高碘酸钠法测定齿瓣石斛多糖含量的方法学探讨

李姝梅 张家旭（红河卫生职业学院，云南红河 661100）

高碘酸钠法测定齿瓣石斛多糖含量的方法学探讨

李姝梅 张家旭
（红河卫生职业学院，云南红河 661100）

目的：探讨齿瓣石斛中多糖含量测定的方法。方法：采用紫外-分光光度法和酸碱滴定法，取不同量的葡萄糖与定量且过量的高碘酸钠进行定量反应，取出一部分反应液稀释2500倍后，以蒸馏水作空白对照，用紫外-可见分光光度计在波长223nm处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作标准曲线；另取一定量反应液，以溴甲酚紫作指示剂，用已标定浓度的氢氧化钠滴定生成的甲酸，计算出甲酸的生成量，以葡萄糖的量为横坐标，甲酸的量为纵坐标，作标准曲线。结果：酸碱滴定法标准曲线线性较紫外-分光光度法好，回归方程为Y=0.0222X+0.0547（r=0.9981）。结论：酸碱滴定法操作简便，条件温和，结果准确，可靠，重现性好，适用于齿瓣石斛多糖的含量测定。

齿瓣石斛 多糖 紫外分光光度法 酸碱滴定法

齿瓣石斛（Dendrobium devonianum Paxt.）为兰科石斛属植物，俗称紫皮石斛，紫皮兰，小黄草，吊兰花等。《神农本草经》将其列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、润肺止咳之功效［1］。根据现有文献报道，石斛主要含多糖和生物碱等多种成分，其药理作用与其成分有密切关系［2-5］。其中石斛多糖具有增强机体免疫力、抗衰老、降血糖及抗肿瘤作用［6-8］。齿瓣石斛在我省保山、德宏等地有大规模种植，本文采集产于保山龙陵的齿瓣石斛，进行高碘酸钠法测定其多糖含量方法的研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电子天平（SHIMADZU AUW120D）。

1.2 试药

葡萄糖对照品（批号：0701051；广东·汕头市西陇化工厂）；溴甲酚紫指示剂（批号：20060731；上海三爱思试剂有限公司）；高碘酸钠（批号：0408011；广东·汕头市西陇化工厂）；甲酸（批号：0805101；上海化学试剂有限公司）；甲醛（批号：20081114；重庆川东化工集团有限公司化学试剂厂）；碘化钠（批号：0506281；广东·汕头市西陇化工厂）；氢氧化钠（批号：0708102；上海试四赫维化工有限公司）；0.1mol/L盐酸滴定液；水为重蒸馏水。

2 方法和结果

2.1 反应原理

C6H12O6+5NaIO4——5CHOOH+HCOH+5NaI

NaOH+CHOOH——NaCOOH

一分子的葡萄糖与过量的高碘酸钠反应，生成五分子的甲酸，以溴甲酚紫作指示剂［9］，用已标定浓度的氢氧化钠滴定生成的甲酸，计算出甲酸的生成量，从而可根据甲酸的生成量得出葡萄糖的量。

2.2 高碘酸氧化反应时间的确定

表1 测定吸光度数据

表2 浓度的溶液，测定吸光度结果

称取葡萄糖样品50㎎、高碘酸钠0.4159g置25ml容量瓶中，加适量蒸馏水使溶解并定容。用锡纸包好避光，放置在低温暗处反应，不时振摇，使反应完全。分别在0、6、12、24、36、48、60小时，以蒸馏水作空白对照，在波长223nm处测定其吸光度。测定数据如表1所示。

试验结果表明，高碘酸氧化葡萄糖反应在48小时反应完全。

2.3 UV法

（1）方法。测定反应后剩余高碘酸钠吸光度，以反应后剩余高碘酸钠的浓度为横坐标，反应后剩余高碘酸钠吸光度为纵坐标，做标准曲线。

（2）高碘酸钠标准曲线制备。精密称取高碘酸钠适量，配制成0.12mM/L、0.24mM/L、0.36 mM/L、0.48 mM/L、0.60 mM/L浓度的溶液，测定吸光度，试验结果如表2所示。

