萸姜药效组分对小鼠急性心肌缺血的影响研究*

2016-08-08覃海龙宋胜武云雪林

贵阳学院学报(自然科学版) 2016年2期

关键词：组分

覃海龙，宋胜武，云雪林

覃海龙，宋胜武，云雪林*

（贵阳中医学院药学院，贵州贵阳550002）

摘要：目的：探寻萸姜药效组分对小鼠急性心肌缺血的影响。方法：以腹腔注射ISO制备小鼠常压缺氧模型和急性心肌缺血模型，对照丹参片组观察不同浓度萸姜药效组分对小鼠耐常压缺氧与急性心肌缺血的作用；以腹腔注射Pit制备小鼠急性心肌缺血模型，对照硝苯地平片组观察不同浓度萸姜药效组分对小鼠急性心肌缺血的作用。结果：小鼠耐常压缺氧和ISO致小鼠急性心肌缺血实验结果显示，复方丹参片组能明显延长小鼠存活时间（P＜0.05）及有效抑制小鼠心电图S-T段抬高（P＜0.05），萸姜药效组分的高、中、低剂量对小鼠存活时间无显著影响（P＞0.05），对小鼠心电图S-T段无显著影响（P＞0.05）。Pit致小鼠急性心肌缺血实验结果显示，硝苯地平组与萸姜组分高剂量组均能有效抑制小鼠心电图S-T段抬高（P＜0.05），萸姜组分低剂量组对小鼠心电图S-T段无显著影响（P＞0.05）。结论：萸姜药效组分对Pit致小鼠急性心肌缺血具有明显的改善作用。

关键词：干姜挥发油；吴茱萸挥发油；组分；急性心肌缺血；Pit

干姜、吴茱萸是我国传统常用中药。干姜、吴茱萸主要功效为温中散寒［1，2］，现代研究表明有改善心血管的作用［3-5］；古代对于心血管疾病用活血化瘀，回阳救逆等法，现代研究结果也表明了其中挥发油和生物碱是这些治法治则的物质基础［4-8］。根据现代对干姜挥发油、吴茱萸挥发油和吴茱萸总生物碱药理作用的研究结果，通过组分配伍研究［9-11］，可以降低干姜、吴茱萸药材自身复杂性对质量控制的影响，有利于研究干姜与吴茱萸药效组分群的协同作用、配伍关系等方面。

但目前单独使用干姜挥发油和吴茱萸挥发油用于抗急性心肌缺血和扩张外周围血管的研究少见［8］或未见报道，所以本文通过以抗急性心肌缺血和扩张微血管作为药效学指标研究干姜、吴茱萸组分，分别进行抗ISO［12-13］、Pit［14-16］致小鼠急性心肌缺血心电图的影响实验。

1 实验材料

1.1 试药

干姜（生产批号20120701，贵阳济仁堂药业有限公司，贵州兴义）；吴茱萸（生产批号20120706，贵阳济仁堂药业有限公司，贵州湄潭）；干姜、吴茱萸经贵阳中医学院药学院生药教研室周汉华教授鉴定：干姜为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎；吴茱萸为芸香科植物疏毛吴茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang的干燥成熟果实。

硝苯地平片（生产批号120302，山东临汾宝珠制药有限公司，规格：10 mg）；复方丹参片（批号121004，贵州飞云岭药业有限公司）；盐酸异丙肾上腺素注射液（ISO，批号101103，上海禾丰制药有限公司，规格：2 ml∶1 mg每支）；垂体后叶素注射液（Pit，批号100405，规格：南京新百药业有限公司，0.5 ml∶3单位）；25%乌拉特溶液（上海恒远科技有限公司）。

1.2 动物

昆明种小鼠（雌雄各半，体重20-25 g，贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（黔）2012-0001）

2 实验方法

2.1 萸姜药效组分制作

将干姜挥发油β-CD包合物、吴茱萸挥发油β-CD包合物、吴茱萸总生物碱根据含量、包合率等按干姜、吴茱萸原药材比例（15∶10）折算出三种组分中药的剂量，混合均匀，配制成一定浓度的混悬液备用；成人以60 kg体重计，以8倍成人量为中剂量，2倍中剂量为高剂量，1/2倍为低剂量；用药剂量为0.1 mL/10 g。

