卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光对白癜风患者外周血Th17细胞亚群的影响*

洪志林　柯风兰



卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光对白癜风患者外周血Th17细胞亚群的影响*

洪志林①柯风兰①

【摘要】目的：探讨卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光对白癜风患者外周血Th17细胞亚群的影响。方法：选取2013年1月-2015年1月本院皮肤性病科白癜风患者192例作为研究对象，采用随机数字表法将其分为研究组与对照组，每组96例，对照组采用308 nm准分子激光治疗，研究组在对照组基础上采用卡介苗多糖核酸治疗，采用流式细胞仪检测外周血Th17细胞亚群变化，比较两组临床疗效及不良反应发生情况。结果：治疗后，研究组治疗总有效率明显高于对照组，其中同组进展期白癜风患者治疗总有效率明显高于稳定期患者，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组外周血Th17细胞亚群比例比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，观察组外周血Th17细胞亚群比例明显低于治疗前与对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：308 nm准分子激光对进展期白癜风患者的临床疗效较为显著；卡介苗多糖核酸通过提高机体免疫功能，从而改善白癜风患者的临床疗效，且药物安全性较高，值得临床推广应用。

【关键词】卡介苗多糖核酸； 308 nm准分子激光； 白癜风； 外周血Th17细胞亚群

①中信惠州医院 广东 惠州 516006

First author’s address：Zhongxin Huizhou Hospital，Huizhou 516006，China

白癜风是常见的皮肤性病科疾病，是一种获得性皮肤黏膜色素脱失性皮肤病，平均发生率约为1%~2%，其主要与自身免疫系统有关，且与性别、年龄无明显相关性，其中面颈部白癜风严重影响患者的形象与生活质量[1]。临床上尚缺乏对白癜风的特效治疗手段，导致大部分白癜风患者丧失治疗信心。大量文献证实，Th17细胞亚群参与白癜风发生与发展的过程，通过提高机体免疫力，降低Th17细胞亚群表达对白癜风的治疗具有重要的意义[2]。目前，关于卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光对白癜风患者外周血Th17细胞亚群的影响研究罕见，本文就这一问题展开研究，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料 选取2013年1月-2015年1月本院皮肤性病科白癜风患者192例作为研究对象，采用随机数字表法将其分为研究组与对照组。研究组96例，其中男46例，女50例；年龄1~60岁，平均（32.15±10.25）岁；病程1个月~20年，平均（4.25±1.02）年；疾病分型：局限型40例，散在型46例，泛发型10例；疾病分期：稳定期46例，进展期50例；皮损面积0.5 cm×3 cm~4 cm×13 cm，平均（18.54±5.12）cm2。对照组96例，其中男48例，女48例，年龄1~60岁，平均（32.09±10.33）岁；病程2个月~21年，平均（4.33±1.07）年；疾病分型：局限型38例，散在型46例，泛发型12例；疾病分期：稳定期50例，进展期46例；皮损面积0.5 cm×4 cm~4 cm×14 cm，平均（18.49±5.09）cm2；两组性别、年龄、病程、疾病分型、疾病分期及皮损面积等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2诊断、纳入及排除标准

1.2.1诊断标准 参照《白癜风临床分型及疗效标准》中关于白癜风的诊断标准：（1）后天发病，原因不明的色素脱失白斑，呈乳白色，形态大小各异；（2）白斑分布可局限于某部位或散在、泛发全身，并沿皮神经节支配区分布；（3）根据病情程度将其分为稳定期与进展期。原白斑范围未见扩大，未见新白斑皮损出现者为稳定期，白斑范围逐渐扩大，边界模糊，新白斑皮损出现者为进展期；（4）病程缓慢，无自觉临床症状。（5）排除其他病因造成的色素脱失或色素减退造成的白斑[3]。

1.2.2纳入标准 符合白癜风的诊断标准，皮损≥2处，受累面积<20%体表面积，对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2.3排除标准 合并自发色素再生史，合并严重心肺功能不全，严重肝肾功能衰竭，免疫功能低下，采用免疫抑制剂药物治疗，采用皮质类固醇激素治疗，合并糖尿病、高血压、慢性内科疾病，妊娠期与哺乳期妇女，对卡介苗多糖核酸、紫外线过敏，合并精神性疾病患者。

