单胺氧化酶A基因启动子30-bp重复序列多态性与重度子痫前期发病机制的关系

孙　燕，侯雪晶，郭红梅



单胺氧化酶A基因启动子30-bp重复序列多态性与重度子痫前期发病机制的关系

孙燕1，侯雪晶1，郭红梅2

1.066000，秦皇岛市第一医院产科；2.100039北京，武警总医院口腔科

【摘要】目的探讨单胺氧化酶A(MAO-A)基因启动子30-bp重复序列多态性与重度子痫前期发病机制的关系。方法采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测60例重度子痫前期患者(病例组)及70例正常孕妇(对照组)MAO-A基因启动子区的基因型，并对该多态性进行统计分析。结果MOA-A基因启动子区H/H、H/L、L/L各基因型的分布频率和H、L等位基因的分布频率在病例组与对照组之间的分布均无统计学意义(P>0.05)。结论MAO-A基因启动子区的基因多态性可能与重度子痫前期的发病无相关性，但从机制上推测其基因多态性导致酶活性下降、儿茶酚胺灭活减少可能是重度子痫前期发病的重要原因。

【关键词】重度子痫前期；单胺氧化酶A；基因多态性

妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders complicating pregnancy)是妊娠期特有的疾病，可严重危害母婴健康，发病原因至今尚无定论，但遗传因素的影响已取得共识。有研究表明，妊娠期高血压疾病患者交感神经紧张性增加，血中儿茶酚胺尤其是去甲肾上腺素水平明显高于正常孕妇[1，2]，可能与妊娠期高血压疾病的发病相关[1，3]。单胺氧化酶A(MAO-A)是儿茶酚胺代谢过程中的主要降解酶，其酶的活性导致血中儿茶酚胺水平的变化，可能在妊娠期高血压疾病的发病过程中起一定的作用，调控MAO-A合成的基因位于X 染色体p11.23-11.4区,在MAO-A基因启动区内存在含30bp碱基的可变数串联重复多态性(30bp-uVNTR) ，这种多态性与MAO-A基因的转录活性有关，被认为是MAO-A基因功能的标志物[4]。启动子区域30bp-uVNTR多态性在人群中分别有2、3、3.5、4、5次重复(2R、3R、3.5R、4R、5R)，其中3、4次重复最多见，3.5次或4次重复序列的转录活性较之3次与5次重复序列的转录活性高2～10倍[4]。关于MAO-A基因启动子30-bp重复序列多态性与重度子痫前期的遗传易感性的关系国内尚未见报道。为此，我们采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法，探讨重度子痫前期患者MAO-A基因启动子区30bp的可变数串联重复(MAOA-uVNTR)多态现象与正常孕妇的关联分析。

1对象与方法

1.1对象选取2014-10至2015-10于秦皇岛市第一医院产科住院的重度子痫前期患者60例(病例组)，平均(21.2±4.01)岁，平均孕周(33.5±2.13)周。选择同期门诊产检及住院的健康孕妇共70例(对照组)，平均(23.03±3.09)岁，平均孕周(35.52±1.85)周。两组孕妇均为中国汉族妇女、单胎、初产，均无内科其他合并症及输血史。HDCP的诊断标准参照谢幸及苟文丽主编的第八版《妇产科学》中的标准[5]。

1.2方法

1.2.1DNA的提取所有受试者均采取外周静脉血2 ml，EDTA抗凝，-70 ℃保存，常规法提取DNA。

1.2.2PCR反应参考文献[6] 设计引物。上游引物序列：5＇-ACAGCCTGACCGTGGAGAAG-3＇，下游引物序列：5＇-GAACGGACGCTCCATTCGGA-3＇。PCR总反应体系20 μl，包括PCRmix 10 μl，上游引物0.25 μl，下游引物0.25 μl，模板1 μl，ddH2O 8.5 μl，PCR反应条件设置为：95 ℃预变性5 min，然后94 ℃变性35 s，62 ℃退火40 s，72 ℃延伸30 s，35个循环后，72 ℃终末延伸5 min。应用1%琼脂糖凝胶对上述PCR产物进行电泳鉴定，同时选择2000 bp DNAmarker同时水平电泳，判定扩增片段长度及基因型。其中3R/3R基因型显示320 bp条带，3R/4R基因型显示320 bp、350 bp两条带，4R/4R基因型显示350 bp条带。