2.2 对腹腔注射ISO小鼠耐常压缺氧的影响

取小鼠72只，雌雄各半，随机分为6组，每组12只，分别为干姜、吴茱萸组分（以下简称萸姜药效组分GWZ）高、中、低剂量组、丹参片组、模型组和正常组，各组分别按表1中的试药和相应剂量以0.1mL/10g灌胃给药，每天1次，连续18天。末次给药后40 min，萸姜药效组分（GWZ）高、中、低剂量组、丹参片组和模型组小鼠按0.05 ml/10 g腹腔注射ISO（0.1 mg/mL），正常组小鼠按0.05 ml/10 g腹腔注射NS，20 min后分别将各组小鼠逐只放入盛有10 g钠石灰的250 ml广口瓶中（每瓶一只），在瓶口涂抹凡士林以保证广口瓶密闭，盖上瓶盖后立即开始计时，观察小鼠表现，记录小鼠的存活时间（以小鼠呼吸停止作为缺氧死亡时间）。结果见表1。

表1 萸姜药效组分对小鼠耐缺氧的影响（±s）Tab.1 The effect of composition of Yu-Jiang on mice of normobaric hypoxia

注：与模型组比较，*P＜0.05，有显著性差异

组别　　动物数（只）剂量（mg/kg）存活时间（秒）GWZ高剂量组8　410　866.0000±102.01821 GWZ中剂量组　9　210　857.7778±142.11771 GWZ低剂量组　9　100　874.2222±110.65914丹参片组　10　150　1153.4000±257.77216*模型组　10　等容量　NS　768.3333±49.18079正常组　10　等容量　NS　912.0000±191.31729*

与模型组比较，萸姜药效组分的高、中、低剂量对存活时间无显著影响，而丹参片能明显延长存活时间，正常组小鼠存活时间长于模型组。

2.3 对ISO致急性心肌缺血小鼠心电图的影响

取小鼠72只，雌雄各半，随机分为6组，每组12只，分别为萸姜药效组分高、中、低剂量组、丹参片组、模型组和正常组，按表2中的试药和相应剂量以0.1 mL/10g对小鼠灌胃给药，每天1次，连续18天。末次给药40 min后，以25%乌拉坦按0.1 mL/10g给小鼠腹腔注射给药，麻醉，麻醉小鼠仰卧固定于鼠台上，连接生物机能实验系统，记录正常心电图（II导联），待心电图稳定后，萸姜药效组分高、中、低剂量组、丹参片组、模型组以ISO（0.1 mg/mL）按0.05 mL/10 g给小鼠腹腔注射给药，正常组按0.05 mL/10 g给小鼠腹腔注射NS，记录注射后5 min内S-T段的平均高度，并与注射ISO前心电图比较，以S-T段高度变化程度表示心肌缺血的程度。结果见表2。

表2 萸姜药效组分对ISO小鼠心电图的影响（±s）Tab.2 The effect of composition of Yu-Jiang on the mice GWZ of ISO

注：与模型组比较，*P＜0.05，有显著性差异

组别　　动物数（只）剂量（mg/kg）造模后△T （mv）GWZ高剂量组9　410　0.0200±0.00667 GWZ中剂量组　7　210　0.0233±0.01118 GWZ低剂量组　9　100　0.0245±0.00820丹参片组　12　150　0.0100±0.00816*模型组　12　　等容量　NS　0.0275±0.00707正常组　12　　等容量　NS　0.0178±0.00441*

萸姜药效组分高、中、低剂量组对ISO致小鼠急性心肌缺血心电图S-T段改变均无显著影响，而丹参片组明显缩小ISO致小鼠急性心肌缺血心电图S -T段的改变程度。（见图1、图2、图3、图4）

图表1a 高剂量组心电图　注射　ISO前Fig.1a The ECG of high dose group of Yu-Jiang pre-injection ISO

图1b 高剂量组心电图　注射　ISO后Fig.1b The ECG of high dose group of Yu-Jiang post-injection ISO

图　2a 低剂量组心电图　注射　ISO前Fig.2a The ECG of low dose group of Yu-Jiang pre-injection ISO

图2b 低剂量组心电图注射　ISO后Fig.2b The ECG of low dose group of Yu-Jiang post-injection ISO