1.3方法

1.3.1治疗方法 对照组采用308 nm准分子激光皮肤光疗仪（美国XTRACAL7000公司）照射治疗，调节参数：工作气体为氯化氙，波长308 nm，光斑直径10/20/25 mm，单脉冲能量150 mJ/cm2，脉宽60 ns，频率200 Hz，再根据皮损反应适当调整照射剂量，治疗2次/周，1周为1个疗程，总疗程10周，共20次。研究组在对照组基础上采用卡介苗多糖核酸（商品名：治疗用卡介苗，生产企业：成都生物制品研究所有限责任公司，批准文号：国药准字S19983036，规格：1 mL/支）治疗，2 mL肌注，每2天1次，总疗程10周。

1.3.2检测方法 治疗前后采集新鲜抗凝外周血5 mL，采用2000 r/min密度梯度离心15 min，分离淋巴细胞，采用PBS缓冲液漂洗，采用含胎牛血清BPMI1640培养液重悬，滴加50 μg/L佛波酯、500μg/L离子霉素与0.67 mg/L莫能霉素于37 ℃孵育4 h，PBS缓冲液漂洗，滴加1 μg CD4-FITC抗体，4 ℃孵育0.5 h，PBS缓冲液漂洗，滴加250 μL破膜固定液，4 ℃孵育20 min，采用1 mL破膜液漂洗2次，分为3管，分别加入IL-17-PE 1 μg，室温避光孵育0.5 h，破膜液漂洗2次，采用流式细胞仪检测外周血Th17细胞亚群变化。

1.4观察指标 比较两组临床疗效及不良反应（疼痛性红斑、眼睑水肿、局部瘙痒等）发生情况，比较两组不同疾病分期临床疗效的差异，比较两组患者治疗前后外周血Th17细胞亚群的变化。

1.5疗效判定标准 参照中国中西医结合皮肤性病学会关于《白癜风临床疗效评定标准》评定白癜风的临床疗效，其中白斑彻底消退，100%皮损面积恢复正常肤色者评估为治愈；部分白斑消退，白斑范围逐渐缩小，50%~99%皮损面积恢复正常肤色者评定为显效；部分白斑消退，白斑范围逐渐缩小，10%~49%皮损面积恢复正常肤色者评定为有效；小部分白斑消退，白斑范围逐渐缩小，0~9%皮损面积恢复正常肤色，或白斑范围逐渐扩大者评定为无效，总有效率=治愈率+显效率+有效率。

1.6统计学处理 本研究数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料以（±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用Χ2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组临床疗效比较 治疗后，研究组治疗总有效率明显高于对照组，比较差异有统计学意义（ Χ2=9.26，P<0.05），见表1。

表1 两组临床疗效比较 例（%）

2.2两组不同疾病分期临床疗效比较 治疗10周时，研究组进展期患者治疗总有效率明显高于同组稳定期患者，比较差异有统计学意义（ Χ2=9.38，P<0.05）；对照组进展期患者治疗总有效率明显高于同组稳定期患者，比较差异有统计学意义（ Χ2=5.34，P<0.05），见表2。

表2 两组不同疾病分期临床疗效比较

2.3两组治疗前后外周血Th17细胞亚群比较 治疗前，两组外周血Th17细胞亚群比例比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，观察组外周血Th17细胞亚群比例明显低于治疗前及对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 两组治疗前后外周血Th17细胞亚群比较（±s） %

表3 两组治疗前后外周血Th17细胞亚群比较（±s） %

*与同组治疗前比较，t=40.24，P<0.05

组别　治疗前　治疗后研究组（n=96）　4.06±0.61　1.48±0.15*对照组（n=96）　3.98±0.62　3.85±0.49 t值　0.56　45.31 P值　>0.05　<0.05

2.4两组不良反应发生情况比较 两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（ Χ2=0.00，P>0.05），见表4。

