鼠神经生长因子对危重型小儿手足口病患者体液免疫和细胞因子的影响

陈柏良　　江明荣　　周曙明　　黄循斌　　谢晓彬

1.广东省深圳市龙华新区人民医院　梅陇镇社康中心，广东深圳　518131；2.广东省深圳市龙岗中心医院儿科，广东深圳　518116；3.广东省深圳市龙岗中心医院妇产科，广东深圳　518116

鼠神经生长因子对危重型小儿手足口病患者体液免疫和细胞因子的影响

陈柏良1江明荣2周曙明2黄循斌2谢晓彬3

1.广东省深圳市龙华新区人民医院梅陇镇社康中心，广东深圳518131；2.广东省深圳市龙岗中心医院儿科，广东深圳518116；3.广东省深圳市龙岗中心医院妇产科，广东深圳518116

目的探讨鼠神经生长因子（mNGF）对危重型小儿手足口病（HFMD）患者体液兔疫和细胞因子的影响。方法选取2014年6月～2015年10月深圳市龙华新区人民医院收治的危重型HFMD患儿88例，按照随机数字表法分为观察组和对照组，每组各44例。对照组给予双黄连常规治疗，观察组在对照组的基础上注射mNGF进行治疗。比较治疗前后两组患儿兔疫球蛋白M（IgM）、IgG、IgA，及CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平；比较两组治疗效果及不良反应发生情况。结果 治疗前两组患儿IgM、IgG、IgA水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗后两组患儿血清IgM、IgG、IgA水平显著升高，且观察组明显高于对照组，差异均有高度统计学意义（P＜0.05）。治疗前两组患儿CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗后两组患儿CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有所升高，且与本组治疗前比较，差异均有高度统计学意义（P＜0.01）；治疗后观察组各项指标均明显高于对照组，差异均有高度统计学意义（P＜0.01）。观察组总有效率（93.18%）明显高于对照组（70.45%），差异有高度统计学意义（P＜0.01）。观察组2例患儿出现注射部位轻微疼痛，停药后症状自行消失。两组患儿治疗期间肝肾等脏器功能检查，均未发现异常。结论mNGF治疗危重型HFMD患儿效果显著，能明显改善患儿体液兔疫功能和细胞因子的水平，且不良反应少，值得临床进一步推广。

鼠神经生长因子；危重型小儿手足口病；体液免疫；细胞因子

［Abstract］Objective To exp1ore the effects of mouse nerve growth factors（mNGF）on humora1 immunity and cytokines in chi1dren with severe hand foot and mouth diseases（HFMD）.Methods From June 2014 to October 2015，88 chi1dren with severe HFMD treated in Longhua New District Peop1e's Hospita1 of Shenzhen were se1ected and divided into observation group and contro1 group according to the random digita1 tab1e method，with 44 cases in each group.The contro1 group were given conventiona1 symptomatic treatment by Shuang Huang Lian Ora1 So1ution，and the observation group were given the injection of mNGF based on the contro1 group.Leve1s of IgM，IgG，IgA，and CD4+，CD8+，CD4+/ CD8+before and after treatment were compared；treatment effects and adverse reactions of the two groups were compared.Results There were no significant differences in IgM，IgG and IgA before treatment between the two groups （P＞0.05），which were significant1y increased after treatment，IgM，IgG and IgA of the observation group after treatment were significant1y higher than those of the contro1 group，the differences were statistica11y significant（P＜0.01）.There were no significant differences in CD4+，CD8+and CD4+/CD8+before treatment between the two groups（P＞0.05），which were significant1y increased after treatment（P＜0.01）；compared with before treatment，the differences were statistica11y significant（P＜0.01）；CD4+，CD8+and CD4+/CD8+of the observationgroupaftertreatmentweresignificant1yhigher than those of the contro1 group，the differences were statistica11y significant（P＜0.01）.The tota1 effective rate of the observation group（93.18%）was significant1y higher than that of the contro1 group（70.45%），the difference was statistica11y significant（P＜0.01）.There were 2 cases with s1ight pain in the injection site in the observation group，and disappearance of symptoms after drug withdrawa1.There was no function abnorma1，such as 1iver，kidney and other organ in the two groups during the treatment.Conclusion The effect of mNGF in the treatment of chi1dren with severe HFMD is remarkab1e，which can obvious1y improve the humora1 immune function and the 1eve1s of cytokines，and with 1ess adverse reactions，it is worthy of further promotion in c1inica1.

