改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的应用效果

王洪亮，程艳宇，王梦晓（天津乳品食品监测中心，天津300381）

改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的应用效果

王洪亮，程艳宇，王梦晓
（天津乳品食品监测中心，天津300381）

评估GB4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物检验β型溶血性链球菌检验》中改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的质量。选取国内三家（标记为A、B、C）和国外一家（标记为D）培养基生产商的胰蛋白胨大豆肉汤培养基（商品化脱水合成培养基）和相应添加剂，使用目标菌（乙型溶血性链球菌FSCC225016）和非目标菌（大肠埃希氏菌ATCC25922），依据GB4789.28-2013《食品安全国家标准食品微生物检验培养基和试剂的质量要求》中选择性增菌培养基的定性测试方法进行质量评估。同时不加添加剂进行试验。国内A、B和C三家改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基中目标菌浊度值均为0，非目标菌浊度值为0；未加试剂的培养基目标菌浊度值均为0，非目标菌浊度值为0。国外D改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基中目标菌浊度值为2，非目标菌浊度值为0；未加试剂的培养基目标菌浊度值为2，非目标菌浊度值为1。国内A、B、C三家的改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基质量评估证明是胰蛋白胨大豆肉汤培养基（不加添加剂）基础成分的问题；国产胰蛋白胨大豆肉汤培养基质量有待提高。

改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基；选择性增菌培养基；浊度值

食品安全监管及检测是保障人民群众“舌尖上的安全”的一项重点工作，为了使食品安全检测工作更好的为食品安全监管服务，各项食品安全检测标准都在不断的清理和改进中。培养基和试剂作为微生物检验中的关键环节，所以培养基的质量尤为重要，我国的培养基生产厂家众多，质量也参差不齐，本文对国内外培养基生产厂商的GB 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物检验β型溶血性链球菌检验》中改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的质量进行了评估，为今后β型溶血性链球菌的检测工作提供一定参考。

1　材料

1.1培养基

脑心浸液肉汤（BHI）、改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基（国内三家A、B、C和国外一家D）。

1.2试验标准菌株

乙型溶血性链球菌ATCC21059、大肠埃希氏菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923：购于广州环凯微生物科技有限公司。

1.3仪器设备

高压灭菌锅：日本雅马拓；隔水式恒温培养箱：上海一恒科技有限公司。

2　方法

2.1培养基

将待评估培养基按说明书配制，高压灭菌后分装无菌试管，每管10 mL。

2.2工作菌悬液的制备

将标准菌株接种到脑心浸液肉汤（BHI）36℃培养过夜，进行10倍系列稀释至10-3，作为工作菌悬液。

2.3接种

用1 μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到用于性能测试的液体培养基中，36℃培养24 h。

2.4结果解释

用目测的浊度值（如0～2）评估培养基：0表示无混浊；1表示很轻微的混浊；2表示严重的混浊。

目标菌的浊度值应为2，非目标菌的浊度值应为0 或1。有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。选择性液体计数培养基目标菌应有产气现象，非目标菌无产气现象。

3　结果与讨论

浊度值的实验结果见表1。

表1　A、B、C、D四家生产的改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的浊度值Table 1　A，B，C，D modified tryptone soy broth four production medium turbidity value

国内三家生产的改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基不能满足检验工作的要求，由试验结果显示出，是基础培养基中的成分不能满足菌种的生长要求，而国外生产的改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基能满足检验工作的要求。因此，期待国内微生物培养基生产厂家要进一步加强培养基原料的质量控制，进而加强检验工作的可靠性和准确性。

4　小结

培养基的质量是微生物实验室检测工作的基础，事关检测工作的准确性、可靠性，在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在工作中忽视任何一个环节的质量问题，导致偏离检验结果的科学性、客观性。因此，认真地做好培养基的质控工作，不断完善和提高培养基的质控水平，为微生物检测实验室提供高质量的培养基，至关重要。

