红皮、黑皮花生茎叶对小鼠镇静催眠作用的对比研究*

李欣芮，陆永攀山东中医药大学药学院，山东 济南 250355；2山东中医药大学基础医学院



红皮、黑皮花生茎叶对小鼠镇静催眠作用的对比研究*

李欣芮1，陆永攀2△
1山东中医药大学药学院，山东 济南 250355；2山东中医药大学基础医学院

目的：探讨红皮、黑皮花生茎叶水提物对小鼠镇静催眠的作用。方法：将SPF级K M种小鼠随机分为8组，分别为：生理盐水组、地西泮阳性对照组，红皮花生茎叶高、中、低剂量组及黑皮花生茎叶高、中、低剂量组，每组8只；采用水提及超声辅助的方法充分提取两种花生茎叶的有效成分，灌胃给药7天，1次/d。观察小鼠自主活动次数、对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠潜伏期和睡眠持续时间及对抗3-M P诱导惊厥程度。结果：红皮花生茎叶高、中剂量组与黑皮花生茎叶高剂量组均能显著降低小鼠自主活动次数（P＜0.01）；红皮及黑皮花生茎叶高、中、低剂量组均能延长阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠的睡眠时间（P＜0.01）；除黑皮花生茎叶低剂量组外，其余组均能降低小鼠惊厥率（P＜0.05）。结论：红皮花生与黑皮花生茎叶水提物对小鼠均具有镇静催眠作用，其中红皮花生茎叶水提物的镇静催眠作用略高于黑皮花生。

红皮花生；黑皮花生；茎叶水提物；镇静催眠

随着现代生活节奏的加快，失眠的发病人数日趋增多，许多人需要服用药物来改善睡眠质量。然而，国内外常用的唑吡坦、扎来普隆及佐匹克隆等［1］镇静安眠药均存在不同程度的副作用和药物依赖性，尤其对儿童危害严重［2］，因此，寻找天然药物满足临床需要显得格外重要。

花生(Arachis hypogaea L.)出自《滇南本草》，其茎叶具有“昼开夜合”的特性，符合中医“天人相应”和阴阳消长规律理论［3］，与人体“入夜则寐，入昼则寤”“昼精夜暝”相一致。而皂苷类成分在一些研究中被认为是镇静催眠的有效成分［4］，在花生茎叶中含量也相对较高，笔者曾就“花生茎叶有效成份具有镇静催眠作用”［5］做了初探，其水提物镇静催眠的效果相对较好。黑皮花生是由花生遗传性变异选育而成的新品种，其茎叶也可能与镇静催眠作用存在密切关联性。但在现有文献中并没有关于黑皮花生茎叶镇静催眠作用的报道，亦无与红皮花生茎叶镇静催眠效果的优劣比较。为此，本研究采用红、黑皮花生茎叶水提物在镇静催眠效果方面进行对比研究，以便对“新品种”黑皮花生茎叶镇静催眠成分的含量进行初步分析，比较两种花生茎叶水提物镇静催眠作用。

1 材料与方法

1.1 动物 SPF级KM种小鼠，体质量(20±2)g，实验动物合格证号：H 20013147，实验前均先禁食、不禁水过夜。

1.2 仪器 仪表恒温水浴锅(黄骅市综合电器厂)；旋转蒸发器(巩义市予华仪器有限责任公司)；中药粉碎机(山东临清运河制药机械有限公司)；电热鼓风干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司)；小鼠自主活动记录仪(安徽正华生物仪器设备有限公司)；电子天平PTF-A600(福州华志科学仪器有限公司)；KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.3 药品与试剂 红皮花生、黑皮花生茎叶均采自山东德州郊区，由生药系李峰教授鉴定为豆科落花生属植物花生的茎叶；戊巴比妥钠(北京化学试剂公司，批号：120812)；3-巯基丙酸(3-M P，Si gm a公司，批号：BR058712)；地西泮注射液(中国药品生物制品检定所，批号：115-9302)。

1.4 方法

1.4.1 花生茎叶水提物的制备 取两种红、黑皮花生茎叶生药材各1kg，粉碎，20 kH z超声提取15分钟后加入12倍量的蒸馏水，100℃回流2次，2 h/次，过滤，合并2次滤液，在旋转蒸发器上浓缩至浸膏，加水稀释成相当于花生茎叶生药材60、30、15g/kg的给药量备用。