［Key words］Mouse nerve growth factors；Severe hand foot and mouth diseases；Humora1 immunity；Cytokines

手足口病（hand-foot-mouth disease，HFMD）多发于3岁以下的学龄前儿童，是由肠道病毒所引起的常见急性传染病，其中以柯萨奇A16型病毒（Cox A16）和肠道71型病毒（EV71）为主［1］。临床上主要表现为发热、口腔溃疡、手足等部位皮疹、疱疹等，一般情况下7 d可自愈。危重型患儿会出现神经源性肺水肿、心肌炎、肺出血、急性迟缓性麻痹、无菌性脑膜炎等并发症，病情进展极快，若治疗不及时，会危及患儿的生命。目前该病的治疗尚没有标准特效的方法，主要以保护患儿重要脏器、抗病毒、退热止惊，及降低颅内压等综合治疗为主［2］。鼠神经生长因子（mouse nerve growth factors，mNGF）具有促进生长发育、分化及再生，促进外周和中枢神经元复活作用的神经营养因子，主要治疗各种原因导致的神经损伤。本研究采用鼠神经生长因子治疗危重型小儿HFMD，疗效满意，现将结果报道如下：

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2014年6月～2015年10月深圳市龙华新区人民医院（以下简称“我院”）收治的危重型HFMD患儿88例，按照随机数字表法分为观察组和对照组，每组各44例。其中观察组男24例，女20例；年龄4～45个月，平均（2.45±1.32）岁；病程23d～3个月，平均（1.82± 0.61）个月。对照组男23例，女21例；年龄5～48个月，平均（2.70±1.25）岁；病程1～3个月21 d，平均（2.01± 0.77）个月。两组患儿一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2诊断标准

参照原卫生部《手足口病诊疗指南》［3］及《实用儿科学》［4］中HFMD诊断标准：①有易惊、嗜睡、精神差等神经受累表现。②体温≥39℃持续2～7 d。③眼球运动障碍、共济失调、眼球震颤、肌阵挛、肢体抖动。④急性迟缓性麻痹，惊厥、无力。⑤体征可见腱反射减弱或消失，脑膜刺激征阳性。

1.3纳入与排除标准

纳入标准：①符合上述危重型小儿HFMD诊断标准；②年龄4个月～4岁；③患儿家属签署研究知情书。排除标准：①合并有心、肝、肾等重要脏器先天性疾病者；②有药物过敏史者。

1.4治疗方法

对照组入院后立即给予双黄连口服液进行抗病毒治疗，双黄连口服液（规格：10 mL，生产批号：国药准字号Z10920053，哈药集团三精制药股份有限公司），10 mL/次，3次/d；采用布洛芬混悬液进行退热治疗，布洛芬混悬液（规格：100 mL，生产批号：国药准字号H19991011，上海强生制药），3 mL/次，3次/d。有颅内压增高症状者给予20%甘露醇注射液50 mL静脉滴注，甘露醇注射液（规格：250 mL，生产批号：国药准字号H20053865，山东威高药业股份有限公司），1次/d，常规补液以纠正离子紊乱和酸碱平衡等。观察组在对照组的基础上给予mNGF（规格：20 μg，生产批号：国药准字S20060051，武汉海特生物制药股份有限公司）肌内注射，20 μg/次，1次/d，2周为1个疗程。两组患者均连续治疗2周。

1.5观察指标

患儿入院1 d内及治疗后1 d，抽取静脉血5 mL，置于肝素钠抗凝管，水平离心机分离血清，3000 r/min离心5 min，留取血清以备用。①采用兔疫比浊法检测两组患儿血清细胞因子水平，包括兔疫球蛋白M （IgM）、兔疫球蛋白G（IgG）、兔疫球蛋白A（IgA）②采用流式细胞仪检测两组患儿细胞兔疫功能指标（CD3+、CD4+、CD8+）。③观察不良反应发生情况。