根据对4家培养基生产商的改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基进行质量评估，一方面显示出国内3家的不能满足检验要求，从试验结果看出，是基础培养基的问题；另一方面，也证明了对于检验工作，培养基质量评估的重要性。

［1］陆承平．兽医微生物学［M］.4版.北京：中国农业出版社，2007：67-73

［2］叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［M］．3版.南京：东南大学出版社，2006：763-769

［3］纪铁鹏．乳品微生物学［M］．北京：中国轻工业出版社，2006：1-12

［4］吴福平，邵景东，姚卫蓉，等．食品中β-溶血性链球菌检验技术的研究［J］．中国国境卫生检疫杂志，2010，33（1）：47-49

［5］中华人民共和国卫生部．GB 4789.11-2014食品安全国家标准食品微生物学检验金β型溶血性链球菌检验［S］．北京：中国标准出版社，2014

［6］中华人民共和国卫生部．GB 4789.28-2013食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求［S］．北京：中国标准出版社，2013

Effect of Modified Tryptone Soy Broth Medium

WANG Hong-liang，CHENG Yan-yu，WANG Meng-xiao
（Dairy and Food Monitoring Center，Tianjin 300381，China）

Evaluation of GB 4789.11-2014＜National food safety standard Food microbiological examination：β-hemolytic streptococcus test＞in modified tryptone soy broth medium quality.a total of three domestic（labeled A，B，C）and foreign（labeled D）a culture based manufacturer of tryptone soya broth culture base（commercial dehydration synthetic culture medium）and the corresponding additives，use target bacteria（βhemolytic streptococcus ATCC21059）and non target bacteria（Escherichia coli ATCC25922，Staphylococcus aureus ATCC25923），according to the GB4789.28-2013＜National food safety standards Food microbiological examination Quality requirements for media and reagents＞in selective enrichment culture based qualitative test method for quality evaluation.At the same time without additives test.The A，B and C three modified tryptone soy broth culture medium target bacteria turbidity values are 0 and non target bacteria turbidity value of 0；without reagent medium target bacteria turbidity values are 0，non target bacteria turbidity value of 0.Foreign D improvement of the pancreatic tryptone soya broth culture medium target bacteria turbidity value is 2，non target bacteria turbidity value of 0；without reagent culture based target bacteria turbidity value of 2，non target bacteria turbidity values for 1.Domestic A，B，C three modified tryptone soy broth medium quality assessment that is tryptone soya broth culture medium（without additives）based problem；domestic tryptone soya broth culture medium quality needs to be improved.

modified trypticase soy broth medium；selective enrichment medium；turbidity value链球菌归属于链球菌属，在伯杰氏系统细菌学手册列有30多个种。链球菌种类很多，在自然界分布很广，水、尘埃、动物体表、消化道、泌尿生殖道黏膜、乳汁等都有存在，有些是非致病菌，有些构成人和动物的正常菌群。在链球菌属中与食品卫生和安全有关的链球菌主要是β-溶血性链球菌，尤以A群链球菌（如化脓链球菌）和B群链球菌（如无乳链球菌）为主。β-溶血性链球菌对人的毒力较强，能够引起各种化脓性疾病、肺炎、伤口感染和败血症等。化脓链球菌为β-溶血、对地衣杆菌素敏感、PYR阳性具有兰氏A群抗原，可形成大菌落，是人体的重要致病菌之一。该菌有多种毒力因子（M蛋白、脂磷壁酸酶、毒素），可引起多种感染，包括咽炎、呼吸道感染皮肤感染（脓疱病、丹毒）、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎、产褥期脓毒病、关节炎，产毒素的菌株引起的感染可导致猩红热或更严重的中毒性休克综合征。无乳链球菌是发生以产褥期脓毒症和脑膜炎为特征的新生儿感染的一个重要原因。近年来，在北美洲和欧洲伴发中毒性休克综合征的严重链球菌感染有增多的趋势［1-4］。

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.10.035

王洪亮（1981—），男（汉），工程师，硕士研究生，从事食品微生物检测。

2016-03-08