表4 两组不良反应发生情况比较

3　讨论

白癜风是由于皮肤色素代谢障碍导致的疾病，该病治疗难度较大，治疗疗程较长。白癜风的发生机制与以下因素具有密切的关系：（1）自身免疫系统；（2）皮肤黏膜色素细胞脱失；（3）内分泌系统；（4）铜离子、酪氨酸相对缺乏；（5）遗传；（6）药物、精神刺激、手术刀伤、烫伤、砸伤、擦伤、碰撞等；（7）环境因素。白癜风治疗原则主要为促进皮损处色素沉着与白斑范围逐渐缩小，改善外观及皮肤对光照的耐受程度[4]。白癜风治疗主要采用局部整体相结合、中西医相结合的治疗方案，其中主要包括手术治疗与非手术治疗。白癜风的非手术治疗方案包括窄谱中波紫外线（NB-UVB）、比较光化学疗法（PUVA）及糖皮质激素治疗等[5]。308 nm准分子激光具有促进黑素细胞增殖、黏附与迁移的作用，可促进白癜风皮损边缘、毛囊处黑素细胞增殖，诱导黑素新生细胞迁移至白斑部位，促进皮损处色素沉着与白斑范围逐渐缩小，308 nm准分子激光照射疗法有助于抑制皮肤抗原提呈细胞，降低朗格汉斯细胞功能与数量，抑制免疫功能，促进角朊细胞合成白介素，增强网状内皮细胞及其补体的吞噬功能，调节机体免疫效应[6]。大量文献证实，308 nm准分子激光治疗白癜风患者的起效时间短、疗效佳、不良反应较低，可明显改善白癜风儿童与白癜风成人患者的病情活动程度，且治疗依从性高，可明显改善白癜风儿童与成人患者的生活质量[7]。卡介苗多糖核酸是卡介苗多糖核酸类提取物，其通过激活巨噬细胞，可增强T、B细胞介导的体液免疫与细胞免疫功能[8]。经临床研究与实验研究证实，卡介苗多糖核酸对Th17相关因子具有重要的调节作用[9]。Th17细胞亚群及其相关因子在介导免疫细胞因子释放，促进免疫性疾病中具有重要的意义[10]。但关于卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光对白癜风患者外周血Th17细胞亚群的影响研究尚少。

本研究结果显示，卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光结合治疗的总有效率由单纯308 nm准分子激光治疗的66.67%提高至85.42%，提示卡介苗多糖核酸在白癜风患者的治疗中具有重要的价值。卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光结合疗法或单纯308 nm准分子激光疗法对患者进展期治疗总有效率更高，提示308 nm准分子激光疗法对进展期白癜风患者的临床疗效更佳，可能由于：（1）308 nm准分子激光属于中波紫外线，可直接诱导与间接诱导T淋巴细胞的凋亡，且每周1次308 nm准分子激光照射治疗的效果较为理想；（2）进展期黑素细胞损伤尚未完全，且仍暴露部分的黑素细胞，而稳定期色素脱失完全，病程较长，其对308 nm准分子激光照射治疗敏感性均造成一定的负面影响[11-12]。卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光结合治疗，患者外周血Th17细胞亚群比例由单纯308 nm准分子激光治疗的（3.85±0.49）%降低至（1.48±0.15）%，揭示了卡介苗多糖核酸通过显著下调白癜风患者外周血Th17细胞亚群比例，从而发挥免疫调节的作用，间接反映了卡介苗多糖核酸通过改善机体免疫功能，从而达到治疗白癜风的目的[13]。最后，卡介苗多糖核酸与308 nm准分子激光结合治疗并不增加白癜风患者的不良反应发生风险，与相关研究报道结果一致[14-15]。

综上所述，308 nm准分子激光对进展期白癜风患者的临床疗效较为显著，其中卡介苗多糖核酸通过提高机体免疫功能，从而改善白癜风患者的临床疗效，且药物安全性较高，值得临床推广应用。

参考文献

[1]王素环，宋维芳，林炳基，等.自体表皮移植治疗白癜风120例临床观察及其影响因素分析[J].中国皮肤性病学杂志，2015，29（6）：591-592.

[2]盛国荣，谢勇，严霞，等.NB-UVB联合退白汤治疗寻常型白癜风的疗效及对Th17相关因子的调节作用[J].中国皮肤性病学杂志，2015，29（5）：517-520.

[3]朱龙飞，田军，坚哲，等.过表达NF-E2相关因子2对白癜风黑素细胞PIG3V线粒体生物合成和功能的影响[J].中华皮肤科杂志，2015，48（6）：373-377.

[4]刘涛.临床特征和皮肤CT特征判定白癜风分期[J].中华皮肤科杂志，2015，48（6）：404-407.

