胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化及临床意义

陈志凯，傅松维，鲍舟君，李卓栋

(浙江省舟山医院 检验中心，浙江 舟山 316000)

胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化及临床意义

陈志凯Δ，傅松维，鲍舟君，李卓栋

(浙江省舟山医院 检验中心，浙江 舟山 316000)

目的 观察胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化特点，探讨其临床意义。方法 回顾性分析浙江省舟山医院自2012年1月～2014年6月消化内科及胃肠外科收治的84例胃癌患者为研究对象(观察组)，选择30例健康人为对照组。采用qRT-PCR检测所有研究对象血清miR-200b和miR-200c水平，比较2组间血清miR-200b和miR-200c水平差异，探讨胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平与其临床及病理特点之间的关系。结果 胃癌组血清miR-200b和miR-200c水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。胃癌患者不同年龄、性别、分化程度和浸润深度之间血清miR-200b和miR-200c水平差异无统计学意义；较高临床分期及合并淋巴结转移的患者血清miR-200b和miR-200c水平明显低于较低临床分期和无淋巴结转移者，差异均有统计学意义(均P<0.05)。血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的AUC分别为0.826(95%CI：0.741～0.911，P<0.001)和0.856(95%CI：0.778～0.935，P<0.001)。结论 胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平明显降低，并且与临床分期和淋巴结转移密切相关，检测血清miR-200b和miR-200c水平有助于判断胃癌并判断预后。

胃癌；血清；miR-200b；miR-200c；临床意义

近年来胃癌的发生率越来越高，但是因为缺乏有效的筛查手段，大多数患者确诊时已经到了病程的中晚期，因而失去最佳治疗时机，因此其死亡率较高。血清肿瘤标志物仍是诊断肿瘤性疾病的主要指标之一，简单易行，无论是在大医院还是基层医院都可以实现。传统的与胃癌相关的肿瘤标志物如CA72-4、CA12-5、CA19-9及CEA等虽然具有一定的临床价值，但是其敏感性和特异性有限，难以满足临床需要[1]。随着人们对于微小RNA(miRNA)的研究逐渐深入，越来越多的研究发现miRNA与肿瘤性疾病的发生和发展具有密切联系，因而有望成为诊断肿瘤的新指标[2]。尤其是miR-200家族与消化系统肿瘤的关系已经成为临床医师关注和研究的热点问题之一，主要包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429五个成员[3]。研究显示胃癌组织中miR-200b及miR-200c表达减少，且拥有较差的预后[4]。但是对于胃癌患者血清中的miR-200b和miR-200c水平变化及临床病理参数之间的关系报道较少。本研究旨在观察胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化特点并探讨其临床意义，为临床上更好地诊断胃癌提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究采用回顾性分析，选择自2012年1月～2014年6月在浙江省舟山医院消化内科及胃肠外科住院治疗的84例胃癌患者为研究对象，所有患者均符合以下纳入标准：①初次诊断为胃癌；②血清miR-200b和miR-200c水平的测定均在术前进行；③均经病理学检查证实为胃癌。排除以下患者：①既往诊断为胃癌，此次再次入院治疗者；②测定血清miR-200b和miR-200c水平时已接受过胃癌切除手术者；③临床资料不完整者。其中男49例，女35例；年龄36～84岁，平均(59.67±6.26)岁；分化程度为低分化54例，中分化18例，高分化12例；肿瘤浸润深度为侵及浆膜46例，未及浆膜38例；肿瘤的临床分期为Ⅰ～Ⅱ期40例，Ⅲ～Ⅳ期44例；无淋巴结转移22例，合并淋巴结转移62例。选取同期在我院进行体检的30例健康人为对照组，其中男18例，女12例；年龄34～83岁，平均(57.35±6.37)岁。2组间性别及年龄差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：所有研究对象均在入院时或体检时抽取外周静脉血5 mL用于检测血清miR-200b和miR-200c水平，所有血液标本采集后统一放置于-80 ℃冰箱内保存最后统一进行操作。血清miR-200b和miR-200c水平的检测均采用qRT-PCR方法进行检测，所有试剂盒均由上海吉玛生物科技有限公司提供，并严格按照说明书进行操作。比较2组间血清miR-200b和miR-200c水平差异，探讨胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平与其临床及病理特点之间的关系，采用相关性分析探讨血清miR-200b和miR-200c之间的相关性。

