ZD制剂对小鼠急性软组织损伤的毛细血管通透性及血液流变影响的研究

柏　合，，王　未，李云章，林德贵

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2.牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157013；3.中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193）

ZD制剂对小鼠急性软组织损伤的毛细血管通透性及血液流变影响的研究

柏合1，2，王未1，李云章1，林德贵3

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2.牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157013；3.中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193）

为了观察自制外用ZD制剂对小鼠急性软组织损伤的疗效，初步探讨其作用机理，分别对小鼠采用腹腔注射醋酸溶液，观察自制外用ZD制剂对小鼠毛细血管通透性的影响；对小鼠造急性软组织损伤模型，测定应用自制外用ZD制剂后小鼠血液流变学指标，确定其对血液流变学的影响。结果ZD制剂抑制毛细血管通透性增加（P<0.01）；降低血液流变学指标（P<0.05或P<0.01）。表明ZD制剂通过抑制毛细血管通透性和降低血液流变学的指标，对急性软组织损伤修复具有良好的促进作用。

ZD制剂；软组织损伤；毛细血管通透性；血液流变学

软组织损伤属于中医“筋伤”范畴，是指外力作用致皮肤、皮下组织、筋膜、肌肉、肌腱、韧带、滑膜、关节囊等软组织及一部分软骨和周围神经、血管的损伤。赛马的运动损伤是影响其经济价值的重要疾病，其肢蹄软组织损伤疾病是较为常见的。据统计，马属动物肢蹄病占外科病例总数的70%以上[1]。目前国内外常采用非甾体抗炎药来治疗，但临床研究表明，长期服用这类药物往往会产生多种不良反应，如胃肠道损害、肾衰竭、心血管疾病等[2]。因此开发一种药效好、毒副作用小、携带方便的外用中药制剂就显得尤为必要。中国传统医学根据中医学理论，对急性软组织损伤治疗积累了丰富的经验，在实际应用中取得了良好的效果[1，3-4]。

ZD制剂是由临床治疗软组织损伤有良好效果的外用验方研制而成的，由乳香、没药、当归、红花等12味中药组成，加入现代赋形剂和透皮剂制成的一种新型中药软膏剂型，具有活血祛瘀、

舒筋活络、消肿止痛等功效。为探讨其活血祛瘀的作用机理，我们从毛细血管通透性和血液流变学角度对其进行实验研究，对进一步精制及合理应用ZD制剂提供实验依据。

1　材料与方法

1.1实验动物昆明系小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，由内蒙古大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（蒙）2002-0001号。

1.2药物及试剂ZD制剂（由川椒、茵陈、乳香、没药、红花、伸筋草、海桐皮、地骨皮、白芨、桂枝、当归、透骨草12味药材组成，比例为：2∶3∶4∶4∶4∶4∶4∶4∶4∶7∶8∶8），由本院制备；阳性组药物为按摩乳（济南全力制药有限公司，批号：Z37020377）；二甲苯；硫化钠；冰醋酸；伊文思蓝。

1.3仪器电子分析天平；恒温水浴锅；分光光度计；血液流变检测仪。

1.4ZD制剂的制备先对原料药材经粉碎、浸泡、煎煮、过滤、浓缩等处理，后分成油相和水相分别处理，再将水相处理液加入油相处理液中，混匀，加入冰片和氮酮，即形成均匀细腻的半固体的ZD制剂。

1.5药物分组和给药剂量ZD制剂分为高、中和低剂量组，各组剂量分别为每1克含有0.064 g、0.032 g、0.016 g生药的ZD制剂，每组用量0.2 g/ cm2；阳性组为按摩乳0.2 g/cm2；空白对照组给予相同量基质0.2 g/cm2。

1.6对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响[5]取昆明系小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，即外用中药高、中和低剂量组、阳性对照组（按摩乳）、空白对照组。所给药物涂于腹部皮肤，给药时间间隔为1 h，给药3次。于末次给药后15 min，经尾静脉注射1%伊文思蓝生理盐水0.2 mL，并同时腹腔注射0.6%醋酸生理盐水溶液0.2 mL。30 min后处死动物。剪开小鼠腹部皮肤，分离肌肉，暴露腹腔，用5 mL生理盐水分数次洗涤腹腔，收集冲洗液。经3 000 r/min离心，取上清液用分光光度法在波长590 nm处测定伊文思蓝的吸光度值。

1.7对小鼠血液流变学的影响

1.7.1动物造模参考文献的造模方法[6]，制造急性软组织损伤模型。试验前1 d用8%硫化钠溶液脱去小鼠左侧臂部及大腿部毛。选择大腿中部外侧软组织做好标记，将小鼠侧卧式固定于自制软组织打击器上，用50 g砝码从15 cm高度自由落下，连续击打2下，打击后肉眼即见打击部位肿胀、瘀血、皮肤完整无破损且无骨折，说明造模成功。

