蛇床子素凝胶剂的处方优选研究

张锦炳廖丰蕴* 张 艳（ 广东省韶关市中医院，广东 韶关 506； 广州中医药大学中药学院，广东 广州 50006）



蛇床子素凝胶剂的处方优选研究

张锦炳1廖丰蕴2* 张 艳2
（1 广东省韶关市中医院，广东 韶关 512026；2 广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006）

【摘要】目的 优化蛇床子素凝胶剂的处方。方法 采用Franz扩散池，以离体大鼠腹部皮肤为透皮屏障，用高效液相法测定接受液中蛇床子素的含量，考察不同浓度卡波姆、不同促渗剂单用及合用对经皮渗透的影响，以透皮速率Jss为指标优化蛇床子素凝胶剂处方，并对蛇床子素凝胶剂物理性质进行表征。结果 0.5%卡波姆的透皮速率较高；几种不同的促渗剂对蛇床子素凝胶剂透皮吸收具有促进作用，促渗剂单用考察中，氮酮：3%＞5%＞1%，油酸：5%＞1%＞10%，冰片：3%＞5%＞1%，合用考察中：5%异丙醇+3%冰片＞5%，2%异丙醇+3%氮酮＞3%氮酮+5%油酸。结论 5%异丙醇与3%冰片合用后，促渗效果较二者单用表现明显的协同作用，为蛇床子素经皮给药制剂处方设计提供依据。

【关键词】蛇床子素；凝胶剂；处方优选

蛇床子素是从中药蛇床子药材中提取分离到的香豆素类化合物。药理研究表明，蛇床子素具有抗骨质疏松症、抗菌、杀虫、抗高血压、抗炎镇痛等功效［1］。目前临床多用蛇床子及其复方制剂治疗妇科炎症、足癣及银屑病等疾病，生物利用度较低［2］。中药凝胶剂是一种新型的外用制剂，适用于皮肤、黏膜及腔道，既可避免口服给药胃肠道内的酶、酸的影响，又可减轻不良反应，符合中医的“内病外治”的理念，具有使用方便、患者依从性和生物相容性好等多种优点［3］。本研究透皮速率Jss为指标，考察不同用量卡波姆，以及不同种类促渗剂对蛇床子素凝胶剂透皮吸收的影响，优选最佳的凝胶剂处方。

1 仪器与材料

蛇床子素标准品（批号110822-201308，中国药品生物制品检定所）；蛇床子素原料药（南京泽朗医药科技有限公司，纯度98%）；无水乙醇（天津市致远化学试剂有限公司）；卡波姆940（广州全奥化工产品有限公司）；乙腈（迪马公司，色谱纯）；纯净水（华润怡宝饮料有限公司）。

SD大鼠，雄性，体质量（220±20）g，购于广州中医药大学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2013-0020。Waters高效液相色谱仪，515泵（Waters，美国）；2487紫外检测器，N3000色谱工作站；TK-12D型透皮扩散试验仪（上海锴凯科技贸易有限公司）；AUW120D电子分析天平（日本岛津）。

2 方法与结果

2.1 样品的制备：称取卡波姆加适量水溶胀充分溶胀，再取3%蛇床子素、10%甘油、20%无水乙醇（w/w）、按比例加入不同种类的促渗剂，超声溶解后，加入上述溶胀后的卡波姆中，搅拌均匀后滴加3～4滴三乙醇胺，搅拌均匀，即得蛇床子素凝胶剂。

2.2 标准品溶液的制备：精密称定蛇床子素对照品0.02502 g，用甲醇定容至25 mL，即为1 mg/mL的对照品储备液。

2.3 蛇床子素含量测定方法

2.3.1 色谱条件。色谱柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（80∶20；检测波长：322 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为室温；进样量为10 μL。

2.3.2 线性范围考察：取上述1 mg/mL蛇床子素储备液用甲醇稀释成浓度分别为2、20、80、120、160、200、400、800 μg/mL的蛇床子素标准品溶液，按色谱条件进样测定峰面积，以峰面积（A）对蛇床子素标准品溶液浓度（C）进行线性回归，得回归方程A=34639C+43426，R2=0.999，结果表明：蛇床子素在2～800 μg/mL浓度范围内呈良好线性。