1.2.2 血清miR-200b和miR-200c的检测方法：①血清总miRNA的提取：所有标本均取离心后血清400 μL并参照Ambion公司提供的试剂盒提取血清总miRNA；②血清中总miRNA水平的检测：根据Applied Biosystems公司提供的试剂盒说明书进行逆转录，采用real-time qPCR进行定量分析。采用RNU6作为内参，所有引物均由Applied Biosystems公司合成，其中miR-200b和miR-200c的引物分别为5’-TGGATGGAGTCAGGTCTCTA-3’和5’-CAGTGAGGCTGGATTCG-3’。

2 结果

2.1 2组间血清miR-200b和miR-200c水平比较 胃癌组血清miR-200b和miR-200c水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组间血清miR-200b和miR-200c水平比较Tab.1 Comparison of serum miR-200b and miR-200c levels between

*P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.2 胃癌患者血清miR-200b水平与临床及病理参数之间的关系 胃癌患者不同年龄、性别、分化程度和浸润深度之间血清miR-200b水平差异无统计学意义；但是较高临床分期及淋巴结转移的患者血清miR-200b水平明显低于较低临床分期和无淋巴结转移者，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 胃癌患者血清miR-200b水平与临床及病理参数之间的关系Tab.2 The relation between serum miR-200b and clinical or pathological features in gastric cancer patients(±s)

2.3 胃癌患者血清miR-200c水平与临床及病理参数之间的关系 胃癌患者不同年龄、性别、分化程度和浸润深度之间血清miR-200c水平差异无统计学意义；但是较高临床分期及合并淋巴结转移的患者血清miR-200c水平明显低于较低临床分期和无淋巴结转移者，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 胃癌患者血清miR-200c水平与临床及病理参数之间的关系Tab.3 The relation between serum miR-200c and clinical or pathological features in gastric cancer patients(±s)

2.4 血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的ROC曲线分析 对血清miR-200b和miR-200c水平绘制诊断胃癌的ROC曲线，结果发现血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的AUC分别为0.826(95% CI：0.741～0.911，P<0.001)和0.856(95% CI：0.778～0.935，P<0.001)。见图1。

图1 血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的ROC曲线Fig.1 Receiver operating characteristic of serum miR-200b and miR-200c diagnosed as gastric cancer

3 讨论

目前临床上对于早期胃癌的诊断仍缺乏特异性的指标和有效的手段，血清肿瘤标志物检测仍然是临床上常用的协助诊断肿瘤性疾病的方法之一。经典的肿瘤标志物主要包括以下3类[5-6]：在胚胎期大量表达而正常人体内仅少量表达，如甲胎蛋白(AFP)；肿瘤细胞膜糖基化形成的糖链抗原，如CA12-5；肿瘤组织中大量表达的酶、激素和蛋白质等抗原。这些肿瘤标志物在一定程度上能够协助临床医师发现和诊断一些肿瘤性疾病，但是由于敏感性和特异性有限，其临床价值难以满足临床需要。

微小RNA(miRNA)是人体内非编码的内源性单链RNA分子，其大小约为22个核苷酸组成，涉及到体内细胞的增殖、分化和凋亡等过程[7]。近年来随着研究的深入，人们发现约52.5%编码miRNA的基因位于肿瘤相关区域或染色体的脆性位点，这一点提示miRNA在肿瘤性疾病的发生发展过程中也发挥了重要作用，并且被称为新型的肿瘤标志物[8]。miR-200家族是其中研究较多的一类微小RNA，诸多研究已经证实miR-200家族在多种肿瘤(如恶性黑色素瘤、胰腺癌、膀胱癌、肝癌等)的发生和发展过程中发挥了一定的作用[9]。miR-200b和miR-200c又是miR-200家族中研究较多的微小RNA，2者分别位于人类的1号和12号染色体上，并且具有类似的核心RNA序列，且在多数肿瘤疾病中表现出一定的抗肿瘤作用，大量研究表明miR-200b和miR-200c与抑制肿瘤的侵袭性转移具有密切联系[10]。迄今为止对于miR-200研究较多地集中在抑制转录因子ZEB1/ZEB2的表达上，主要表现在miR-200可以直接抑制ZEB1/ZEB2的表达并增加E-钙粘蛋白的生成，最终阻断上皮-间质转化[11]。已有研究表明胃癌组织中miR-200b和miR-200c表达明显下调，并且随着其表达的降低，患者的临床分期越高，且生存时间越短，并推测这种表达的下调与其直接抑制DNA甲基转移酶DNAMT3A和DNAMT3B和间接抑制DNAM1的表达有关[12]。但是对于胃癌患者血清中的miR-200b和miR-200c水平与肿瘤特征之间的关系研究较少。