图3a 空白组心电图　注射　ISO前Fig.3a The ECG of blank group of Yu-Jiang pre-injection ISO

图　3b 空白组心电图　注射　ISO后Fig.3b The ECG of blank group of Yu-Jiang post-injection ISO

图4a 阳性组心电图　注射　ISO前Fig.4a The ECG of positive group of Yu-Jiang pre-injection ISO

图　4b 阳性组心电图　注射　ISO后Fig.4b The ECG of positive group of Yu-Jiang post-injection ISO

图5a 高剂量组心电图　注射Pit前Fig.5a The ECG of high dose group of Yu-Jiang pre-injection Pit

2.4 对Pit致急性心肌缺血小鼠心电图的影响

取小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，每组12只，分别为萸姜药效组分高、低剂量组、硝苯地平组、模型组和正常组，按表3中的试药和相应剂量以0.1 mL/10 g对小鼠灌胃给药，每天1次，连续18天。末次给药40 min后，以25%乌拉坦按0. 1 mL/10 g给小鼠腹腔注射给药，麻醉，麻醉小鼠仰卧固定于鼠台上，连接生物机能实验系统，记录正常心电图（II导联），待心电图稳定后，萸姜药效组分高、中、低剂量组、硝苯地平组、模型组以Pit （0.1 mg/mL）按0.05 mL/10 g给小鼠腹腔注射给药，正常组按0.05 mL/10 g小鼠腹腔注射NS，记录注射后5 min内S-T段的平均高度，并与注射Pit前心电图比较，以S-T段高度变化程度表示心肌缺血的程度。结果见表3。

图5b高剂量组心电图　注射Pit后Fig.5b The ECG of high dose group of Yu-Jiang post-injection Pit

图6a 低剂量组心电图　注射Pit前Fig.6a The ECG of high dose group of Yu-Jiang pre-injection Pit

表3 萸姜药效组分对Pit小鼠心电图的影响（±s）Tab.3 The effect of composition of Yu-Jiang on the mice GWZ of Pit

注：与模型组比较，*P＜0.05，有显著性差异

组别　　动物数（只）剂量（mg/Kg）造模后△T （mv）GWZ高剂量组　9　530　0.0000±0.0039*GWZ低剂量组　10　210　-0.0039±0.0024硝苯地平　9　130　-0.0038±0.0043*模型组　10　　等容量　NS　0.0200±0.0082正常组　12　　等容量NS　0.0104±0.0052*

GWZ高剂量组和硝苯地平组明显缩小ISO致小鼠急性心肌缺血心电图S-T段的改变程度，而GWZ低剂量组对Pit致小鼠急性心肌缺血心电图S-T段改变均无显著影响。（见图5、图6）

图6b 低剂量组心电图　注射　Pit后Fig.6b The ECG of high dose group of Yu-Jiang post-injection Pit

3 结果与讨论

小鼠腹腔注射ISO后，可造成小鼠急性心肌缺血。［12，13］本实验结果表明各组小鼠腹腔注射ISO前后，小鼠ST-T段均出现改变，T波有显著高耸，供试药品组与空白对照组进行比较，组分中药的高、中、低剂量组均不能明显抑制心肌ST-T的抬高，无显著性差异，即不能对小鼠急性心肌缺血产生保护作用。在缺氧实验中，组分中药高、中、低剂量组与空白组相比（P＞0.05）无显著性差异，即不能对小鼠缺氧产生保护作用。所以干姜、吴茱萸组分对ISO心电图没有明显的影响，即不能对小鼠急性心肌缺血产生保护作用。

Pit大剂量使用可收缩血管［14-16］，可造成小鼠出现急性心肌缺血。本实验结果表明各组小鼠腹腔注射Pit注射液前后，小鼠ST-T段均出现改变，T波显著高耸。与空白对照组比较，组分中药高、低剂量组均能明显抑制心肌ST-T的抬高，有显著性差异，说明干姜、吴茱萸组分中药对Pit致小鼠心肌急性缺血具有一定的缓解作用。

硝苯地平具有扩张血管的作用［17］，经过实验萸姜药效组分对Pit致急性心肌缺血小鼠心电图的影响，表明萸姜药效组分具有扩张血管的作用，为其作用机制的进一步研究奠定基础。

参考文献：

［1］张明发，沈雅琴.温里药“温中散寒”药理研究［J］.中国中医药信息杂志，2000（2）：30-32.

［2］张明发，沈雅琴.温里药“温中散寒”药理研究（续）［J］.中国中医药信息杂志，2000（3）：29-32.