2.3.3 精密度试验：用120 μg/mL蛇床子素对照品溶液重复进样测定6次，计算峰面积RSD为0.28%，表明该仪器的精密度良好。

2.3.4 稳定性试验：取同一份透皮接收液样品，分别于2、4、6、8、10、12、18、24 h测定其蛇床子素含量，计算RSD为1.17%，表明蛇床子素在24 h内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验：取相同取样点的透皮接收液6份，按上述色谱条件样分析测定蛇床子素浓度RSD为2.11%，表明本方法重复性良好。

2.3.6 回收率试验：采用空白加样法，取空白接收液9份，每份1 mL，分别加入0.2、0.4、0.6 mL，80 μg/mL蛇床子素对照品溶液，用30%乙醇生理盐水定容至2 mL制成低、中、高浓度分别为8、16、24 μg/mL的系列溶液，每个浓度3份，分别进样测定，计算回收率，其中低中高浓度的平均回收率分别99.50%、100.14%、100.21%，RSD分别为1.11%、0.22%、0.18%。

2.4 体外透皮实验

2.4.1 离体皮肤的制备：将SD大鼠麻醉后，剪去腹部皮毛，6%硫化钠脱毛，24 h后观察，选取皮肤无损伤大鼠颈椎脱臼法处死，剥取腹部皮肤后将其角质层朝下平铺在洁净的玻璃板上，小心用手术刀片刮除皮肤的脂肪层与结缔组织，用生理盐水冲洗，置于-20 ℃冰箱保存，备用。

2.4.2 透皮实验方法：参考文献［4］中方法，取离体皮肤解冻后用生理盐水洗净，滤纸吸干其表面水分，角质层朝上固定于扩散池的供给池和接收池之间，接收池内放置磁力搅拌子，并注入8 mL 30%乙醇生理盐水作为接收液。然后在供给池离体皮肤表面均匀涂抹1 g蛇床子凝胶（无促渗剂）或分别含促渗剂蛇床子素凝胶剂，控制水浴温度（32 ±0.5） ℃，转速200 rpm，分别于1、2、4、6、8、10、12 h从接收池取样，每次取样1 mL，并立即补充等体积同温的空白接收液，样品液过0.22 μm微孔滤膜，按2.3.1项下色谱条件测定各样品中蛇床子素含量，数据处理参考文献［5］中方法：Qt=（VCn+Σcivi）/A（i=1，2…n-1），以其透皮速率（Jss）和增渗倍数（ER）为指标，考察不同处方对凝胶中蛇床子素的透皮吸收特性的影响。（其中Jss为Q-t方程斜率；ER=Jss/J0，公式中Qn为n时间药物的累计透过量（μg/cm2），Cn 为n时间以前浓度测定值（μg/mL），V为接收液总体积（mL），Vi每次取样体积（mL）Jss为透皮速率常数［μg/（cm·h）］，J0未加促渗剂的透皮速率常数［μg/（cm·h）］，A为渗透面积（3.14 cm2）。

2.5 卡波姆用量的考察：按2.1凝胶制备方法，分别制备含0.5%、1.0%、1.5%卡波姆凝胶剂，所制备的凝胶剂均成型性好，利于涂布。进行体外透皮实验，并按2.3.1色谱方法测定各接收液中蛇床子素浓度，计算蛇床子素累积透过量和透皮速率，结果见图1。

图1 卡波姆用量对药物透皮特性的影响

2.6 促渗剂单用考察：按2.1方法制备样品，分别考察加入促渗剂氮酮（1%、3%、5%）、油酸（1%、5%、10%）和冰片（1%、3%、5%）对蛇床子素凝胶剂透皮特性的影响，结果见表1。

表1 促渗剂单用对药物透皮特性的影响

2.7 促渗剂合用考察：根据促渗剂单用考察的结果，选择3%氮酮、5%油酸和3%冰片进行促渗剂合用对蛇床子素凝胶剂的促渗效果影响。分别制备含5%异丙醇+3%冰片、5%1，2-丙二醇+3%氮酮和3%氮酮+5%油酸的凝胶剂，进行透皮试验。结果表明三者促渗效果均明显，5%异丙醇+3%冰片、5%1，2-丙二醇+3%氮酮表现明显协同作用，3%氮酮+5%油酸不表现协同作用，结果见表2、图2。

