Klf4在银屑病和湿疹患者皮损中的表达

郭 坤 肖生祥 耿松梅



·论著·

Klf4在银屑病和湿疹患者皮损中的表达

郭 坤 肖生祥 耿松梅

目的： 检测Klf4在银屑病及湿疹皮损中的表达。方法： 采用免疫组化技术检测Klf4在16例银屑病患者皮损、16例湿疹皮损及16例正常皮肤中的表达。结果： 银屑病皮损Klf4阳性细胞数为（346.56±24.91）高于正常皮肤的（235.12±20.32），（P＜0.05），湿疹皮损为（75.94±15.61），低于正常皮肤（P＜0.05）。结论： 湿疹患者的Klf4表达下调而在银屑病患者中上调，KIf4在不同疾病中可能发挥不同的生物学作用。

Klf4； 银屑病； 湿疹

银屑病、湿疹均为慢性复发性炎症性皮肤病，两者都可表现为皮肤干燥、脱屑、含水量下降等临床症状，严重影响患者的生活质量，发病机制也较为复杂，多认为与遗传、感染、免疫及环境等多种因素相关。两者的组织病理也均表现出皮肤“砖墙结构”的不稳定，因此近些年来认为银屑病、湿疹亦是皮肤屏障异常性疾病［1］。Klf4作为锌指转录因子，高表达于肠道上皮组织及表皮细胞，参与调控细胞增殖、分化、凋亡和正常稳态等重要生命过程，在皮肤组织中主要参与表皮细胞的分化，对表皮屏障有着重要的意义［2，3］。

1　材料与方法

1.1一般资料 实验中所使用皮肤组织为我科门诊石蜡包埋组织2013-2014年经临床及组织病理确诊的未经治疗的寻常型银屑病及湿疹患者各16例（男8例，女8例），年龄分别为（38.25±11.43）岁和（40.21±17.12）岁；16例整形美容科手术切除的正常皮肤标本为对照，平均（24.31±5.13）岁。

1.2方法 用免疫组化（SP）法检测Klf4蛋白在银屑病、湿疹皮肤组织中的表达。根据试剂说明进行操作［兔抗人Klf4多克隆抗体购自Santa Cruz公司，免疫组化SP检测试剂盒（SP-9000）购自北京中杉生物技术有限公司］。

1.3结果判定 Klf4定位于细胞核内，表达棕黄色或棕褐色颗粒。采用日本 Olympus光学显微镜对Klf4蛋白在银屑病、湿疹中表达的染色结果分在100倍、200倍镜下拍摄。

1.4统计学方法 使用SPSS 16.0软件，实验数据以均数±标准差表示，将银屑病、湿疹患者组织切片5个视野（100倍显微镜）中阳性细胞表达数总和取均值，然后对其进行t检验，P＜0.05为有统计学意义。

2　结果

为了研究Klf4在银屑病及湿疹中的表达情况，我们利用免疫组化法检测两种疾病皮损中Klf4的表达及分布情况。结果显示：正常皮肤组织中Klf4主要表达于棘细胞层及颗粒层细胞的细胞核（图1a，b），银屑病及湿疹患者皮损中Klf4的表达位置与正常对照类似，但银屑病患者皮损中阳性细胞数目明显增多（图1c，d），湿疹患者皮损中阳性细胞数目明显减少（图1e，f）（表1）。

Klf4在银屑病皮损处的表达与正常皮肤组织中表达相比，阳性细胞数明显增多，差异有统计学意义（t=13.87，P＜0.05）；Klf4的表达在湿疹患者皮损中与正常组织中相比阳性细胞数明显减少，差异亦有统计学意义（t=-24.86，P＜0.05）。

表1　Klf4在不同皮损组织中阳性细胞数

图1　Klf4在不同疾病中的表达

3　结论

Klf4是一种在肠道和上皮组织中广泛表达的核转录因子，参与调控细胞增殖、分化、凋亡和正常稳态等重要生命过程［4］。Klf4基因缺失小鼠皮肤的通透性明显增高，导致新生小鼠脱水死亡，证明Klf4在皮肤屏障防御功能的构建方面起着关键作用，异位高表达的Klf4可加速表皮细胞的终末分化和角质层的生成，从而加速表皮渗透性屏障的形成，Klf4基因还能增强表皮的防御功能，并对多个表皮屏障功能分子的转录有促进作用，Klf4对表皮分化复合物CE的成熟及皮肤屏障的完善是必不可少的［5］。

除此之外，Klf4在干细胞的形成和抑制胃癌、原发性肺癌发生、发展中发挥着重要的作用。Klf4通过调节下游靶基因的转录表达而在细胞的周期调控、细胞的增生分化中担任重要的角色，它可能与肿瘤发生发展有着密切的联系。Klf4可直接激活细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21的启动子，从而抑制细胞周期蛋白依赖激酶复合体，使细胞停滞在G1/S期，抑制细胞的过度增殖［6］。

