生精合剂对不育男性精子参数及精子凋亡的影响

杨 欣 丁彩飞 颜志中 杜 静 胡惠敏 周红娟

生精合剂对不育男性精子参数及精子凋亡的影响

杨 欣 丁彩飞 颜志中 杜 静 胡惠敏 周红娟

不育症；精子；DNA；五子衍宗软胶囊；生精合剂

研究[1-2]表明，以精子DNA损伤为特征的精子染色质结构异常是男性不育、复发性自然流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）以及辅助生殖技术治疗失败的重要原因之一，精子DNA损伤亦是近年来生殖医学的研究热点之一。迄今为止，多数男性不育症仍缺乏令人满意的治疗方法。笔者临床应用生精合剂治疗男性不育症疗效满意，本研究借助流式细胞技术观察生精合剂对不育男性精子凋亡的影响，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料2014年9月—2015年10月就诊于本院生殖医学科、男科的男性不育症患者60例，采用简单随机方法平行分为治疗组30例，年龄23～43岁，平均（26.2±2.7）岁；病程1.5～4年，平均（2.4±1.7）年；对照组30例，年龄24～40岁，平均（25.7±3.1）岁；病程1～5年，平均（2.6±1.4）年；两组患者的年龄、病程等基线资料分布均衡（P＞0.05），具有可比性。

1.2 西医诊断根据《世界卫生组织男性不育标准化检查与诊疗手册》[3]和《男科学》[4]弱精子症男子不育诊断标准，已婚男女同居1年以上，性生活正常，未避孕而不育，精子总活力（快速前向运动+非快速前向运动）＜40%（38～42%），快速前向运动＜32%（31～34%）。

1.3 中医辨证参照《中医病证诊断疗效标准》（国家中医药管理局，1994年）和《中药新药临床研究指导原则》[5]拟定。肾精亏虚证：主症：不育，精子总活力和（或）前向运动精子率低、精子存活率低。次症：腰脊酸痛，胫酸膝软或足跟痛，尿后余沥或夜尿增多，头晕目眩或耳鸣耳聋，面色晦暗，畏寒肢冷，小便清长，性功能减退，神疲健忘，舌质淡苔薄，脉沉细或细弱。具备主症“不育，精子浓度低，精子总活力和（或）前向运动精子低，存活率低”，兼具次症中的任2项及舌脉象，即可诊断。

1.4 入选标准①符合西医诊断；②符合中医辨证标准；③年龄22～45岁；④参照WHO《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版，2011年），禁欲3～5天，精液常规分析2次（2次精液检查间隔时间至少2周）显示，精子总活力（PR+NP）＜40%（38～42%），前向运动精子（progressively motile，PR）＜32%（31～34%），精子存活率（sperm survival rate）＜58%（55～63%）。所有入选病例均自愿签署知情同意书（知情同意书由我院医学伦理委员会讨论通过）。

1.5 排除/退出标准排除标准：①无精子症；②勃起功能障碍或逆行射精或不射精等；③Ⅱ°以上精索静脉曲张；④性腺发育不良，睾丸萎缩或缺如；⑤先天畸形、精道梗阻；⑥药物未控制的细菌性前列腺炎；⑦近3～6个月内高热（T＞38℃）史；⑧正在服用抗癫、抗肿瘤等影响生精功能及精子活力的药物者；⑨合并心血管、肝、肾和造血系统严重原发性疾病，精神病患者；⑩过敏体质或对试验药物过敏者。退出标准：治疗过程中发生严重的不良反应，或改用其他方法治疗，患者因各种原因必须停药，对研究用药过敏者。

1.6 治疗方法开始治疗前，两组患者先进行1周的洗脱期观察，然后治疗组给予生精合剂（菟丝子、枸杞子、五味子、潼蒺藜、熟地、生晒参、淫羊藿、巴戟天、鹿角片、淮山药、生黄芪、麦冬、全当归、红花等组成，由本院制剂室制备提供，每毫升含生药2g），1次150mL，1天2次，口服。对照组给予五子衍宗软胶囊，1次3粒，1天3次；两组均连续治疗3个月（1个生精周期）。所有患者治疗期间一律不用其他药物、治疗方法。嘱患者服药期间戒烟、酒，忌食碳酸类饮料、茶、咖啡，禁止桑拿及盆（池）浴，避免高温环境作业。

1.7 观察指标

1.7.1 标本收集于治疗前和治疗3个月后，禁欲3～5天，自慰法收集全部精液于干燥洁净的玻璃容器中，置37℃恒水浴箱中30～60min待液化后备用。

1.7.2 精液参数检测根据参照WHO《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版，2011年）进行精液常规分析。采用WLJY-9000荧光染色精子动（静）态图像分析系统（北京伟力科技发展有限公司）检测精精子浓度（106/mL）、前向运动精子（PR，%）等参数。