1.7.2分组及给药动物分为6组，即外用中药高、中和低剂量组、阳性对照组（按摩乳）、空白对照组及模型组，各组按剂量涂抹相应药物，模型组不给药。

1.7.3对小鼠血液流变学的影响取昆明系种小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，每组10只。造模后，于小鼠损伤处涂抹相应药物，每天涂药2次，连续治疗4 d，第5天采用摘除眼球采血1 mL，迅速注入肝素抗凝管内，测定血液流变学各项指标。

1.8统计学方法数据采用SAS9.0软件处理。试验数据以X±SD表示，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2　结果

2.1对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响结果表明，与空白对照组比较，外用中药各剂量组均可明显抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性（P<0.01），其中，高剂量组的效果接近于按摩膏组。见表1。

表1　各处理组对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（X±SD，n=10）

2.2对小鼠血液流变学的影响结果表明，模型组小鼠各项指标均明显高于空白组（P<0.05或P< 0.01），说明造模是成功的。与模型组比较，外用中药膏剂各剂量组均可使全血黏度、血浆黏度等指标明显降低，有显著差异（P<0.05或P<0.01），表明外用中药膏剂可使血瘀模型之黏、浓、凝、聚状态明显恢复，有活血化瘀之功效。见表2。

3　讨论

软组织损伤属于中医“筋伤”范畴，中国传统兽医学认为，软组织损伤的本质是血瘀，损伤之后脉络破损，血离经而成瘀，瘀而化热，瘀积不散，为肿为痛。现代医学研究表明，血液流变性的改变是血液循环和微循环障碍发生的原因和基础。软组织损伤使局部毛细血管破裂，血液循环破坏，出血组织细胞坏死，血管通透性增加[5]，血管内液渗到组织间隙，引起血液的高黏、高凝、高浓[7]等血液流变学改变。

表2　各处理组对小鼠血液流变学指标的影响　（X±SD，n=10）

中药外用是药物通过透皮吸收作用于创伤局部，从而维持局部相对稳定的血药浓度，起到散瘀、消肿和止痛的功效[8]。通过活血化瘀治疗，可以改善局部及全身血液循环，以此达到活血化瘀的目的，其病因及疗效可能与血液流变性相关[9]。

ZD制剂是在传统验方的基础上研制而成。外用中药膏剂中的红花能抑制血小板的聚集，从而起到抗凝作用防止血栓形成；当归具有增强特异性和非特异性免疫功能及镇痛、镇静、抗炎作用；乳香具有降低血小板粘附、镇痛作用[10]。ZD制剂中各种成分都不同程度降低毛细血管的通透性，减少炎症渗出及红细胞外漏，降低全血和血浆黏度，减轻红细胞的聚集，改善红细胞变形能力，使局部血液循环恢复，改善血液的流变性，从而达到消肿止痛的作用。方剂中又加入了冰片和氮铜作为透皮剂，使药物更好的渗透进组织中，发挥药效。ZD制剂能显著降低毛细血管通透性和改善血液的流变性，对急性软组织损伤的修复有良好的作用，从而为治疗赛马肢蹄软组织损伤，提高其经济价值，提供了重要的实验室依据。

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[9]Gierer P，Laue F，Hoffmann J N，et al.Antithrombin reduces in⁃flammation and microcirculatory perfusion failure in closed softtissue injury and endotox-emia[J].Crit Care Med，2013，41（3）：867-873.

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A Research on Capillary permeability and Hemorrheology of ZD Preparation treating acutesoft tissueinjuries in mice

BAI He1，2，WANG Wei1，LI Yun-zhang1，LIN De-gui3
（1.College of Veterinary Medicine，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China；2.MuDanJiang Medical University，Mudanjiang 157013，China；3.College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

To observe the therapeutical effect of self-made topical ZD Preparation on mice with acute soft tissue injury and preliminary study its mechanism of action.Observation of the effect of self-made topical ZD Preparation on the capillary permeabili⁃ty of mice which were given acetic acid solution by intraperitoneal injection respectively.And acute soft tissue injury model mice were measured the effect of self-made topical ZD Preparation on hemorheology.The results showed that ZD preparations inhibited the increased capillary permeability（P<0.01）and reduced Hemorheology（P<0.05 or P<0.01）.ZD preparations promote the repair of acute soft tissue injury by inhibiting capillary permeability and lower indicators hemorheology.

ZD Preparation；soft tissue injury；Capillary permeability；Haemorheology

LI Yun-zhang

S853.7

A

0529-6005（2016）07-0025-03

2015-01-29

国家自然科学基金项目（31360629）；中国农业大学-内蒙古农业大学校际合作项目（ZN201004）

柏合（1987-），女，硕士，研究方向为兽医外产科学，E-mail：568789575@qq.com

李云章，E-mail：liyunzhang1956@163.com