银屑病是一种以皮肤红斑、鳞屑为主，严重影响患者外观及心理的慢性复发性炎症性皮肤病，皮肤屏障功能测试仪检测到银屑病患者角质层的含水量、皮脂含量及经表皮水分流失均下降［7，8］，表明银屑病患者的皮肤屏障功能受损。银屑病的病理生理表现为表皮基底层角质形成细胞增殖加速，有丝分裂周期及表皮更替时间明显缩短，呈现出类似肿瘤的增生模式，因此银屑病亦是一种表皮增殖异常性疾病。

湿疹是由多种因素引起的慢性炎症性皮肤病，湿疹患者表皮细胞间水肿，导致细胞间隙增大，经皮水分流失增多；大量的炎症细胞浸润，影响皮肤正常的新陈代谢，使得脂质、天然保湿因子及抗炎因子表达异常，从而使皮肤变的干燥、脱屑［9］。

本实验免疫组化结果显示正常皮损中Klf4主要表达于棘细胞层及颗粒层的细胞核，银屑病患者皮损中Klf4的表达主要集中于棘细胞细胞核，颗粒层细胞核也有少量表达，与正常皮损相比，阳性细胞数目明显增多。Tsoil及Madonna等研究发现Klf4是与银屑病发病密切相关的15个易感位点之一，在银屑病的发病中起着重要的作用［10，11］。Kim等［12］对银屑病患者皮损中Klf4进行检测发现其表达较正常对照明显升高，治疗之后Klf4的表达明显降低，Klf4与银屑病病情发展相关，推测可能与细胞的增殖密切相关。Chen等［13］认为银屑病皮损中升高的Klf4由IFN-γ and TNF-α（与银屑病发病机制密切相关的细胞因子）所诱导而产生，伴有增殖阻滞剂P21WAF1/Cip1的活化，诱导CD8+T细胞细胞周期的停滞，抑制异常角质细胞的过度增殖和分化［14，15］。

湿疹患者的免疫组化结果显示Klf4主要表达于棘细胞层，呈散在分布，颗粒层亦有少量表达，阳性细胞数较正常对照明显减少。Klf4表达降低会使湿疹患者经皮水分丢失增加，出现皮肤干燥、脱屑，并且使得皮肤中丝聚合蛋白原向Flg的转化减少，从而影响角质细胞间紧密连接，使CE蛋白和脂质不能紧密的贴合在角质层，影响表皮脂质的分布，因此临床上湿疹患者会出现表皮干燥、脱屑及瘙痒等皮肤屏障破坏的表现。

综上所述，本文通过免疫组化的方法检测了Klf4在银屑病及湿疹患者皮损中的表达，我们推测Klf4作为多功能转录因子，不仅参与皮肤屏障的成熟和完善，在抑制细胞增殖和调节细胞周期中也起到重要的作用。在银屑病发病中Klf4可能作为角化细胞增生抑制因子发挥作用，而在湿疹的发病中Klf4可能作为皮肤屏障相关因子参与其中。如能找到Klf4表达的上游基因，通过分子生物学的方法或是受体阻断类药物影响表皮中Klf4的表达将改善湿疹及银屑病的临床症状，并可通过对Klf4基因的检测对银屑病的发病进行预测。

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［5］Jaubert J，Cheng J，Segre JA.Ectopic expression of Kruppel like factor 4（Klf4）accelerates formation of the epidermal permeability barrier［J］.Development，2003，130（12）：2767 -2777.

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［12］Kim KJ，Park S，Park YH，et al.The expression and role of KLF4 in psoriasis［C］.Ann Dermatol，2014，26（6）：675-680.

［13］Chen X，Johns DC，Geiman DE，et al.Krüppel-like factor 4（gut-enriched Krüppellike factor）inhibits cell proliferation by blocking G1/S progression of the cell cycle［J］.J Biol Chem，2001，276（32）：30423-30428.

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（收稿：2016-01-04 修回：2016-01-25）

Expression of Klf4 in the lesions of the patients with psoriasis or eczema

GUO Kun，XIAO Shengxiang，GENG Songmei.
Second Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University，Xi'an 710004，China Corresponding author：GENG Songmei，E-mail：gsm312@yahoo.com

Objective：To detect the expression levels of Klf4 in the lesions of the patients with psoriasis or eczema.Methods：The expression levels of Klf4 in the lesions of psoriasis or eczema was detected by immunohistochemistry methods.Results：The average number of KIf4 positive cells in the psoriatic lesions was （346.56±24.91），which was higher than that in the normal skin（235.12±20.32），with a significant difference（P＜0.05）.The average number of KIf4 positive cells in the eczema lesions was（75.94±15.61），which was lower than that in normal skin（P＜0.05）.Conclusion：Klf4 was down-regulated in patients with eczema and was up-regulated in the patients with psoriasis.Klf4 may play a different role in the pathogenesis of different diseases.

Klf4；psoriasis；eczema

耿松梅，E-mail：gsm312@yahoo.com

国家自然科学基金资助（编号：81171490）

西安交通大学第二附属医院皮肤病院，西安，710004