玫瑰糠疹合剂质量标准研究

周大庆，胡俊光，徐 波山东中医药大学，山东 济南 250355；2山东大学附属省立医院



玫瑰糠疹合剂质量标准研究

周大庆1，胡俊光1，徐 波2△
1山东中医药大学，山东 济南 250355；2山东大学附属省立医院

目的：建立玫瑰糠疹合剂的质量标准。方法：采用薄层色谱法对玫瑰糠疹合剂中赤芍、防风进行定性鉴别；通过高效液相色谱法测定制剂中芍药苷、升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量。芍药苷的色谱条件为ZO RBA XSB-C18色谱柱（4.6 m m×250 m m，5 μm），流动相以乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液（14∶86），柱温30℃，流速1.0 m L/m i n，检测波长230 nm；升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷色谱条件为ZO RBA XSB-C18色谱柱（4.6 m m×250 m m，5 μm），流动相以乙腈-0.1%磷酸水（40∶60），柱温30℃，流速1.0 m L/m i n，检测波长为254 nm。结果：赤芍、防风薄层鉴别斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰。芍药苷在10～60 μg/m L范围内，芍药苷峰面积与质量浓度有良好的线性关系（r=1），平均加样回收率为98.53%，RSD为1.18%；升麻素苷在5.98～35.88 μg/m L范围内，升麻素苷峰面积与质量浓度有良好的线性关系（r=0.999 9），平均加样回收率为98.3%，RSD 为1.77%；5-O-甲基维斯阿米醇苷在2.86～17.1 6 μg/m L范围内，峰面积与质量浓度有良好的线性关系（r=1），平均加样回收率为99.07%，RSD为1.09%。结论：本实验方法可靠、准确，可以用于该制剂的质量控制。

玫瑰糠疹合剂；质量标准；赤芍；防风

玫瑰糠疹合剂是根据临床验方开发研制而成的一种中药制剂，由赤芍、防风、荆芥、苦参、生地黄、白鲜皮、甘草等10味中药组成，具有凉血、祛风止痒之功效［1］，治疗玫瑰糠疹具有良好疗效。方中赤芍清热凉血，散瘀止痛，用于热入营血、温毒发斑、吐血衄血、目赤肿痛、肝郁胁痛、经闭痛经、瘾瘕腹痛、跌扑损伤、痈肿疮疡。防风祛风解表，胜湿止痛、止痉，用于感冒头痛、风湿痹痛、风疹瘙痒、破伤风［2］。原标准质量控制方法简单，无定量控制方法。本研究采用TLC及H PLC法对方中主要药味赤芍、防风进行定性及定量分析，为全面有效控制玫瑰糠疹合剂的质量提供实验依据。

1 材料

Agi l ent 1260型高效液相色谱仪(美国Agil ent公司)；芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110736-201337)；升麻素苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111522-201310)；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111523-201208)；荆芥对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120911-201110)；甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯净水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 赤芍的TLC鉴别［2］取本品10 m L，加乙醇20 m L，振摇超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 m L使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 m L含2 m g的溶液，作为对照品溶液。按处方比例称取缺赤芍的其他药材，按制备工艺制备阴性样品，同法制备缺赤芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，阴性无干扰，见图1。

图1 玫瑰糠疹合剂中赤芍的TLC

2.2 防风的TLC鉴别［1］取本品10 m L，加丙酮20 m L，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，加乙醇1m L使残渣溶解，得到供试品溶液。取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加乙醇制成每1 m L各含1 m g的混合溶液，作为对照品溶液。另取防风对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按处方比例称取缺防风的其他药材，按制备工艺制备阴性样品，同法制备缺防风的阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，见图2。

图2 玫瑰糠疹合剂中防风的TLC

2.3 芍药苷的H PLC法测定

2.3.1 色谱条件和系统适用性实验 ZO RBAX SB-C18色谱柱(4.6 m m×250 m m，5 μm)，流动相为乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(14∶86)，柱温30℃，流速1.0 m L/m i n，检测波长230 nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000，进样量10μL，见图3。

