十七味大活血胶囊的质量标准研究

韩晓珂　　梁朝锋　　祁　俊

安徽省芜湖市中医医院制剂室，安徽芜湖　241000

十七味大活血胶囊的质量标准研究

韩晓珂梁朝锋祁俊

安徽省芜湖市中医医院制剂室，安徽芜湖241000

目的建立十七味大活血胶囊的质量标准。方法显微法对延胡索进行鉴别；薄层色谱法对三七、大黄进行鉴别；HPLC法测定丹酚酸B、苦杏仁苷的含量。丹酚酸B色谱条件为：以C18为色谱柱，流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液（22∶78）；检测波长为286 nm；苦杏仁苷色谱条件为：以C18为色谱柱，流动相为甲醇-水（20∶80）；检测波长为210 nm。结果 显微鉴别粉末特征明显；薄层鉴别斑点清晰，阴性无干扰；丹酚酸B在17.23～172.3 μg/mL范围内线性关系良好（r=1），平均回收率为97.9%，RSD为1.1%；苦杏仁苷在11.04～110.38 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9998），平均回收率为100.1%，RSD为1.5%。三批样品中两种成分的平均含量分别为1.57、0.41 mg/粒。结论该法准确、简单，适用于十七味大活血胶囊的质量控制。

十七味大活血胶囊；显微鉴别；薄层色谱；丹酚酸B；苦杏仁苷

［Abstract］Objective To estab1ish the qua1ity contro1 of Shiqiweidahuoxue Capsu1es.Methods The microscopica1 identification was adopted to ana1yze rizoma coryda1is.TLC method was used to identity radix notoginseng and rhubarb.The contents of s1viano1ic acid B and amygda1in were determined by HPLC method.Sviano1ic acid B was separated on C18co1umn with acetonitri1e-0.1%formic acid so1ution（22∶78）as mobi1e phase，detection wave1ength was 286 nm.Amygda1in was separated on C18co1umn with methano1-water（20∶80）as mobi1e phase，detection wave1ength was 210 nm. Results Microscopic identification had powder characteristics of Rhizoma Coryda1is.The spots were c1ear without interference in the b1ank reference.The 1inear ranges of sa1viano1ic acid B and amygda1in were 17.23-172.3 μg/mL（r=1），and 11.04-110.38 μg/mL（r=0.9998）.The average recoveries of sa1viano1ic acid B and amygda1in were 97.9%（RSD= 1.1%），and 100.1% （RSD=1.5%）.Two average contents of 3 batches of samp1es were 1.57 mg/grain，0.41 mg/grain. Conclusion The method is accurate and simp1e，which can be used for the qua1ity contro1 of Shiqiweidahuoxue Capsu1es.

［Key words］Shiqiweidahuoxue Capsu1es；Microscopica1 identification；TLC；Sa1viano1ic acid B；Amygda1in

社会进步、交通发达、老龄化进程等因素使骨折的发生率逐年增加。骨折患者在早期常会发生肢体肿胀现象，使患肢无法得到充足的血液和营养供给［1］。如不及时处理，则引起组织康复时间延长、骨痂生长缓慢等情况［2］。

中医学认为骨伤初期及术后肿胀是由于外力损伤脉络，血溢脉外，滞留皮肉筋骨，使气机失调，津液输布受阻，水溢脉外，留滞在肌肤腠理之间，表现为肿胀［3］。在整个治疗过程中，中医治疗有明显的疗效，发挥着越来越大的作用［4-7］。

本方由丹参、茯苓、牡丹皮、当归、白茅根、赤芍、红花、川芎、黄柏、延胡索、薏苡仁、车前子、桃仁、大黄、土鳖虫、三七、陈皮组成，具有活血化瘀、消肿止痛作用，用于骨伤及手术后肢体肿胀、疼痛。为了控制本制剂的质量，对延胡索进行了显微鉴别，对延胡索、三七、大黄进行了薄层色谱鉴别，对丹酚酸B、苦杏仁苷含量进行了HPLC测定。建立了简便、有效的质量控制方法。

1　仪器与材料

高效液相色谱仪（Waters 2695，Agi1ent1200）；梅特勒XP-205电子天平；KQ-500DB型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；双目显微镜（XDS-300C，上海蔡康光学仪器有限公司）；丹酚酸B（111562-201212）；苦杏仁苷（110820-201305）；延胡索对照药材（120928-201208）；三七对照药材（120941-201108）；大黄对照药材（120902-201010）；硅胶G（H）板（青岛海洋化工厂分厂）；乙腈、甲醇（HPLC/Spectro，TEDIA Company）；水为超纯水（自制）；其他试剂均为分析纯。样品由芜湖市中医医院制剂室提供；对照品及对照药材均购自中国食品药品检定研究院。

2　方法与结果

2.1显微鉴别

延胡索显微特征：下皮后壁细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密。有螺纹导管［8］。见图1。

图1　十七味大活血胶囊中延胡索粉末显微图

2.2薄层色谱鉴别

2.2.1三七取本品内容物4 g，加水饱和的正丁醇40 mL，超声处理10 min，滤过，滤液加3倍量正丁醇饱和的水，摇匀，放置使分层，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5 g，加水5滴，搅匀，再加以水饱和的正丁醇5 mL，振摇10 min，放置2 h，离心，取上清液，加3倍量正丁醇饱和的水，同法制成对照药材溶液。吸取上述溶液各5 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水 （15∶4∶22∶10）10℃放置的下层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。见图2。