线性方程及相关系数：Y=1.0217X-0.0016 （r=0.9990）

（3）测定。称取葡萄糖 10㎎，20㎎，30㎎，40㎎，50㎎分别置于25ml量瓶中，每份再加入高碘酸钠0.416g，蒸馏水溶解并定容。用锡纸包好避光，放置在低温暗处，不时振摇，反应48小时后，测定吸光度，试验结果如表3所示。

以高碘酸钠的浓度为横坐标，高碘酸钠吸光度为纵坐标，做标准曲线，结果如图1所示。

（4）其它因素考察。分别称取甲酸、甲醛、碘化钠适量，加蒸馏水分别制成0.014mM/L、0.0027mM/L、0.014mM/L浓度溶液，测定吸光度，结果如表4所示。

结果表明：在相关反应的浓度条件下，甲酸、甲醛、碘化钠的吸光度较小，对高碘酸钠的测定影响较小。

表3 测定吸光度试验结果

表4 浓度溶液，测定吸光度结果

（5）讨论。由试验结果得知，反应后溶液中高碘酸钠的量与吸光度不成线性，高碘酸钠强氧化性及不稳定性，是造成不成线性的主要原因。因此UV法仅仅提供判断反应是否完全的依据。

2.4 甲酸滴定法

（1）标准曲线的制备。称取葡萄糖 10mg，20mg，30mg，40mg，50mg分别置于25ml量瓶中，每份再加入高碘酸钠0.416g，蒸馏水溶解并定容。用锡纸包好避光，放置在低温暗处放置，不时振摇，反应48小时。加溴甲酚紫指示剂2滴，用氢氧化钠滴定液滴定，计算出甲酸的总生成量，以葡萄糖的量为横坐标，甲酸的量为纵坐标，作标准曲线。甲酸总生成量（mmol）=（氢氧化钠的准确浓度×滴定用的体积/所取反应液的体积）×反应体积。具体数据如表5和图2所示。

（2）讨论、以上研究表明，采用酸碱滴定法测定齿瓣石斛多糖的含量简便、快速、准确、可靠。而用高碘酸钠法测定齿瓣石斛多糖含量，虽可以用光密度监测反应进行的完全程度，但由于高碘酸钠本身具有强氧化剂的特性，不能用于含量测定的量化物质指标；多糖测定过程中，糖及反应后的生成物甲醛、甲酸、碘化钠均不会影响光密度测定，即不会影响反应指示的完全程度；因此，本课题针对齿瓣石斛中多糖含量应用高碘酸钠法测定具有可行性，可以为进一步进行方法学考察提供实验依据。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部［M］.北京:化学工业出版社，2005:62-63.

［2］陈晓梅，郭顺星.石斛植物的化学成分与药理作用的研究进展［J］.天然产物研究与开发，2001（1）:70.

［3］魏小勇.石斛属植物生物碱研究进展［J］.中国药事，2005（7）:445-44.

［4］罗慧玲，蔡体育，陈巧伦，等.石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究［J］.癌症，2000（12）:1124.

［5］黄民权，蔡体育，刘庆伦.铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞数和淋巴细胞移动抑制因子的影响［J］.天然药物研究与开发，1996（3）:391.

［6］赵永灵.兜唇石斛多糖的研究［J］.云南植物研究，1994（4）:19-21.

［7］施红，陈玉春.石斛复方制剂的抗氧化和免疫功能的相关研究［J］.福建中医学院学报，1997（4）:131.

［8］施红，陈玲.石斛合剂对高血糖动物模型的实验研究［J］.福建中医学院学报，2000（2）:23.

［9］国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部附录［XVE］.北京:化学工艺出版社，2005.

项目来源：云南省科技项目（高黎贡山药用植物资源保护和珍稀濒危药用植物引种驯化研究）

李姝梅（1986—），女，云南牟定人，硕士研究生，毕业于云南中医学院，助教，主要从事中药药剂研究工作。

张家旭（1991—），男，云南弥勒人，红河卫生职业学院后勤管理中心工作人员，云南财经大学会计专业本科在读，E-mail：526135131@qq.com。