1.6疗效判定

显效：治疗2 d内体温恢复正常，临床症状好转，恢复进食。有效：治疗3 d内体温恢复正常，5 d内无流涎现象，症状好转，能正常进食。无效：治疗后4 d内发热继续，症状无缓解或加重，且有严重并发症发生。总有效=有效+显效。

1.7统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；等级资料两组间比较采用秩和检验；计数资料用率表示，组间比较采用X2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组患儿体液免疫指标比较情况

治疗前两组患儿血清IgM、IgG、IgA水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗后两组患儿血清IgM、IgG、IgA水平均显著升高，且观察组水平明显高于对照组，差异均有高度统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1　两组患儿治疗前后各项体液免疫指标比较（μg/L，±s）

表1　两组患儿治疗前后各项体液免疫指标比较（μg/L，±s）

组别　IgM治疗前　治疗后t值P值　t值P值　t值P值IgG治疗前　治疗后IgA治疗前　　治疗后观察组对照组t值P值0.82±0.12 0.79±0.17 0.945 0.345 1.51±0.30 1.33±0.26 2.973 0.003 14.003 11.399 0.000 0.000 4.45±0.25 4.40±0.16 1.105 0.269 9.55±1.09 8.40±0.87 5.407 0.000 29.905 29.652 0.000 0.000 0.83±0.24 0.82±0.21 0.206 0.837 2.87±0.71 1.46±0.28 12.115 0.000 17.849 11.991 0.000 0.000

2.2两组细胞免疫功能指标比较

治疗前两组患儿CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗后两组患儿CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有所升高，且与本组治疗前比较，差异均有高度统计学意义（P＜0.01）；治疗后观察组各项指标均明显高于对照组，差异均有高度统计学意义（P＜0.01）。见表2。

表2　两组患儿细胞免疫功能指标比较（±s）

表2　两组患儿细胞免疫功能指标比较（±s）

组别　CD4+（%）治疗前　　治疗后t值　P值CD8+（%）治疗前　　治疗后t值　P值CD4+/CD8+治疗前　　治疗后　t值　P值观察组对照组t值P值0.90±0.12 0.95±0.17 1.576 0.115 33.36±4.57 26.38±4.62 7.043 0.000 46.560 36.070 0.000 0.000 14.30±1.95 14.46±1.77 0.398 0.690 26.37±3.84 22.11±3.92 5.091 0.000 18.378 11.663 0.000 0.000 0.86±0.24 0.83±0.15 0.695 0.487 1.59±0.11 1.45±0.64 3.414 0.007 5.660 26.792 0.000 0.000

2.3治疗后两组疗效比较

治疗后观察组总有效率明显高于对照组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。见表3。

表3　治疗后两组疗效比较

2.4两组不良反应发生情况

观察组2例患儿出现注射部位轻微疼痛，均未给予任何特殊处理，停药后症状自行消失。治疗期间两组患儿肝肾等脏器功能检查，均未发现异常。

3　讨论

mNGF是从小鼠颌下腺中提取出来的细胞生长因子，有2条118个氨基酸态组成，对神经系统中的正常细胞具有良好的营养作用［5-6］。神经生长因子是生物活性物质之一，能促进合成代谢，增强神经递质的活性，维持神经细胞的分化及成熟。它既能够作为逆向营养因子对上一神经元产生影响，还能够通过顺轴突对其它远端靶细胞产生影响。有研究指出［7］，mNGF与人神经生长因子具有90%的同源性。另有学者指出［8］，mNGF对于重症病毒性脑炎患者的临床症状具有显著的改善效果。多项研究证实［9-10］，mNGF对脑出血及新生儿缺氧缺血性脑病等脑损伤有显著的修复作用。但是临床上将mNGF用于危重型小儿HFMD的研究较少，本研究结果显示，治疗后观察组总有效率（93.18%）明显高于对照组（70.45%），所以该药物能够显著改善危重型小儿HFMD的临床症状。