1.2.3统计学处理根据Sabol等[4]的研究结果和分组方式，将3.5次和4次重复序列定义为高活性组(H/H)，2次、3次和5次重复序列定义为低活性组(L/L)。本研究未发现2次、3.5次及5次重复序列，故高活性组只包含4次重复序列，低活性组为3次重复序列。资料统计分析采用SPSS 11.5版软件包进行，采用χ2检验比较各基因型和等位基因在重度子痫前期组及正常对照组的分布频率差异，以及进行Hardy-Wein-berg遗传平衡定律检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1PCR产物电泳结果3R/3R基因型显示320 bp条带，3R/4R基因型显示320 bp、350 bp两条带，4R/4R基因型显示350 bp条带，本研究未发现2次、3.5次及5次重复序列(图1)。

2.2MAO-A基因启动子区基因型频率的比较病例组MAO-A基因启动子区基因型H/H、H/L、L/L的频率分别为10%、40%和50%，与对照组的H/H、H/L、L/L基因型频率11.4%、45.7%和42.9%(同前)比较，差异无统计学意义(χ2=0.66，P>0.05；表1)。

图1　PCR电泳产物(MAO-A基因启动子区不同基因型的电泳图)

M为 2000bp Marker;1、3泳道为H/H基因型(350 bp)；2、4、5泳道为H/L基因型(320/350 bp)；6泳道为L/L基因型(320 bp)

表1　重度子痫前期组与正常孕妇组MAO-A基因启动子区基因型频率比较　(%)

注：病例组：重度子痫前期患者组；对照组：健康孕妇组

2.3MAO-A基因启动子区等位基因频率的比较病例组MAO-A基因启动子区等位基因H、L的分布频率分别为30.0%、70.0%，与对照组的等位基因频率34.3%、65.7%比较，差异无统计学意义(χ2=0.54，P>0.05；表2)。

表2　重度子痫前期组与正常孕妇组MAO-A基因启动子区等位基因频率比较　(%)

注：病例组：重度子痫前期患者组；对照组：健康孕妇组

2.4Hardy-Wein-berg遗传平衡定律检验

HH∶HL∶LL与p2∶2pq∶q2相符，由此可证明该群体是一个平衡群体。

3讨论

妊娠期高血压是妊娠与血压升高并存的一组疾病，包括妊娠期高血压、子痫前期、子痫以及慢性高血压并发子痫前期和慢性高血压合并妊娠，发生率5%～12%。该组疾病严重影响母婴健康，是孕产妇和围产儿病死率升高的主要原因。病因至今不明，具有家族倾向性，提示遗传因素与该病发生有关，但遗传方式尚不明确。在子痫前期的遗传易感性研究中，尽管目前已定位了十几个子痫前期染色体易感区域，但在该区域内进一步寻找易感基因仍面临很大的挑战[5]。

张丽红等[7]发现,血浆中肾上腺素及去甲肾上腺素含量与血压呈正相关。Hernandez[8]等研究证实，血中儿茶酚胺水平的变化，可以影响血压，并与高血压相关。Missouris等[9]发现，在未接受治疗的高血压患者,尿去甲肾上腺素分泌增加，并与高血压的严重程度呈正相关。