图3 玫瑰糠疹合剂中芍药苷H PLC图

2.3.2 溶液的制备 1)对照品溶液的制备。精密称取芍药苷5.00 m g甲醇溶解定容至100 m L(芍药苷的浓度为50 μg/m L)备用；2)供试品溶液的制备。取本品1m L，置100m L容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用；3)阴性对照样品溶液的制备。按处方比例精密称取缺赤芍的其余药材，按上述制备工艺制备阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照样品溶液。

2.3.3 线性关系考察 取“2.3.2”项下芍药苷对照品溶液分别进样2、4、6、8、10、12 μL，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积A为纵坐标，进样浓度C(m g/m L)为横坐标，得到芍药苷回归方程为A=11.056C-2.793(r=0.9998)。结果表明，在10～60 μg/m L范围内，芍药苷峰面积与质量浓度有良好的线性关系。

2.3.4 精密度实验 精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，测定峰面积。结果显示RSD=0.57%，表明仪器精密度良好。

2.3.5 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10小时进样，测定芍药苷的峰面积。测定结果RSD=2.32%，表明供试品溶液在10小时内稳定。

2.3.6 重复性实验 精密称取同一批样品，按“2.3.2”项下供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，测定峰面积，计算含量。测定结果为RSD=1.35%，表明本法重现性良好。

2.3.7 加样回收实验 精密量取已知含量的同批样品0.5m L，共6份，分别加入一定量的芍药苷标准品，按“2.3.2”项下供试品溶液的制备方法制备，按照确定的色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1 芍药苷加样回收率实验结果

2.4 升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷H PLC测定

2.4.1 色谱条件和系统适用性实验 ZO RBAX SB-C18色谱柱(4.6 m m×250 m m，5 μm)，流动相以乙腈-0.1%磷酸水(40∶60)，柱温30℃，流速1.0m L/m i n，检测波长为254 nm，理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000，进样量10μL，结果见图4。

图4 玫瑰糠疹合剂中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷H PLC图

2.4.2 溶液的制备 1)对照品溶液的制备。精密称取升麻素苷对照品2.99 m g及5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品1.43 m g，置容积为100 m L同一量瓶中，加甲醇溶解后，稀释至刻度，摇匀，备用(升麻素苷浓度为29.9μL，5-O-甲基维斯阿米醇苷浓度为14.3μL)。2)供试品溶液的制备。取本品5 m L，置10 m L容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。3)阴性对照样品溶液的制备。按处方比例精密称取缺防风的其余药材，按上述制备工艺制备阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照样品溶液。

2.4.3 线性关系考察 取“2.4.2”项下对照品溶液分别进样2、4、6、8、10、12 μL，记录色谱图，测定峰面积，并以峰面积A为纵坐标，进样浓度C(m g/m L)为横坐标，得升麻素苷回归方程：A=48.017C+1(r=0.999 9)；5-O-甲基维斯阿米醇苷回归方程：A=30.212C-0.053 3(r=0.999 7)。结果表明在 5.98～35.88 μL/m L范围内，升麻素苷峰面积与质量浓度有良好的线性关系；在2.86～17.16μL/m L范围内，5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积与质量浓度有良好的线性关系。

2.4.4 精密度实验 精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积。测定结果表明，升麻素苷RSD=0.52%，5-O-甲基维斯阿米醇苷RSD=1.42%，本法重现性良好。

2.4.5 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10小时进样，测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的峰面积。测定结果表明，升麻素苷RSD=0.74%；5-O-甲基维斯阿米醇苷RSD=1.40%，表明供试品溶液在10小时稳定。

2.4.6 重复性实验 精密称取同一批样品，按“2.4.2”项下供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，测定峰面积，计算含量。测定结果表明，升麻素苷RSD=1.53%；5-O-甲基维斯阿米醇苷RSD=1.61%，本法重现性良好。

2.4.7 加样回收实验 精密量取已知含量的同批样品10 m L，共6份，分别精密加入一定量的升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷标准品，按“2.4.2”项下样品溶液的制备方法制备，按照确定的色谱条件测定，计算回收率，结果见表2—3。

