高效液相色谱法测定环丙酰草胺原药中有效成分的含量

陈迎丽，王永士，肖　飞，宋光林，杨鸿波

(1贵州大学，贵州　贵阳　55002；2贵州省分析测试研究院，贵州　贵阳　550002)



高效液相色谱法测定环丙酰草胺原药中有效成分的含量

陈迎丽1，2，王永士2，肖飞1，2，宋光林2，杨鸿波2

(1贵州大学，贵州贵阳55002；2贵州省分析测试研究院，贵州贵阳550002)

为了建立一种高效液相色谱测定环丙酰草胺含量的分析方法，为农药登记提供科学的评估数据。采用高效液相色谱法，使用ZORBAXSB-C18色谱柱，以甲醇+水(含2 %冰乙酸)=90+10(V/V)为流动相，流速为1mL/min，在255nm波长下对环丙酰草胺进行定量分析。结果表明当环丙酰草胺质量浓度在25～400mg/L范围内，高效利用液相色谱法的线性相关系数为0.999 1，精密度试验相对标准偏差为0.20 %，平均回收率为：99.2 %。该分析方法准确、快速，适用于环丙酰草胺定量分析。

环丙酰草胺，高效液相色谱，定量分析

环丙酰草胺化学结构见图1，纯品为白色粉状固体，通用名称为Cyclanilide，化学名称为：1-(2，4-二氯苯氨基羰基)环丙烷羧酸，分子式：C11H9Cl2NO3，CAS号：113136-77-9，熔点195.5℃，蒸汽压<1×10-5Pa(25℃)、8×10-6Pa(50℃)，分配系数Kow lgP=3.25(21℃)。环丙酰草胺属植物生长调节剂，即可以抑制顶端优势，促进植物侧芽萌发、侧枝的生长，对一些观赏植物起到自然修剪的作用，如秋焰红枫[1]，也可以增加一些观赏花花朵的数量，如轮叶金鸡菊[2]。从经济方面考虑，环丙酰草胺可以促进一些植物的成熟，缩短植物的收获时间，如苹果[3]，棉花[4]等。有文献报道[5]，使用HPLC-MS / MS的方法可以检测出水果中的环丙酰草胺含量，但近年来关于环丙酰草胺原药中有效成分分离和定量分析的文献报道很少，本文采用反相高效液相色谱法，使用C18色谱柱和紫外可变波长检测器，对环丙酰草胺原药中有效成分进行分离和定量分析。该方法具有操作简单、准确度高，重现性好等特点，能为环丙酰草胺的生产质量控制和分析方法提供参考。

图1　环丙酰草胺结构式Fig.1　The constitutional formula of Cyclanilide

1　实验部分

1.1仪器与试剂

Agilent 1220 液相色谱仪；Agilent UV-Vis 8453紫外分光光度计；超声波振荡器；AL204电子天平；甲醇(色谱纯，Honeywell Burdick Jackson Ulsan，680-160 Korea，批号：100296)；环丙酰草胺标准品(99.9 %，Dr.Ehrenstorfer GmbH)；蒸馏水为新蒸二次蒸馏水；环丙酰草胺原药(四川国光农化股份有限公司)。

1.2色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18，4.6×250 mm×5 μm；流动相：甲醇+水(含2 %冰乙酸)=90+10(V / V)；流速：1 mL / min；检测波长：255 nm；柱温：30 ℃；进样量：5 μL。在上述色谱操作条件下，环丙酰草胺的保留时间大约为3.9 min。

图2　环丙酰草胺标样色谱图Fig.2　HPLC standard chromatogram of cyclanilide

图3　环丙酰草胺原药色谱图Fig.3　HPLC chromatograms of cyclanilide

1.3试验方法

1.3.1标准溶液的配制

称取0.025 0 g环丙酰草胺标准品于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解定得到环丙酰草胺标准品浓度为1 000 mg / L的储备液，摇匀备用。稀释1 000 mg / L的储备液为以下浓度：25、50、100、200和400 mg / L，摇匀作为标准溶液。

神经外科患者免疫力低,侵入性操作多,是医院感染监测的重点人群。通过主动性目标监测,及时发现感染的危险因素,采取针对性的预防控制措施。

1.3.2试样溶液的配制

准确称取环丙酰草胺原药0.010 3、0.010 1、0.010 2、0.010 2、0.010 0 g于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到环丙酰草胺原药浓度分别为103 mg / L、101 mg / L、102 mg / L、102 mg / L、100 mg / L的溶液，摇匀作为试样溶液。

1.3.3样品溶液的测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定性后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针环丙酰草胺的响应值相对变化小于1.2 %后，按标准溶液、试样溶液的顺序进行测定。

1.3.4计算

样品有效成分含量W(%)按下式(1)计算：

W=C×P×V×D×10-6/ M

(1)