1.7.3 精子凋亡检测参照文献[6]方法，采用精子染色质结构分析（SCSA）法检测精子DNA完整性。应用仪器及试剂：全自动流式细胞仪（型号：Epics.XL4. MCL，出厂编号：AF36197，美国Beckman Coulter公司），荧光染料标记的磷脂结合蛋白（Alexa Fluor 488 annexin V）和膜联蛋白结合缓冲液（Annexinblinding buffer）（大连科生物技术有限公司提供）；Nikon E-1000荧光显微镜（日本Nikon公司），Olympus CX31普通光学显微镜（日本Olympus公司）。

1.7.4 统计学方法计量资料用（x±s）表示，应用SPSS12.0统计软件进行F检验、t检验和卡方检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 治疗前后两组患者精子浓度比较治疗前两组患者精子浓度比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后两组患者精子浓度均有改善（P＜0.05）；治疗后两组患者精子浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 治疗前后两组患者精子活力（a+b级，%）比较治疗前两组患者精子活力比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后两组患者精子活力（a+b级，%）均明显有改善（P均＜0.05）；治疗后治疗组患者精子活力（a+b级，%）改善显著优于对照组（P＜0.05）。见表2。

表1 两组患者治疗前后精子浓度比较（106/mL，（x±s）

表2 治疗前后两组患者精子活力比较（%，x±s）

2.3 治疗前后两组患者精子凋亡率比较治疗前两组患者活精子、凋亡精子及坏死精子百分率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），治疗后两组患者活精子、凋亡精子及坏死精子百分均有不同程度改善，但治疗组改善更显著（P＜0.05）。见表3。

表3 治疗前后两组患者精子调亡率比较（%，x±s）

3 讨论

男性不育症病因复杂，目前尚缺乏有效的治疗手段。中医认为，肾为先天之本，藏精主生殖，性与生殖机能的成熟衰退与肾的功能密切相关。肾虚则生殖机能减退，肾虚是男性不育的根本原因[7]。“肾精不足”是少、弱精男性不育症的基本病机。因此，“补肾填精”是治疗少弱精男性不育症的根本治则。

但肾虚为病，无论肾阴虚还是肾阳虚都会发生因虚致瘀的病理改变，脉络瘀阻，血行不畅，则有碍于肾阴、肾阳的化生，惟瘀去而新生[7]。笔者前期研究表明，生精合剂单用或与抗氧化剂（维生素E、辅酶Q10）联合应用能显著改善不育症男性精子活动率、前向运动率和活力指数等运动参数[7-8]。生精合剂以五子衍宗丸为基础，在补肾温阳填精的同时注重益气养血活血，酌情配伍丹参、红花等活血化瘀药物，对于久病有血瘀证，见面色紫暗，少腹、会阴刺痛，舌暗红或有瘀斑，脉弦涩者，尤为适宜。方中当归富含阿魏酸等抗氧化活性成分，菟丝子、巴戟天、淫羊藿等对超氧阴离子（O2-）、羟基自由基（·OH）等自由基有清除作用[8-9]。本研究结果显示，生精合剂能提高不育男性精子浓度和活力（P＜0.05），显著降低不育男性精子凋亡率（P＜0.05）。

［1］葛少钦，赵峥辉，殷会莹，等.精子DNA损伤因素研究进展［J］.医学研究与教育，2014，31（3）：61-64.

［2］王丽.SPA和精子DNA完整性检测在IVF-ET中的应用［D］.兰州大学，2009.

［3］世界卫生组织.世界卫生组织男性不育标准化检查与诊疗手册［S］.北京：人民卫生出版社，2007：35.

［4］郭应禄，胡礼泉.男科学［M］.北京：人民卫生出版社，2004：115.

［5］国家中医药管理局.中药新药临床研究指导原则［S］.北京：中国医药科技出版社，2002.

［6］杨建华，华咏，马亮，等.精子染色质结构分析的临床意义［J］.中国男科学杂志，2006，20（12）：6-8.

［7］杨欣，丁彩飞，颜志中，等.生精合剂对不育男性精子运动参数及精子膜完整性的影响［J］.中华中医药杂志，2011，26（2）：392-395.

［8］杨欣，张永华，丁彩飞，等.巴戟天水提物对人精子膜功能氧化损伤的保护作用［J］.中国中药杂志，2006，31（19）：1614-1617.

［9］杨欣，张永华，丁彩飞，等.应用体外培养法研究淫羊藿水提物对人精子膜功能损伤的保护作用［J］.中国临床药理学与治疗学，2007，12（6）：663-666.

（收稿：2016-05-20修回：2015-05-25）

浙江省中医药科技计划项目（No.2014ZB086）

浙江省杭州市红十字会医院生殖医学科（杭州310003）

杨欣，Tel：（0571）56109558；E-mail：hz56109558@126.com