图2　三七薄层鉴别色谱图

2.2.2大黄 取本品内容物3 g，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，再加盐酸2 mL，置水浴加热回流30 min，立即冷却，加乙醚萃取两次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.3 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述对照药材溶液3 μL、供试品溶液5 μL，点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚 （60℃～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。见图3。

图3　大黄薄层鉴别色谱图

2.3丹酚酸B的HPLC法测定

2.3.1色谱条件 色谱柱：Agi1ent Zorbax SB-C18（4.6 mm× 150 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液（22∶78）；检测波长为286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。

2.3.2对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B适量，加甲醇制成每毫升含90 μg的溶液，即得。

2.3.3供试品溶液的制备 精密称定内容物约1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷称定重量，用75%甲醇补足重量，摇匀，滤过，即得。

2.3.4阴性溶液的制备 按照处方工艺，取除丹参外的其余饮片制成阴性制剂，按“2.3.3”项下方法制成阴性溶液。

2.3.5专属性试验取上述三种溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定［9-13］，结果阴性无相应的色谱峰。见图4。

图4 十七味大活血胶囊丹酚酸B的HPLC图谱

2.3.6方法学考察 丹酚酸B在17.23～172.3 μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为Y=12.902X-21.617，r2=1；取供试液，重复进样6次，RSD为0.22%，表明精密度良好；取供试液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，RSD为0.59%，表明供试液稳定性良好；取本品，按照“2.3.3”项下方法制备供试品，6份，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，结果丹酚酸B的平均含量为4.3785 mg/g，RSD为0.25%，表明重复性良好。

2.3.7加样回收率试验精密称取已测定含量的样品6份，置具塞锥形瓶中，精密加入丹酚酸B对照品溶液（精密称取丹酚酸B 17.18 mg，以95.4%计，置50 mL量瓶中，加75%甲醇溶解定容至刻度，摇匀，即得0.3278 mg/mL的对照品溶液）6.5 mL，按“2.3.3”项下方法操作，测定，结果平均回收率为97.9%，RSD为1.1%，加样回收率结果符合要求。见表1。

表1　丹酚酸B加样回收率试验结果

2.3.8样品测定 按“2.3.3”项下方法操作，测定样品中丹酚酸B的含量。结果见表3。

2.4苦杏仁苷的HPLC法测定

2.4.1色谱条件 色谱柱：Waters XBridge C18（4.6 mm× 150 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（20∶80）；检测波长为210 nm；柱温30℃。理论板数按苦杏仁苷峰计算应不低于3000［14-26］。

2.4.2对照品溶液的制备 精密称取苦杏仁苷适量，加甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，即得。

2.4.3供试品溶液的制备 取内容物约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷称定重量，用70%甲醇补足重量，摇匀，滤过，即得。

2.4.4阴性溶液的制备 按照处方工艺，取除桃仁外的其余饮片制成阴性制剂，按“2.4.3”项下方法制成阴性溶液。

2.4.5专属性试验 取上述三种溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，结果阴性无相应色谱峰。见图5。

图5　十七味大活血胶囊苦杏仁苷的HPLC图谱

2.4.6方法学考察苦杏仁苷在11.04～110.38 μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为Y=10 250X+1693，r2=0.9996；取供试液，重复进样6次，RSD为0.34%，表明精密度良好；取供试液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样一次，RSD为2.94%，表明稳定性良好；取本品，按“2.4.3”项下方法制备供试品6份，按“2.4.1”项下色谱条件测定，计算苦杏仁苷的平均含量为1.1532 mg/g，RSD为1.07%，表明重复性良好。

2.4.7加样回收率试验 精密称取已测定含量的样品6份，置具塞锥形瓶中，精密加入苦杏仁苷对照品溶液（浓度为0.5519 mg/mL）2 mL，按“2.4.3”项下方法操作，测定，结果平均回收率为100.1%，RSD为1.5%。加样回收率结果符合要求。见表2。

表2　苦杏仁苷加样回收率试验结果

2.4.8样品测定按“2.4.3”项下方法操作，测定样品中苦杏仁苷的含量。结果见表3。

表3　三批样品含量测定（mg/粒）

3　讨论

在薄层色谱方法摸索过程中，对陈皮、当归、川芎、牡丹皮、黄柏、赤芍进行了考察，结果样品斑点不清晰或者有干扰；在含量测定过程中，曾尝试对盐酸小檗碱进行测定，但阴性有干扰，故均未将其纳入质量标准正文中。

在测定丹酚酸B含量的过程中，对提取溶剂（甲醇、75%甲醇、乙醇）和提取方法（回流、超声）分别进行了考察，发现75%甲醇的提取率远高于甲醇和乙醇，提取方式对其影响不明显。考虑到超声法的简便性和能源保护，选用超声法提取。

在测定苦杏仁苷含量的过程中，使用丹酚酸B的样品进样其峰响应值不够，故两种含量提取方法未能统一。在以后的研究中，可以找到两个指标性成分的最佳提取点，使用同一个样品进行测定，以此更加简便地控制制剂的质量。

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Quality control of Shiqiweidahuoxue Capsules

HAN XiaokeLIANG ChaofengQI Jun
Preparation Room，Wuhu Hospita1 of TCM，Anhui Province，Wuhu241000，China

R927.2

A

1673-7210（2016）04（c）-0147-05

韩晓珂（1981-），女，硕士，主要从事中药制剂的开发研究。

2016-01-04本文编辑：赵鲁枫）