［3］朱瑄.吴茱萸现代药理研究［J］.光明中医，2011（6）：1282-1283.

［4］杨志欣，孟永海，王秋红，等.吴茱萸药理作用及其物质基础研究概况［J］.中华中医药学刊，2011（11）：2415 -2417.

［5］龚慕辛，王智民，张启伟，等.吴茱萸有效成分的药理研究进展［J］.中药新药与临床药理，2009（2）：183-187.

［6］孙凤娇，李振麟，钱士辉，等.干姜化学成分和药理作用研究进展［J］.中国野生植物资源，2015（3）：34-37.

［7］张明发，苏晓玲，沈雅琴.干姜现代药理研究概述［J］.中国中医药科技，1996（2）：46-49.

［8］陈颖，刘冬，周静，等.干姜挥发油对急性心肌缺血缺氧模型大鼠血流动力学的实验研究［J］.成都中医药大学学报，2011，34（1）：80-82.

［9］苗明三，马霄，王灿.中药有效组分配伍研究的探讨［J］.中药新药与临床药理，2009（5）：487-490.

［10］梁鑫森，徐青，薛兴亚，等.组分中药系统研究［J］.世界科学技术--中医药现代化，2006，8（3）：1-7.

［11］盛华刚.中药组分配伍模式的研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2013（16）：349-352.

［12］任晓安，朱家校，何伟.参丹滴丸对异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌缺血的保护作用［J］.食品与药品，2013 （5）：311-313.

［13］吴红彦，王虎平，肖艳娇，等.参参康心滴丸对急性心肌缺血大鼠心电图及血清NO，血浆ET与心肌TNF-α，IL-6含量的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（16）：152-154.

［14］方宇辉，陈正爱.金银花复方制剂对垂体后叶素诱发大鼠急性心肌缺血的保护作用［J］.中成药，2012 （6）：1166-1169.

［15］张兴，刘苑，谭毓治，等.毛茛总苷对垂体后叶素所致实验性心肌缺血的影响［J］.广东药学院学报，2013 （2）：167-171.

［16］高丽君，吕富银.垂体后叶素在治疗血管扩张性休克中的应用［J］.山西职工医学院学报，2012（2）：9-11.

［17］杜珍，谢学渊，张沂.硝苯地平对氯化钾、去甲肾上腺素及内皮素诱导离体大鼠血管收缩的影响［J］.海军医学杂志，2013（1）：25-28.

云雪林（1968-），男，蒙古族，内蒙古呼和浩特人，教授。主要研究方向：中药与民族医药方剂配伍规律研究。

中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：1673-6125（2016）02-0027-05

收稿日期：2016-03-15

基金项目：贵州省教育厅科研课题重点项目：“萸姜药效组分方剂配伍研究”（项目编号：黔教科第2010048号）。

作者简介：覃海龙（1988-），男，贵州兴义人，助教、硕士。主要研究方向：中药及民族医药方剂研究。

Research on the effect of composition of Yu-Jiang on AMI mice

QIN Hai-long，SONG Sheng-wu，YUN Xue-lin*
（Pharmaceutical College of Guiyang college of TCM，Guiyang 550002，China）

Abstract：Objective：To seek the effect of composition of Yu-Jiang on AMI mice.Methods：By intraperitoneal injection of ISO to mice model of normobaric hypoxia and AMI.The effect of mice of normobaric hypoxia and AMI verified the different concentration of the components of Yu-Jiang comparison with Salvia Tablets.By intraperitoneal injection of Pit to mice model of AMI，comparing with Nifedipine Tablets research the different concentration of the components of Yu-Jiang on the mice model of AMI.Results：The results of the two tests showed that compound danshen tablets group can obviously prolong the survival time of mice（P＜0.05），significantly inhibit the rise of ECG S T segment（P＜0.05），Yu-Jiang groups had no obvious effect on the survival time of mice（P＞0.05），and they were not significant impact for ECG（P＞0.05）.The test of AMI mice caused by Pit showed that both the group of Nifedipine Tablets group and high dose group of Yu-Jiang can significantly inhibit the rise of ECG S T segment（P＜0.05），low dose group of Yu-Jiang was not significant impact for ECG（P＞0.05）.Conclusion：The composition of Yu-Jiang have obvious positive effects on the mice model of AMI caused by Pit.

Key words：volatile oil from Dried Ginger；volatile oil from Fructus Evodia；composition；AMI；Pit