黄芪多糖粉对犬瘟热和细小病毒抗体效价影响的研究

2016-08-23郭晔中国兽医药品监察所王秀敏侯晓礁秦俊杰北京生泰尔科技股份有限公司马志军宋彦军刘晓冬北京市动物疫病预防控制中心

兽医导刊 2016年15期

关键词：糖粉犬瘟热幼犬

郭晔/中国兽医药品监察所王秀敏侯晓礁秦俊杰/北京生泰尔科技股份有限公司马志军宋彦军刘晓冬/北京市动物疫病预防控制中心

郭晔/中国兽医药品监察所
王秀敏侯晓礁秦俊杰/北京生泰尔科技股份有限公司
马志军宋彦军刘晓冬/北京市动物疫病预防控制中心

本研究开展了黄芪多糖粉对犬瘟热、细小病毒二联活疫苗免疫效果的影响试验，本实验的目的旨在观察黄芪多糖粉对犬瘟热、细小病毒二联活疫苗免疫效果的影响，以评价黄芪多糖粉对犬临床的有效性。

一、试验材料

（一）试验药品

黄芪多糖粉，由爱迪森（北京）生物科技有限公司提供，生产批号：1208041，产品批准文号：兽药字（2011）010125236。

（二）试验动物

门诊进行免疫的健康犬，雌雄不限，品种不限，其中未做任何免疫的幼犬共30只，已免疫的成年犬10只。

（三）疫苗

Nobivac® DHPPi犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗，由荷兰英特威国际有限公司生产，生产批号：A082A01；Nobivac® DHPPi犬瘟热、传染性肝炎、细小病毒病、副流感四联活疫苗，由荷兰英特威国际有限公司生产，生产批号：A369B01；Nobivac® 稀释液，由荷兰英特威国际有限公司生产，生产批号：C383001，用于稀释冻干的Nobivac® DHPPi犬活疫苗；用疫苗稀释液稀释后，每只接种1头份。

（四）细胞

VERO细胞，购自中国兽医药品监察所。

（五）阴、阳性血清

犬瘟热病毒（CDV）血清为本实验室自制高免血清，其中和抗体的效价达1∶512，CDV阴性血清为实验室保存的健康犬血清。

（六）主要试剂

DMEM培养基、胎牛血清，购自迈晨科技（北京）有限公司；青霉素、链霉素、谷氨酰胺、1 ml注射器、5 ml注射器、1 ml离心管，25 cm2细胞培养瓶、24孔细胞培养板、96孔细胞培养板、96孔V型血凝板，均购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司。

猪红细胞悬液：从健康猪颈静脉采血10～20 ml，与4倍量的阿氏液混匀，置于4℃冰箱保存。使用时先用0.015 mol/L pH6.5的PBS稀释液将保存的猪红细胞离心洗涤3次，最后1次以3000 rpm离心10 min，弃上清液，取红细胞1 ml，加PBS稀释液100 ml，再加经56℃30 min灭活的牛血清白蛋白0.1g （防止猪红细胞发生自凝），即为1%猪红细胞悬液。

其余化学试剂均为分析纯。

（七）主要试验仪器

倒置显微镜（Olympus），高速台式离心机（Sigma公司），CO2培养箱（SANYO），恒温水浴锅（北京医疗设备厂）。

二、试验方法

（一）分组与给药方法

将门诊进行免疫的健康犬按入院免疫顺序编号，分为2组，试验1组（奇数号，即黄芪多糖粉组），试验2组（偶数号，即对照组），每组20只。免疫与给药方法见表1。

（二）观察指标

1.犬瘟热中和抗体效价。于幼犬首免的第30天和成年犬免疫的第30天时，对其进行无菌静脉采血，以3 000 rpm离心10 min分离血清，将血清56℃灭活30 min，采用固定病毒稀释血清法测定血清CDV的中和抗体效价，具体操作步骤同前所述。

表1　免疫与给药方法

2.犬细小病毒抗体效价。于幼犬首免的第30天和成年犬免疫的第30天时，对其进行无菌静脉采血，以3 000 rpm离心10 min分离血清，将血清56℃灭活30 min，采用HA-HI试验测定血清细小病毒（CPV）的抗体效价，具体操作步骤同前所述。

（三）统计分析

试验数据以SPSS13.0软件进行统计分析，结果用抗体几何平均滴度（GMT）表示，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

三、试验结果

（一）犬瘟热中和抗体检测结果

幼犬首免第30天犬瘟热抗体效价的检测结果见表2，由表2可知黄芪多糖粉组和对照组犬瘟热抗体的几何平均滴度分别为1∶761和1∶681，差异显著（P＜0.05）；成年犬免疫30 d血清犬瘟热抗体效价的检测结果见表3，由表3可知黄芪多糖粉组和对照组犬瘟热抗体的几何平均滴度分别为1∶762和1∶688，差异显著（P＜0.05）。

表2　幼犬犬瘟热中和抗体检测结果

表3　成年犬犬瘟热中和抗体检测结果

（二）犬细小病毒抗体检测结果

幼犬首免第30天细小病毒抗体效价的检测结果见表4，由表4可知黄芪多糖粉组和对照组犬细小病毒抗体的几何平均滴度分别为1∶724和1∶537，差异显著（P＜0.05）；成年犬免疫30 d血清细小病毒抗体效价的检测结果见表5，由表5可知黄芪多糖粉组和对照组细小病毒抗体的几何平均滴度分别为1∶891和1∶676，差异显著（P＜0.05）。

表4　幼犬细小病毒抗体检测结果

表5　成年犬细小病毒抗体检测结果

四、讨论

综上所述，从幼犬的抗体检测结果看，黄芪多糖粉组犬瘟热抗体和细小病毒抗体效价均显著高于对照组；从成年犬的抗体检测结果看，黄芪多糖粉组犬瘟热抗体和细小病毒抗体效价均显著高于对照组。表明无论幼犬或成年犬，均于免疫当天以0.1 g/kg·bw剂量喂服黄芪多糖粉，每天1次，连续6 d，可提高抗犬瘟热病毒抗体和抗细小病毒抗体的效价。