德惠地区鸡新城疫血清学调查

窦海艳 李建华 李鑫 张春媛 丁国杰/哈药集团生物疫苗有限公司

德惠地区鸡新城疫血清学调查

窦海艳 李建华 李鑫 张春媛 丁国杰/哈药集团生物疫苗有限公司

鸡新城疫（New Castle disease）又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由副黏病毒科的新城疫病毒引起的急性高度接触性传染病，传播迅速，对鸡养殖业造成严重危害和巨大的经济损失。对该病的防治目前没有特别有效的手段，主要通过接种疫苗来进行预防。最近的研究表明，新城疫的流行表现出一些新的趋势，即在目前普遍采用疫苗免疫的情况下，ND 在部分地区流行依然严重， 且表现出新的流行病学特点，如高免鸡群发病等。为了解德惠地区鸡场新城疫免疫抗体的水平，更好地预防和控制其发生和流行，本研究于2015 年对该地区7个养鸡场新城免疫抗体抽样检测，现将检测结果报道如下。

一、材料与方法

（一）材料

1.被检血清。2015年4月份至2015年5月份，选择德惠部分地区7个养鸡场，分别用A、B、C、D、E、F 和G表示，每个鸡场的采样比例为5‰左右，每个样品采血量2 ml用于制备待检血清。抽样禽场均已按照农业部新城疫免疫技术规范进行免疫。

2.诊断试剂。鸡新城疫血凝抑制试验（HI）标准抗原、阴性血清和阳性血清，购自哈尔滨兽医研究所。

3. 1%红细胞的制备。按照《中国兽药典》（三部，2010版）附录制备。

（二）检测方法

测定标准抗原的血凝价，制备4HAU抗原并进行验证，采用血凝抑制试验检测血清样品中鸡新城疫抗体的效价，操作方法按《新城疫诊断技术》（GBT/16550-2008）进行。血凝抑制试验具体操作如下：（1）根据血凝试验的结果配制4个血凝单位（4HUA）抗原。以能引起100%血凝的病毒最高稀释倍数代表1个血凝单位，4HUA的配制方法如下：假设抗原的血凝滴度为1∶256，则4HUA抗原的稀释倍数应是1∶64（256除以4），稀释时，将1 ml的抗原加入到63 ml PBS中即为4HUA抗原；（2）在96孔V型血凝板上的第1孔至11孔，用移液器每孔加入0.025 ml PBS，第12孔加入0.050 ml PBS；（3）在第1孔加入0.025 ml新城疫标准阳性血清，充分混匀后移出0.025 ml至第2孔，依次类推，倍比稀释至第10孔，第10孔弃去0.025 ml，第11孔为阳性对照，第12孔为PBS对照；（4）在第1～11孔各加入0.025 ml含4HAU抗原，轻叩反应板，使反应物混合均匀，室温下（约20℃～25℃）静置不少于30 min。（5）每孔加入0.025 ml体积分数为1%的红细胞悬液。轻晃混匀后，室温（约20℃～25℃）静置约40 min，若环境温度太高，放4℃静置60 min。当PBS对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。

（三）判定标准

以完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI 滴度。只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在1个稀释度范围内，并且所用阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI试验结果方判定有效。根据农业部《国家动物疫病监测计划》要求，抗体效价≥25为免疫合格，免疫抗体监测合格数达到抽检总数70%判定为群体合格。计算各养殖场鸡群抗体效价的平均值和标准差以及抗体的变异系数（ 变异系数=标准差与平均值的比值）。

二、结果与分析

检测结果表明，德惠地区7个鸡场鸡新城疫免疫抗体合格率均达90%以上，达到国家标准；7个鸡场抗体的变异系数值均在10 %以上，离散度均相对较高；不同鸡场抗体水平存在一定的差距。具体结果见表1。

表1　检测鸡场新城疫HI抗体效价平均值、变异系数及鸡群合格率

三、讨论

1.德惠地区鸡场的数量和规模都较大，因此对于鸡新城疫的防控就显得尤为重要。随着本地区养殖户疫苗免疫意识的提高，基本上普及了鸡新城疫等禽重要传染病的接种，有效的控制了新城疫疫情的暴发，减少了经济损失。本研究的7个鸡场鸡群的新城疫合格率均在90%以上，但新城疫HI抗体效价平均值却差异显著，以B鸡场最高，以G鸡场最低，其原因可能与养殖环境与管理方式、疫苗生产企业、免疫程序、免疫方法和剂量以及母源抗体水平等有关。为了取得良好的免疫效果，建议改善养殖环境，学习先进的管理方法、选择质量好的疫苗、监测新城疫母源抗体并据此制定科学的免疫程序。

2.以往的研究表明，疫苗免疫接种能有效预防新城疫，但免疫鸡群仍可携带vNDV（新城疫强毒），无论采用哪种免疫程序，都不能阻止vNDV在鸡群中增殖及传播，而从抗体效价在3～10的个体检出vNDV，说明无论体内HI抗体水平的高低都不能阻止病毒的感染与增殖。新城疫强毒感染与否和鸡群HI抗体离散度密切相关，可能与自身HI抗体水平无关。在本研究中，B鸡场、G鸡场和D鸡场的标准差和变异系数分别居所检测鸡场的前3位，推测这3个鸡场中鸡群携带vNDV的概率最大。为了降低风险，建议这3个鸡场进行鸡新城疫病原方面的检测。

（略）