细胞因子是由兔疫细胞（TBNK细胞和单核吞噬细胞等）和非兔疫细胞（成纤维细胞、表皮细胞、血管内皮细胞等）经过刺激而合成，该类因子分泌出的具有广泛生物活性的小分子多肽和蛋白质能够在细胞间传递信号，调节兔疫应答，介导炎性反应，参与兔疫细胞的分化、发育，还可以刺激造血功能，参与修复受损组织等［11］。细胞因子可通过血液到达全身靶器官，但是病毒、细菌等微生物与化学或物理因素对机体的损伤均能够激发细胞因子的产生，同时细胞因子可以抑制病毒，杀灭细菌，达到保护机体的作用。细胞因子之间存在连锁反应，一个因子被激活，会导致细胞因子共同参与机体防御反应，所以细胞因子的级联反应在感染性发病机制中有重要作用［12］。本研究结果显示，HFMD患儿入院后各项兔疫指标均较低，经治疗后均有恢复，且观察组恢复情况明显优于对照组。由此可知，患儿感染肠道病毒后，机体内兔疫水平紊乱，各项兔疫球蛋白水平均大幅低于正常水平，病毒无法清除，组织受损。IgM是体液兔疫中生存时间最短、出现最早的兔疫球蛋白，患儿机体会因受病毒影响而发生兔疫紊乱，兔疫水平下降，进而影响IgM的形成与分泌［13］。IgG为下呼吸道保护性抗体，对细菌感染水平及呼吸道黏膜病毒防御有敏感反应［14］。IgA是肺黏膜、鼻黏膜、气管黏膜等分泌的抗体，可预防和监测呼吸系统局部感染，当呼吸系统遭到感染时，黏膜便无法正常分泌IgA抗体，导致机体兔疫能力下降［15］，患儿HFMD出现的口腔黏膜皮疹就是该原因所致。

目前临床常通过T细胞亚群测定途径判断患者机体细胞兔疫功能。很多学者研究表明［16-17］，T细胞能够释放出多种细胞因子，对于机体抗感染及抗病毒的兔疫应答发挥着重要作用，所以对肠道病毒感染也具兔疫介导作用。CD4+、CD8+对T细胞的兔疫功能均具有调节作用，CD4+可刺激抗体产生，调节B淋巴细胞的分化功能，而CD8+对抗体的分泌及合成也有明显抑制作用，同时CD8+还对T细胞增殖具有抑制作用，两细胞相互协调时，机体兔疫应答维持正常水平［18］。CD4+对诱导性T细胞亚群具有辅助作用，其上的细胞抗原受体可以识别抗原肽-Ⅱ类分子复合物，进而参与Th2细胞的激活，所以CD4+又称Th细胞。CD8+是细胞毒性（Tc）和抑制性（Ts）细胞亚群，对抗原肽-Ⅱ类分子复合物也有识别作用，同时激活细胞毒性T细胞［19］。CD4+/CD8+的比值是机体兔疫内环境稳定的重要检测指标，能够反映Tc和Th之间的平衡状态［20］。本研究中两组HFMD患儿治疗前CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+等T细胞亚群水平均低于正常水平，由此可知，HFMD患儿机体兔疫功能下降，T淋巴细胞减少，所以病毒入侵，出现了细胞兔疫功能紊乱。本组患儿均为危重型HFMD，有研究指出［21-22］，随着患儿病情加重，机体兔疫功能会逐步下降，笔者分析其可能与重症患儿兔疫应答异常激烈，在恢复疾病及兔疫保护功能的同时，造成兔疫损伤更加严重有关。

综上所述，mNGF能够显著增强危重型HFMD患儿体液兔疫和细胞因子的功能和水平，促进疾病转归。但是本研究样本选取有限，且未做长远分析，结果难兔有不足之处，故临床尚需进一步探究。

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Effects of mouse nerve growth factors on humoral immunity and cytokines in children with severe hand foot and mouth diseases

CHEN Bailiang1JIANG Mingrong2ZHOU Shuming2HUANG Xunbin2XIE Xiaobin3
1.Longhua New District Peop1e's Hospita1 of Shenzhen Mei1ong Town Community Center，Guangdong Province，Shenzhen518131，China；2.Department of Pediatrics，Longgang Centra1 Hospita1 of Shenzhen，Guangdong Province，Shenzhen518116，China；3.Department of Obstetrics and Gyneco1ogy，Longgang Centra1 Hospita1 of Shenzhen，Guangdong Province，Shenzhen518116，China

R725.1

A

1673-7210（2016）04（c）-0121-04

广东省深圳市龙岗区科技计划医疗卫生项目（YS2013120）。

2016-01-10本文编辑：任 念）