1.4.2 红皮、黑皮花生茎叶水提物对小鼠自主活动的影响 小鼠64只，雌雄各半，适应性喂养1周后，随机分成8组，分别为：生理盐水组，地西泮(2 m g/kg)阳性对照组，红皮花生茎叶高、中、低剂量组(60、30、15 g/kg)，黑皮花生茎叶高、中、低剂量组(60、30、15 g/kg)，每组8只。除地西泮组和生理盐水组外，其余各组每日灌胃给药1次，每日灌胃量为20m L/kg，连续给药7天（其中地西泮组前6天以生理盐水灌胃，第7天以0.02 m g/m L地西泮灌胃），于第7天末次给药30分钟后，将小鼠置于自主活动记录仪中，适应10分钟后，记录小鼠2分钟内自主活动次数。

1.4.3 红皮、黑皮花生茎叶水提物对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响 分组及给药剂量同“1.4.2”项。末次给药30分钟后，各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠35 m g/kg(能引起全部小鼠发生睡眠的最小剂量)［6］，以小鼠四肢向上姿势超过十秒为翻正反射消失的标准，消失1分钟以上记为发生睡眠，观察并记录小鼠的睡眠潜伏期及睡眠持续时间。

1.4.4 小鼠镇静指标 分组及给药剂量同“1.4.2”项。末次给药30分钟后，腹腔注射20 μL/kg的3-M P，以是否出现惊厥现象来判断花生茎叶水提物有无镇静作用。

1.5 统计学方法 数据采用SPSS 19.0进行统计学处理，计量资料以(±s)表示，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两种花生茎叶水提物对小鼠自主活动次数、睡眠潜伏期、注射阈下剂量(35 m g/kg)戊巴比妥钠的小鼠持续睡眠时间及惊厥程度的影响，同剂量的红皮花生茎叶水提物与黑皮花生茎叶水提物相比较，红皮花生组的小鼠持续睡眠时间稍长，睡眠潜伏期时间较短，小鼠活动次数较黑皮花生组少。红皮、黑皮花生茎叶水提物高、中、低剂量组均能增加入睡小鼠的动物数；与生理盐水组比较，红皮花生茎叶高、中剂量组，黑皮花生茎叶高剂量组均能显著降低小鼠自主活动次数(P＜0.01)，红、黑皮花生茎叶高、中、低剂量组均能延长阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠的睡眠时间(P＜0.01)，除黑皮花生茎叶低剂量组外，其余组均能降低小鼠惊厥率(P＜0.05)，见表1。

表1 两种花生茎叶水提物对小鼠自主活动次数、睡眠潜伏期、持续睡眠时间及惊厥程度的影响(±s)

表1 两种花生茎叶水提物对小鼠自主活动次数、睡眠潜伏期、持续睡眠时间及惊厥程度的影响(±s)

注：与生理盐水组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

组别 只数 剂量/（g·kg-1）活动次数/2 m i n 睡眠潜伏期/m i n 持续睡眠时间/m i n 惊厥率/%生理盐水组 8- 33.25±5.99 9.93±0.79 17.09±2.69 87.5地西泮阳性对照组 8 0.002 15.50±2.45**5.91±0.73**25.08±1.93**12.5**红皮花生茎叶高剂量组 8 60 23.50±1.85**6.88±1.58**26.95±0.46**25.0**红皮花生茎叶中剂量组 8 30 28.00±2.62**7.15±0.71**25.86±1.33**25.0**红皮花生茎叶低剂量组 8 15 30.25±5.70 7.97±1.04**23.02±3.21**37.5**黑皮花生茎叶高剂量组 8 60 26.00±2.07**6.14±0.95**26.03±2.81**25.0**黑皮花生茎叶中剂量组 8 30 30.25±3.33 7.84±0.41**24.82±3.26**62.5*黑皮花生茎叶低剂量组 8 15 31.50±3.07 8.15±1.27**20.63±3.46**75.0