单胺氧化酶A(MAO-A)是儿茶酚胺代谢过程中的主要降解酶，其酶的活性导致血中儿茶酚胺水平的变化，可能在妊娠期高血压疾病的发病过程中起一定的作用，MAO-A的基因位于X 染色体p11.23-11.4区,其中启动子区存在30bp的可变数串联重复(MAOA-uVNTR)多态现象，该多态现象与MAO-A活性相关，被认为是MAO-A基因功能的标志物，该重复序列可出现3～6次的重复，其中3次重复的基因会使所编码的酶活性降低，3.5次或4次重复的等位基因较之3次与5次重复的基因转录活性高了2～10倍[4]。以往的研究显示，低表达的MAO-A基因容易导致酗酒、攻击性和反社会行为，它甚至被一些科学家称为“战士”基因，但对于该基因多态性与重度子痫前期疾病的研究我国目前尚无相关报道。因此，本研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法，探讨重度子痫前期患者MAO-A基因启动子区30bp的可变数串联重复(MAOA-uVNTR)多态现象与正常孕妇的关联分析。结果发现,MAO-A基因启动子区的等位基因和基因型分布在重度子痫前期组和对照组中差异无统计学意义。表明MAO-A基因启动子30-bp重复序列多态性与重度子痫前期的发病无相关性。但妊娠期高血压疾病的发生和发展是极其复杂的过程，影响子痫前期基因型和表型的其他因素如：多基因型、基因种族差异、基因相互作用及环境等，特别是基因和环境相互作用是极其重要的。此外由于本研究样本量的限制, 我们并不排除MAO-A基因在重度子痫前期易感性中的作用, 有待扩大样本进一步研究。我们还认为, 对该位点和其它可能位点进行联合分析, 如该基因上的其它多态以及邻近基因位点等的共同分析, 将可能揭示MAO-A 基因在重度子痫前期病因中的作用。

【参考文献】

[1]Zhang W Y,Wang L,Liu L L.The study of levels of norepinephrine and dopamine-β-hydroxylase in patients with pregnancy-induced hypertension[J]. Chin Med l J,2001,64(6):351- 356.

[2]Kaaga R J,Leinonen A,Moore P,etal. Effect of changes in body posture on vaso-active homones in pre-eclamptic women[J]. Journal of human hypertension,2004,18(11):789-794.

[3]王丽，张为远.正常妊娠和妊娠高血压综合征母婴儿茶酚胺水平测定[J].中华妇产科杂志，2000,35(4):233-234.

[4]Sabol S Z, Hu S, Hamer D.A functional polymorphism in the monoamine oxides A gene promoter[J].Hum Genet, 1998,103(3):273-279．

[5]谢幸,苟文丽.妇产科学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013: 64-73.

[6]张芸,明庆森,朱熊兆,等.单胺氧化酶A基因多态性与儿童期虐待对青少年攻击行为的影响[J].中华精神科杂志，2014,47(2)：84-89.

[7]张丽红,郭瑶,姚常柏,等.颈交感神经干离断对妊娠期高血压疾病大鼠儿茶酚胺水平的影响[J].中国医科大学学报,2006,35(1):5-7.

[8]Hernandez M, Hernandez I, Rodriguez F,etal.Endothelial dysfunction in gestational hypertension induced by catechol-O-methyltransfense inhibition[J].Exp Physiol，2013,98(3)：856-866．

[9]Markandu N D,He F J,Papavasileiou M V,etal. Urinary catecholamines and the relationship with blood pressure and pharmacological therapy[J].Journal of hypertension,2016,34(4):704-709.

(2015-04-19收稿2016-03-21修回)

(责任编辑梁秋野)

基金项目：河北省秦皇岛市科技支撑项目(编号201302A086)

作者简介：孙燕，硕士，主治医师。

【中国图书分类号】R714.246

Association between severe preeclampsia and mononmine oxidase A gene

SUN Yan1, HOU Xuejing1，and GUO Hongmei2.1.

Department of Obstetrics, The First Hospital of Qinhuangdao, Qinhuangdao 066000, China;2.Department of Stomatology, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force,Beijing 100039,China

【Abstract】ObjectiveTo analyze the impact of this polymorphism of monoamine oxidase A(MAO-A) variable number tandem repeat (VNTR) on the risk of severe preeclampsia.MethodsSixty pregnant women wih severe preeclampsia and seventy normal pregnant women were genotyped for MAO-A VNTR polymorphism using PCR-based restriction fragment length polymorphism method.ResultsSignificant differences were not observed between the case group and normal controls in the frequencies of MAO-A VNTR alleles and genotypes.ConclusionsThere is no significant difference in the allele and genotype frequencies of MAO-A gene between case group and normal controls . Our results show that MAO-A VNTR polymorphism perhaps can no increase the risk of severe preeclampsia.

【Key words】severe preeclampsia; MAO-A；gene polymorphism