表2 升麻素苷加样回收率实验结果

表3 5-O-甲基维斯阿米醇苷加样回收率实验结果

2.5 样品测定结果 取不同批号的样品，按前述供试品溶液

制备法制备，按照确定的色谱条件测定，计算结果，见表4。

表4 样品测定结果（n=3） m g/m L

3 讨论

本研究在参考2010年版《中国药典》(一部)及文献的基础上，对玫瑰糠疹合剂中的赤芍和防风进行了TLC定性鉴别研究和H PLC色谱分析。防风的TLC鉴别参照2010年版《中国药典》(一部)及文献方法，样品的处理方法分别采用了丙酮处理和氯仿处理，丙酮处理后的样品TLC结果不理想。在展开剂的选择上采用了三氯甲烷和甲醇的不同比例，分别选用了三氯甲烷-甲醇(4∶1)、三氯甲烷-甲醇(6∶1)、三氯甲烷-甲醇(8∶1)，结果三氯甲烷-甲醇(6∶1)效果较好。

在芍药苷的H PLC分析中，采用三种不同的流动相，结果甲醇-水(40：60)有拖尾现象，乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(25：75)分离效果不理想，乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(14∶86)比较适宜。在升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷H PLC测定中分别采用了甲醇-水(40∶60)［3］、甲醇-0.04 m ol/L乙酸钠(30∶70)［4］、乙腈-水-醋酸(13∶88∶0.03)［5］作为流动相进行分离，效果均不理想，最终选择乙腈-0.1%磷酸水(40∶60)作为升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷H PLC测定的流动相效果最佳。

综上所述，本实验方法简单，结果稳定，重复性好，完善了玫瑰糠疹合剂的质量标准，可以有效控制制剂质量。

［1］ 肖永庆，杨滨，姚三桃，等.防风质量标准的研究［J］.中国中药杂志，2001，26（3）：185-187.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［3］ 黄杰芳，李惠霞，邓慧敏.辛夷鼻炎丸的质量标准研究［J］.中草药，2009，40（8）：1245-1247.

［4］ 刘焕蓉，王虹，秦雪梅，等.H PLC法测定玉屏风不同配伍中4种黄酮成分［J］.中草药，2011，42（6）：1122-1124.

Quality Standard of Gibert′s Disease Mixture

ZHOU Daqing1，HU Jun′guang1，XU Bo2△
1 Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2 Shandong Provincial Hospital

Objective：To establish quality standard of gibert's disease mixture.Methods：ChiShao（Radix paeoniae rubra）and FangFeng（Radix Saposhnikoviae）in gibert's disease mixture were qualitatively identified by TLC；the contents of peoniflorin，prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in the preparations were determined by HPLC.Chromatographic conditions of peoniflorin were ZORBAX SB-C18chromatographic column （4.6 mm×250 mm，5 μm），acetonitrile-0.2%phosphoric acid and 0.04%triethylamine solution as mobile phase，column temperature 30℃，flow rate 1.0mL/min，detection wavelength 230nm；chromatographic conditions of prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol were ZORBAX SB-C18chromatographic column（4.6 mm×250 mm，5 μm），acetonitrile-0.1%phosphoric acid（40：60）as mobile phase，column temperature 30℃，flow rate 1.0mL/min，detection wavelength 254 nm.Results：ChiShao and FangFeng showed clear spots，good separation and non-interference in negative control in TLC identification.Peoniflorin showed a good linear relationship in the range between 10 and 60μg/mL，its peak area and concentrations demonstrated better linear relationship （r=1），average recovery rate was 98.53%，RSD was 1.18%；prim-O-glucosylcimifugin showed a good linear relationship in the range between 5.98 and 35.88 μg/mL，its peak area and concentrationswereinagoodlinearrelationship（r=0.9999），averagerecoveryratewas98.3%，RSDwas1.77%；4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol showed a good linear relationship in the range between 2.86 and 17.16 μg/mL，its peak area and concentrations demonstrated better linear relationship（r=1），average recovery rate was 99.07%，RSD was 1.09%.Conclusion：The method，reliable and accurate，could be used for quality control of the preparation.

gibert's disease mixture；quality standard；ChiShao；FangFeng

R283.61

A

1004-6852（2016）01-0040-05

2015-06-29

周大庆（1988—），男，在读硕士研究生。研究方向：中药制剂及临床药学。