3 讨论

社会生活的紧步伐与快节奏，使现代人在日益加剧的竞争环境中压力递增，思虑过重，失眠症随之普遍产生。失眠不仅影响人们的休息，还会影响正常的工作和生活，常因生活作息紊乱而处于亚健康的生活状态。长期失眠，还易使人产生焦虑、烦躁、抑郁等精神症状，反向影响人们的情绪［7-10］。肝郁气滞、气机不畅、郁而化火，也会加重失眠症状［11］。许多失眠症患者会服用巴比妥类和苯二氮卓类药物，长期服用此类药物会产生许多副作用，如焦虑、妄想、幻觉及惊厥等［12］。花生茎叶有清热解毒，宁神降压的功效，其副作用小，无成瘾性，故对一般失眠症患者，笔者认为花生枝叶制剂可作为首选药物应用。综合考虑花生茎叶“昼开夜合”的特性，从中医取象比类的角度研究分析可作为现代镇静催眠药物研究的新方向［13］。

本研究表明，合适浓度的红、黑皮花生茎叶水提物均能减少小鼠活动次数，延长小鼠睡眠时间，降低惊厥率；红皮花生茎叶水提物的镇静催眠作用稍高于黑皮花生茎叶水提物；红皮花生茎叶高、中剂量组，黑皮花生茎叶高剂量组均能显著降低小鼠自主活动次数，说明该剂量的水提物镇静催眠作用显著；红、黑皮花生茎叶高、中、低剂量组均能延长阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠的睡眠时间，但不同剂量水提物所致的睡眠潜伏期和持续睡眠时间不同，说明不同剂量水提物镇静催眠效果不同；除黑皮花生茎叶低剂量组外，其余组均能降低小鼠惊厥率，即均有明显的镇静作用。同浓度的两种花生茎叶水提物比较，二者相关数值差别不明显。虽然预期认为黑皮花生茎叶水提物作用效果好，但结果却存在一定出入，可能与花生种植环境、土壤营养成分及酸碱度、花生叶的采收时间等因素有关。

本实验主要研究了红皮花生茎叶水提物与黑皮花生茎叶水提物对小鼠的镇催眠作用，通过观察小鼠的自主活动次数、睡眠潜伏期、持续睡眠时间、惊厥率，初步判断红皮花生茎叶水提物的镇静催眠作用稍优于黑皮花生茎叶水提物；但不同采收时期的作用效果是否相同，以及其催眠作用的物质基础和作用机制尚待进一步研究。

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［3］ 王翘楚.“天人相应”理论指导临床的新发现［J］.中医文献杂志，2014（5）：34-35.

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Comparative Study on Sedative and Hypnotic Effects of the Stems and the Leaves of Red and Black Peanuts on the Mice

LI Xinrui1，LU Yongpan2△
1 Pharmacy College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2 Basic Medical College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine

Objective：To explore sedative and hypnotic effects of the stems and leaves of red and black peanuts on mice.Methods：KM mice were randomized into eight groups，respectively including：physiological saline group，positive control group of diazepam，high，moderate and low doses groups of the stems and leaves of red peanuts，high，moderate and low doses groups of the stems and leaves of black peanuts，eight mice each group；effective ingredients of the stems and leaves of red and black peanuts were drew effectively by water extraction and ultrasound，the mice were medicated by intragastric administration for seven days，once per day.Autonomic activities times of the mice，sleep latency and sleep duration of the mice induced by sodium amytal in sub-threshold dose，and anti-3-MP-induced convulsions degree were observed.Results：High and moderate dose groups of the stems and the leaves of red peanuts and high dose group of the stems and the leaves of black peanuts could decrease autonomic activities times of the mice（P＜0.01）；high，moderate and low dose groups of the stems and the leaves of red peanuts and black peanuts could prolong sleep time of the mice induced by sodium amytal in sub-threshold dose（P＜0.01）；except low dose group of black peanuts，other groups could decrease convulsion rate of the mice（P＜0.05）.Conclusion：Aqueous extracts of the stems and the leaves of red and black peanuts present sedative and hypnotic effects on the mice，and the effects of aqueous extracts of the stems and the leaves of red peanuts are higher than these of black peanuts.

red peanut；black peanut；aqueous extract of the stems and the leaves；sedation and hypnosis

R285.5

A

1004-6852（2016）01-0012-03

2015-02-27

教育部国家级创新创业训练计划资助项目（编号201410441028）。

李欣芮（1994—），女，学生。研究方向：中药学。