表2 促渗剂合用

图2 促渗剂合用的药物透皮特性

3 结果与讨论

3.1 流动相的选择：参考文献［6］选择流动相为甲醇-水（80∶20）进行实验，结果发现蛇床子素色谱峰拖尾，采用甲醇换成乙腈后，峰型有很大改善，确定乙腈-水（80∶20）为流动相。

3.2 卡波姆用量的选择：实验考察了0.5%、1.0%、1.5%卡波姆用量，结果表明，随着卡波姆用量的增大，透皮速率下降，可能原因为黏度增大导致凝胶剂透皮速率降低。实验选择卡波姆用量为0.5%。

3.3 促渗剂考察：氮酮、油酸、冰片单用均表现出良好的促渗效果，但在经皮吸收研究中，很多单一的促渗剂都难以达到理想的促渗效果，因此多选择两种或多种促渗剂联用［7-8］。但结果显示氮酮与油酸合用后促渗效果较二者单用未体现出明显优势，可能是由于油酸与氮酮合用后凝胶剂的黏度增加，抑制了皮肤的水合作用。在经皮给药制剂中，丙二醇、异丙醇等醇类促渗剂常作为溶媒或载体；通过促进药物和其他促渗剂的溶解，达到增加药物的渗透的目的［9］。

参考文献

［1］ 赖滢滢，王岩.星点设计-效应面法进行蛇床子素脂质体处方优化的研究［J］.中国新药杂志，2015，24（6）：708-712.

［2］ 王永辉，房树标，高丽，等.蛇床子素微乳的制备及其理化性质研究［J］.世界中西医结合杂志，2014，9（3）：257-259.

［3］ 赖宝林，王利胜.中药凝胶剂的研究进展［J］.中药新药与临床药理，2010，21（2）：211-213.

［4］ 庞帼敏，叶秀波.不同促渗剂对复方蛇床子凝胶的透皮吸收特性的研究［J］.中国医药导报，2013，10（22）：16-18.

［5］ 周开，岑锐标.不同促渗剂对蛇床子软膏透皮吸收特性的影响［J］.中国药业，2013，22（14）：34-35.

［6］ 王利胜，占建坤.高效液相色谱法测定跌打活络微乳中蛇床子素的含量［J］.时珍国医国药，2006，38（9）：683-685.

［7］ Samir M.Synergistic effect of enhancers for transdermal drug delivery［J］.Pharm Res，2000，17（11）：1354-1359.

［8］ Finnin BC，Morgan TM. Transdermal penetration enhancers：applica tions，limitations，and potential［J］.J Pharm Sci，1999，88（10）：955-959.

［9］ 黎绫，何世英.萜类促渗剂对盐酸普萘洛尔凝胶体外经皮渗透的影响［J］.中国药学杂志，2015，50（1）：63-67.

中图分类号：R283.6

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）16-0024-02

*通讯作者

Study on Optimizing Prescription of Osthole Hydrogels

ZHANG Jin-bing1， LIAO Feng-yun2*， ZHANG Yan2
（1 Shaoguan Hospital of Traditional Chinese Medicine， Shaoguan 512026， China； 2 School of Chinese Material Medical， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006， China）

［Abstract］Objective Optimization of Osthole hydrogels. Methods Osthole gels： using Franz diffusion cell from rat abdominal skin as transdermal barrier，accepted by the content was determined by HPLC， effects of different concentrations of carbomer， different penetration enhancers and combined effects on percutaneous penetration， transdermal rate Jss study investigated as an index to Optimized the hydrogels prescription. Results 0.5% carbomer performed higher penetration rate； several different penetration enhancers can promote percutaneous absorption of osthole hydrogels. The Investigation of different penetration enhancers， Azone： 3%＞5%＞1 oleic acid： 5%＞1%＞10%， borneol： 3%＞5%＞1%， combined expedition： 5% isopropanol+3% borneol＞5%， 2% isopropyl alcohol+3% Azone＞3% Azone+5% oleic acid. Conclusion 5% isopropyl alcohol and 3% borneol combination， penetration was better than the two alone show significant synergies， provide the basis for osthole transdermal preparation prescription design.

［Key words］Osthole； Hydrogels； Optimizing prescription