式中：

W：样品有效成分含量(%)；

C：测定浓度(mg·L-1)；

P：标准样品纯度(%)；

V：样品定容体积(mL)；

D：样品稀释倍数；

M：样品质量(g)。

2　结果与讨论

2.1流动相的选择

色谱柱及流动相的选择是决定液相色谱分离效果的关键，分别用甲醇和乙腈配制流动相进行实验，甲醇在255 nm波长下吸光度值低，粘度小，分离效果和色谱峰形均较好，所以选择甲醇作为流动相中的有机相。环丙酰草胺为弱酸性，因此当流动相呈弱酸性时，可以抑制待测组分的解离，延长各组分在固定相上的保留时间并改善峰形。为使其能得到完全分离，调节流动相中水溶液的pH进行实验。同时分别用盐酸、磷酸、甲酸和冰乙酸来调节流动相的酸度，由实验得知用冰乙酸调节pH时，引起基线的漂移最小，灵敏度最佳，所以本实验采用2 %冰乙酸调节流动相的pH值。

2.2检测波长的选择

使用紫外可见光分光光度仪对环丙酰草胺的标准溶液进行200～400 nm的全波长扫描(见图4)得到其最大吸收波长为210 nm，但是在该波长处干扰峰多，不适合常量分析。在255nm为环丙酰草胺的第2个吸收峰，在该波长下，环丙酰草胺吸收值适中，线性范围宽，可以满足定量分析要求。

图4　环丙酰草胺紫外吸收谱图Fig.4　UV Absorbance of cyclanilide

2.3线性范围

在1.2色谱条件下，分别注入不同质量浓度的环丙酰草胺标准溶液，从而得到不同质量浓度的环丙酰草胺的峰面积。峰面积(y)与浓度(x)之间表现良好的线性，线性方程为y=20.237 28x+ 32.366 42，相关系数为：0.999 1。具体数据见表1，校正曲线见图5。

2.4精密度测定

在相同的色谱操作条件下，取同一原药样品平行测定6次，计算环丙酰草胺的浓度。结果见表2，方法的标准偏差为0.21 %，变异系数为0.20 %，表明该方法可用。

表1　环丙酰草胺标准品的浓度与峰面积Tab.1　The concentration and peak area of cyclanilide standard

图5　环丙酰草胺标准曲线Fig.5　Calibration curve of cyclanilide 表2　环丙酰草胺精密度测定结果 Tab.2　The precision of the determination results of cyclanilide

样品编号测定含/(μg·mL-1)平均值/%标准偏差/%变异系数/%1100.512100.903100.484100.475100.586100.27100.540.210.20

2.5准确度测定

取0.010 1 g样品，用甲醇溶解并定容至100 mL，配制成100 μg / mL溶液；将100 μg / mL的环丙酸酰草胺标准品溶液按照体积比1∶1加入到上述样品溶液中，配制成浓度为100.50 μg / mL的待测溶液。重复上述操作，配制6份与待测组分含量测定时浓度相同的待测溶液。按上述1.2条件重复测定6次，结果见表3，均回收率为 99.19 %，变异系数为0.22 %。表明本方法可用。具体数据见表3。

表3　环丙酰草胺准确度测定结果Tab.3　The accuracy of determination results of cyclanilide

3　结论

随着高效液相色谱仪的发展，高效液相色谱仪已经成为当今农药产品质量检测、环境检测、化学品检测以及农药残留检测的主要手段。实验结果表明，本文所建立的检测方法操作简单，具有较高的准确度和精密度线性关系良好，是进行产品质量检测较理想的分析方法。

【REFERENCES】

[1]Mickelbart V M.Cyclanilide Differentially Affects Branching in Red Maple Cultivars and Hybrids[J].Journal of Environmental Horticulture，2011，29(1)：35-38.

[2]FARRIS M E，KEEVER G J，KESSLER J R，et al.Cyclanilide Promotes Shoot Production and Flowering of Coreopsis and Coneflower during Nursery Production[J].Journal of Environmental Horticulture， 2011，29(3)：108.

[3]EIFVING D C，VISSER D B.Cyclanilide Induces Lateral Branching in Apple Trees[J].Hort Science，2005，40(1)：119-122.

[4]BURTON J D，PEDERSEN M K，COBLE H D.Effect of Cyclanilide on Auxin Activity[J].Journal of Plant Growth Regulation，2008，27(4)：342-352.

[5]HUANG H H，ZHANG J，XU D M，et al.Determination of 21 plant growth regulator residues in fruits by QuEChERS-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Chinese Journal of Chromatography，2014，32(7)：707-716.

Determination of active ingredients content in cyclanilide by HPLC

CHEN Yingli1，2，WANG Yongshi2，XIAO Fei1，2，SONG Guanglin2，YANG Hongbo2

(1GuizhouUniversity，Guiyang550002；2GuizhouAcademyofTestingandAnalysis，Guiyang550002，China)

An HPLC method was developed for the quantitative determination of cyclanilide.The result would provide scientific data for pesticide registration.The content of active ingredients in cyclanilide was determined quantitatively by HPLC with ZORBAX SB C18 column at UV 255 nm，and methanol-water(90︰10，V / V) as mobile phase at a flow rate of 1 mL / min.The assay exhibited a good linearity when the cyclanilide concentration was from 25 to 400 mg / L with a coefficient of 0.9991.The relative standard deviation was 0.20 % and the average recovery was 99.2 %.The method is simple and accurate，and is suitable for the quantitative analysis of cyclanilide.

cyclanilide，HPLC，quantitative analysis

TQ450.7

A

1003-6563(2016)04-0061-04

2016-05-27；

2016-06-03

陈迎丽(1989-)，女，本科。研究方向：从事仪器分析。