野生黄刺玫果高效液相色谱指纹图谱研究

王晓梅，卫　罡，王进东（.山西医科大学药学院，山西太原03000； .山西省医药与生命科学研究院，山西太原030006）

野生黄刺玫果高效液相色谱指纹图谱研究

王晓梅1，卫罡2，王进东2
（1.山西医科大学药学院，山西太原030001； 2.山西省医药与生命科学研究院，山西太原030006）

目的：以山西省野生黄刺玫果为主，建立黄刺玫果的高效液相色谱指纹图谱，为黄刺玫果的质量控制提供有效方法。方法：采用Inertsil ODS-SP（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm，柱温为25℃；采用“中药指纹图谱相似度评价系统（2004 A版）”确定共有峰，进行模式分析及相似度计算。结果：该色谱条件下黄刺玫果各成分色谱峰得到较好的分离，经方法学验证，该方法具有良好的精密度、稳定性和重现性。10批样品指纹图谱中共标定了12个共有峰，各批次样品成分类型基本一致。结论：该方法简便准确，灵敏度高，重复性好，可作为黄刺玫果的质量控制和评价方法。

黄刺玫果；高效液相色谱法；指纹图谱

●中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂，医方是“除疾保性命之术”，而剂则有“调百药齐，和之所宜”之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术，开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。

黄刺玫是蔷薇科蔷薇属落叶灌木，在我国山西、陕西、河北、吉林、内蒙古、辽宁等省的丘陵山区均有分布［1］。黄刺玫花颜色艳丽，东北、华北庭院栽培主要用作园林观赏［2］。果实7～8月成熟，近球形或倒卵圆形，红褐色或紫褐色，直径8～10 mm，无毛，花后萼片反折［3］。现代研究表明，黄刺玫果汁安全无毒［4］，果实中微量元素和维生素含量丰富［5］，另外黄刺玫果有抗衰老、抗氧化及改变血液流变性等保健作用［6-7］。山西省太行山脉、吕梁山区、中条山、五台山、关帝山等地分布着大量的野生黄刺玫，且品质高、产量大，资源非常丰富［8］。为了综合反映药材中各主要成分及其相对含量，以山西省野生黄刺玫果为主，收集了10批黄刺玫果，采用HPLC法建立了黄刺玫果的指纹图谱。该方法准确，重复性好，操作简便，为全面控制黄刺玫的质量提供了更加丰富的质量评价信息。

1　材料与方法

1.1实验材料

1.1.1仪器与试剂岛津LC-2010A HT高效液相色谱仪；RE 5298A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；DLSB-低温冷却循环泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；KDM型调温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）；UPR-I-40L型优普系列超纯水机（成都超纯科技有限公司）。甲醇、乙腈均为色谱纯，乙醇、磷酸（分析纯，天津市登峰化学试剂厂），实验中所用水均为超纯水。

1.1.2样品来源黄刺玫果来源见表1。

表1　黄刺玫果来源

1.2实验方法

1.2.1色谱条件色谱柱：Inertsil ODS-SP色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；检测波长：254 nm；进样量：10 μL；运行时间：80min；梯度洗脱程序如表2所示。

表2　梯度洗脱程序

1.2.2供试品溶液的制备称取刺玫果10.0g，加入20倍量的50%乙醇，回流提取120min，趁热抽滤，60℃减压浓缩至干，加入50 mL甲醇超声溶解，取上清液，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2结果

2.1方法学考察

2.1.1稳定性实验取同一份黄刺玫果的供试品溶液，分别在制备后0h、2h、6h、8h、12h、24h进样，采集色谱图，记录色谱峰的保留时间和峰面积，结果显示，各色谱峰保留时间RSD在0.41%～0.77%之间，峰面积RSD在0.93%～2.69%之间，均小于3%，表明供试液在24h内稳定，符合指纹图谱要求。

2.1.2精密度实验取同一份黄刺玫果的供试品溶液，连续进样5次，采集色谱图，记录色谱峰的保留时间和峰面积，结果显示，各色谱峰保留时间RSD在0.05%～0.29%之间，峰面积的RSD在0.25%～2.25%之间，均小于3%，符合指纹图谱精密度的要求，说明仪器系统精密度良好。

2.1.3重现性实验取同一批黄刺玫果5份，分别按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，采集色谱图，记录色谱峰的保留时间和峰面积，结果显示，各色谱峰保留时间RSD在0.30%～1.01%之间，峰面积的RSD在1.35%～2.43%之间，均小于3%，符合指纹图谱精密度的要求，说明本文建立的指纹图谱方法重现性良好。

2.2指纹图谱建立与分析

2.2.1指纹图谱及特征峰的标定取10批黄刺玫果，按照“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，按照“1.2.1”项下色谱条件进样分析获得黄刺玫果指纹图谱（如图1），采用“中药指纹图谱相似度评价系统（2004 A版）”软件，以S1为参照图谱，自动匹配，多点校正，中位数法生成对照谱图，同时建立指纹图谱叠加图，见图2。