[5]孟丽亚，王逸飞，张春敏.CO2点阵激光联合308 nm准分子激光治疗稳定期白癜风的临床观察[J].中华皮肤科杂志，2014，47（12）：894-896.

[6]唐志铭，翟晓翔，荆梦晴.308 nm准分子激光联合他扎罗汀凝胶治疗斑块状银屑病的疗效观察[J].中华皮肤科杂志，2015，48（4）：233-236.

[7]葛一平.308 nm准分子激光治疗成人面部节段型白癜风的疗效[J].江苏医药，2015，41（8）：915-917.

[8]李建英，刘津民，曹海育，等.卡介菌多糖核酸对白癜风的免疫调节作用[J].中华临床医师杂志（电子版），2015，9 （12）：136-138.

[9]陆小娟，李其林.两种免疫调节剂对白癜风患者细胞免疫的影响及疗效[J].中华全科医师杂志，2014，13（8）：684-686.

[10]孙晓燕，牛妍艳，张美芳，等.白癜风患者外周血Th17/Treg细胞免疫失衡的检测[J].中国皮肤性病学杂志，2014，28 （7）：684-686.

[11]吴波，朱颜俊，瓦庆彪，等.308 nm准分子激光联合驱虫斑鸠菊注射液治疗白癜风60例临床观察[J].中国皮肤性病学杂志，2014，28（11）：1209-1210.

[12] Byun J W，Moon J H，Bang C Y，et al.Effectiveness of 308-nm excimer laser therapy in treating alopecia areata，determined by examining the treated sides of selected alopecic patches[J]. Dermatology，2015，231（1）：70-76.

[13]黄应波，唐雪梅，张宇，等.复方甘草酸苷对儿童过敏性紫癜Th17/Treg细胞免疫的影响[J].重庆医科大学学报，2014，39（7）：990-994.

[14] Zhan L，Xiong X，Wang L.Treatment of BCG polysaccharide nucleic acid combined with CO2laser reduces Th17 cells and their related cytokines in cutaneous lesion of vitiligo patients[J]. Journal of Cellular and Molecular Immunology，2014，30（12）：1300-1303.

[15]殷现鹏，韩冰，郭钰琪.卡介苗多糖核酸辅助治疗白癜风的疗效及对T淋巴细胞亚群的影响[J].济宁医学院学报，2010，33（3）：167-169.

*基金项目：惠州市科技计划项目（20140810）

通信作者：洪志林

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.10.004

收稿日期：（2015-10-09） （本文编辑：王利）

Effect of BCG-polysaccharide Nucleic Acid and 308 nm Excimer Laser on Peripheral Blood Th17 Cell Subsets of Vitiligo Patients/HONG Zhi-lin，KE Feng-lan.//Medical Innovation of China，2016，13（10）：011-014

【Abstract】Objective：To investigate the effect of BCG-polysaccharide nucleic acid and 308 nm excimer laser on peripheral blood Th17 cell subsets of vitiligo patients.Method：192 cases of vitiligo patients in STD Dermatology of our hospital from January 2013 to January 2015 were selected as the research objects.Using the random number table method，all patients were divided into study group and control group，with 96 cases in each group.The control group was treated with 308 nm excimer laser，the study group was treated with BCG nucleic acid on the basis of the control group.Peripheral blood Th17 cell subsets were detected by flow cytometry.The clinical curative effect and the incidence of adverse reactions were compared between the two groups.Result：After treatment，the total effective rate of the study group was significantly higher than that of the control group，the total effective rate of advanced stage was significantly higher than that of stable stage in the same group，the differences werestatistically significant（P<0.05）.Before treatment，the difference in peripheral blood Th17 cell subsets between the two groups was not statistically significant（P>0.05）.After treatment，the peripheral blood Th17 cell subsets of the observation group was significantly lower than pre-therapy and that of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.There was no statistically significant difference in the incidence rate of adverse reactions between the two groups（P>0.05）.Conclusion：308 nm excimer laser has more significant clinical curative effect for advanced vitiligo.BCG nucleic acid improves the clinical curative effect by improving the organism immune function for vitiligo，its drug safety is high，which is worthy of clinical application.

【Key words】BCG-polysaccharide nucleic acid； 308 nm excimer laser； Vitiligo； Peripheral blood Th17 cell subsets