本研究中通过检测胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平后发现，胃癌组血清miR-200b和miR-200c水平均明显低于健康人组，差异均有统计学意义(P<0.05)；胃癌患者不同年龄、性别、分化程度和浸润深度之间血清miR-200b和miR-200c水平差异无统计学意义；但是较高临床分期及合并淋巴结转移的患者血清miR-200b和miR-200c水平明显低于较低临床分期和无淋巴结转移者，差异均有统计学意义(P<0.05)。这一点与何利恒[13]的研究结果一致。表明胃癌患者体内miR-200b和miR-200c水平的降低减弱了其正常的抗肿瘤作用，导致肿瘤扩散和转移加剧。进一步的统计学表明血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的AUC分别为0.826(95% CI：0.741～0.911，P<0.001)和0.856(95% CI：0.778～0.935，P<0.001)，具有极高的临床诊断价值。说明血清miR-200b和miR-200c水平可以作为协助诊断胃癌的有效肿瘤标志物，笔者相信随着进一步研究的深入和检验技术的发展，血清miR-200b和miR-200c水平必将成为临床上诊断胃癌的常规且有效的手段。

综上所述，胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平明显降低，并且与临床分期和淋巴结转移密切相关，检测血清miR-200b和miR-200c水平简单可行，并且有助于判断胃癌及预后。

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(编校：王俨俨)

Changes of serum levels of miR-200b and miR-200c in patients with gastric cancer and its clinical significance

CHEN Zhi-kaiΔ, FU Song-wei, BAO Zhou-jun, LI Zhuo-dong

(Inspection Center，Zhoushan Hospital of Zhejiang Province, Zhoushan 316000, China)

ObjectiveTo obverse the changes of serum levels of miR-200b and miR-200c in patients with gastric cancer and discuss its clinical significance. MethodsA total of 84 patients with gastric cancer admitted at the department of gastroenterology and gastrointestinal surgery of Zhoushan Hospital of Zhejiang Province from January 2012 to June 2014 were retrospectively investigated(the observation group) and 30 healthy people were selected as the control group. The levels of serum miR-200b and miR-200c of all people were tested by qRT-PCR and the difference about serum miR-200b and miR-200c were compared between the two groups and the relation among the serum miR-200b and miR-200c and clinical or pathological features were discussed. ResultsThe levels of serum miR-200b and miR-200c of the gastric cancer group was lower than that of the control group, respectively, there were significant differences(allP<0.05). There were no statistical significances in serum miR-200b and miR-200c with different ages, genders, differentiation degree and depth of invasion. The levels of serum miR-200b and miR-200c of the gastric cancer patients with higher degree of clinical stage and lymphatic metastasis was lower than that of the gastric cancer patients with lower degree of clinical stage and without lymphatic metastasis,respectively, the differences were statistically significant(allP<0.05).The AUC of the levels of serum miR-200b and miR-200c to diagnose gastric cancer were respectively 0.826(95% CI 0.741-0.911,P<0.001) and 0.856(95% CI：0.778-0.935,P<0.001). ConclusionThe levels of serum miR-200b and miR-200c in patients with gastric cancer decrease obviously and they are closely related to clinical stages and lymph node metastasis; it is helpful to diagnose gastric cancer and pedict prognosis to test the serum miR-200b and miR-200c.

gastric cancer; serum; miR-200b; miR-200c; clinical significance

陈志凯，通信作者，男，本科，初级检验师，研究方向：胃癌肿瘤标志物血清检验，E-mail：sdlwwlli@126.com。

R735.2

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.05.64