图1　黄刺玫果对照指纹图谱

2.2.2相似度计算采用国家药典委员会“中药指纹图谱相似度评价系统（2004 A版）”软件，计算10批黄刺玫果样品的相似度，结果见表3。结果表明10批黄刺玫果样品间相似度有差异，山西不同批次的黄刺玫果相似度均在0.9以上，无明显差异。山西产与黑龙江产的黄刺玫果间差异较大，相似度在0.6～0.9之间。

图2　10批不同产地黄刺玫果的HPLC指纹图谱

表3　10批黄刺玫果的相似度

3讨论

检测波长的选择：考察了230 nm、254 nm、 280 nm、320 nm和360 nm处的指纹图谱，其中254 nm下得到的色谱图基线平稳，色谱峰数量相对较多、峰面积较大、分离度较好。故选择254 nm作为检测波长。

流动相的选择：依次考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液、甲醇-乙腈-0.2%磷酸水溶液等5种洗脱系统。结果甲醇-乙腈-0.2%磷酸水溶液流动相下所得色谱图基线最稳，色谱峰分离效果最好。对0.1% 和0.2%磷酸水溶液所得图谱进行对比，发现两者所得色谱图中色谱峰数目、峰高及分离度无明显差异，综合考虑洗脱系统、色谱柱对酸的耐受性及色谱柱的使用寿命，最终选择甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液为本实验的最佳洗脱系统。

供试品制备方法的考察：分别考察了超声和加热回流两种提取方式，加热回流提取效果较好；采用回流提取法考察30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇和甲醇5种提取溶剂，结果50%乙醇提取液所得色谱图峰最多，最能代表黄刺玫果中成分；以50%乙醇为提取溶剂，分别回流提取60min、90min、120min，结果提取120min效果最好。因此供试品的制备方法为：50%乙醇加热回流提取120min。

对不同产地的10批黄刺玫果进行HPLC指纹图谱研究，发现山西省内不同产地、不同批次黄刺玫果中成分略有差异，但指纹图谱中色谱峰的整体面貌基本一致。山西与黑龙江产的黄刺玫果之间的差异较大。本文建立的指纹图谱方法稳定可行，可为评价和控制黄刺玫果的质量提供参考。

［1］李萍.野生黄刺玫的开发利用［J］.农产品加工，2010，210（6）：30-31.

［2］宋金枝，杨允菲.长白山区黄刺玫花的表型可塑性探析［J］.通化师范学院学报，2010，31（2）：30-33.

［3］山西植物志编委会.山西植物志［M］.北京：中国科学技术出版社，1998：335-337.

［4］王常青，李宁，段光明，等.黄刺玫果实原汁的毒性研究［J］.中国公共卫生学报，1994，13（5）：320.

［5］王常青.黄刺玫果实的营养成分分析［J］.营养学报，1997，19（4）：114-116.

［6］王常青，张义贤.黄刺玫果汁抗衰老作用的实验研究［J］.中国老年学杂志，1996，16（1）：30-31.

［7］王常青，倪淑华.黄刺玫果汁的抗氧化作用及对大鼠血液流变学的影响［J］.中国公共卫生学报，1995，14（3）：169-172.

［8］叶松华，王晓燕，杨莹莹，等.黄刺玫果中总黄酮的提取工艺研究［J］.山西医科大学学报，2013，44（7）：535-538.

（编辑：翟春涛）

Study on chromatographic fingerprint of Rosa xanthina lindl from shanxi province by HPLC

Wang Xiaomei1，Wei Gang2，Wang Jindong2
（1.College of Pharmacy，Shanxi Medical University，Taiyuan Shanxi 030001；2.Shanxi Institute of Medicine and Life Science，Taiyuan Shanxi 030006）

Objective：To establish HPLC fingerprints of Rosa xanthina lindl mainly from Shanxi province to provide a reference for quality control of Rosa xanthina lindl.Methods：Inertsil ODS-SP（4.6 mm×250 mm，5 μm）column was used，mobile phase was methanol-acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution with gradient elution at a flow rate of 1.0 mL/min. Temperature of column was 25℃and UV detection wavelength was 254 nm.Software for chromatographic fingerprint was applied to analyze pattern，common peaks and similarity.Results：Among the obtained fingerprint，the most of the detected peaks were separated effectively.The accuracy，stability，and repeatability of this method were satisfied.Twelve common chromatographic peaks were identified by fingerprints.Constituent types of 10 batches of Rosa xanthina lindl were similar. Conclusion：HPLC fingerprints of Rosa xanthina lindl are first established，the method is simple，exclusive，stable and highly repeatable，can provide a reference for identification and quality assessment of Rosa xanthina lindl.

fruit of Rosa xanthina lindl；HPLC；chromatographic fingerprint

R285.5

A

1671-0258（2016）03-0023-03

山西省国际科技合作项目（2014081049-2）

王晓梅，硕士研究生，E-mail：SDxiaomeiwang@163.com

王进东，高级工程师，E-mail：844381238@qq.com