右后肢足趾皮下注射100 mL/L新鲜鸡蛋清-生理盐水溶液0.1 mL致炎，用游标卡尺分别测量致炎前和致炎后2 h时的小鼠足趾厚度，然后计算肿胀率和肿胀抑制率[5]。计算方法为：肿胀率=（致炎后足趾厚度-致炎前足趾厚度）/致炎前足趾厚度× 100%；肿胀抑制率=（对照组平均肿胀率-试验组平均肿胀率）/对照组平均肿胀率×100%。

1.3.4小花棘豆活性成分对醋酸所致小鼠扭体反应的影响小鼠分组同1.3.2。末次给药1 h后，各组小鼠按每10 g体重分别腹腔注射0.6%醋酸0.1 mL，观察小鼠扭体潜伏期及15 min内出现的扭体次数。计算小鼠镇痛抑制率[6]。计算方法为：镇痛抑制率=（对照组扭体反应次数-试验组扭体反应次数）/对照组扭体反应次数×100%。

1.3.5小花棘豆活性成分对电热板致痛的影响

小鼠分组同1.3.2。末次给药1 h后，将小鼠置于55℃±0.5℃的智能热板仪上，记录小鼠足底接触热板至出现舔后足的时间作为痛阈指标，并计算痛阈提高率[6]。计算方法为：痛阈提高率=（给药后痛阈时间-给药前痛阈时间）/给药前痛阈时间×100%。1.4数据分析试验数据使用SPSS 11.5软件中One-Way ANOVA进行单因素方差分析。

2　结果与分析

2.1小花棘豆活性成分对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响试验结果表明，3个浓度梯度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相与阴性对照相比，对二甲苯所致小鼠耳肿胀均有极显著的抑制作用（P<0.01），其中正丁醇相的中、高浓度及氯仿相的高浓度抑制效果与阳性药物相近。高浓度的石油醚相对二甲苯所致小鼠耳肿胀的抑制率显著高于阴性对照（P<0.05），其余各组与阴性对照差异不显著（P>0.05）。

表1　小花棘豆活性成分对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

2.2小花棘豆活性成分对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响由表2可知，中、高浓度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相对蛋清致小鼠足趾肿胀的抑制率均极显著高于阴性对照（P<0.01），低浓度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相对蛋清致小鼠足趾肿胀的抑制率显著高于阴性对照（P<0.05），其余各组与阴性对照差异不显著（P>0.05）。高浓度的小花棘豆正丁醇相和氯仿相作用效果与阳性药物相近。

表2　小花棘豆活性成分对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响

2.3小花棘豆活性成分对醋酸致小鼠扭体反应的影响由表3可知，中、高浓度的小花棘豆氯仿相和所有浓度的正丁醇相对醋酸致小鼠扭体反应的抑制率均极显著高于阴性对照（P<0.01），低浓度的小花棘豆氯仿相对醋酸致小鼠扭体反应的抑制率显著高于阴性对照（P<0.05），其余各组与阴性对照差异不显著（P>0.05）。试验表明，小花棘豆氯仿相与正丁醇相中的活性成分具有一定的镇痛作用，并呈现出一定的剂量效应。

2.4小花棘豆活性成分对电热板致痛的影响试验结果表明，小花棘豆活性成分均可延长小鼠对疼痛反应的时间，提高痛阈。其中小花棘豆氯仿相和正丁醇相灌胃小鼠的痛阈时间均极显著高于阴性对照（P<0.01），高浓度的小花棘豆石油醚相和乙酸乙酯相及中浓度的乙酸乙酯相灌胃小鼠的痛阈时间均显著高于阴性对照（P<0.05），其余各组与阴性对照差异不显著（P>0.05）。高浓度的氯仿相和正丁醇相的镇痛效果优于阳性药物。

表3　小花棘豆活性成分对醋酸致小鼠扭体反应的影响

表4　小花棘豆活性成分对电热板致痛小鼠的影响

3　讨论

小花棘豆中含有极为复杂的化学成分，目前研究表明，小花棘豆中含有至少23种生物碱[4]，12种黄酮及其衍生物[7]，7种三萜皂苷类物质及57种挥发油成分[8]。李观海等[2]利用热板法检测小花棘豆总生物碱的镇痛作用，发现小鼠的痛阈提高率均在130%以上，表现出了较强的镇痛作用。黄酮类化合物在抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗微生物等方面均有一定的作用[9]。本试验通过醋酸扭体法、二甲苯诱导的小鼠耳肿胀法、蛋清致小鼠足趾肿胀法和热板法，研究小花棘豆不同提取相活性成分的抗炎镇痛作用。结果发现，小花棘豆氯仿相和正丁醇相均具有较好的抗炎镇痛作用。王帅等[4]研究发现，小花棘豆氯仿相和正丁醇相中含有较多的生物碱、黄酮等化合物，表明小花棘豆生物碱、黄酮类化合物具有较好的抗炎镇痛作用。

炎症是具有血管系统的活体组织对局部损伤的反应，致炎因子可使血管扩张，血管壁通透性增强，导致血浆中的白细胞和蛋白质等渗出，从而造成组织肿胀[10]。本试验建立了2种炎症模型，分别对小花棘豆不同提取相中的活性成分的抗炎作用进行了考察。结果表明，小花棘豆氯仿相和正丁醇相中的活性物质对慢性、急性炎症均具有较好的抑制效果，部分指标作用效果甚至超过了阳性药物。表明小花棘豆活性成分具有出色的抗炎活性。TNF-α、IL-1、IL-6、IL-13、PGE2、LT等都是与炎症反应紧密相关的炎性介质，小花棘豆活性成分的抗炎作用与何种炎性因子有关，需要进一步的研究探讨。镇痛作用与NO、NOS及肾上腺素的合成与表达密切有关，小花棘豆活性成分的镇痛作用机制有待于进一步研究。