浅析关于三种中药制剂微生物限度检查方法学验证

孟晓丹



浅析关于三种中药制剂微生物限度检查方法学验证

孟晓丹

【摘要】目的 探讨三种中药制剂微生物限度检查方法学验证的结果。方法 按《中国药典》中微生物限度检查方法对肾炎清片、济生肾气胶囊、健肾颗粒进行微生物限度检查。结果 研究显示被检培养基上的菌落平均数大于对照培养基上的菌落平均数70%，且菌落形态大小与对照培养基上菌落一致，说明该培养基的适用性检查符合规定。结论 微生物限度检查方法检测三种中药制剂（肾炎清片、济生肾气胶囊、健肾颗粒）中，准确可行，操作简单。

【关键词】中药制剂；微生物限度；检查方法学；验证

中药制剂微生物限度检查是控制我国中药药品质量的重要方法和指标之一［1-3］。本文参照2010年《中国药典》关于微生物限度检查方法，对三种治疗肾病的中药制剂进行方法学验证，从而为中药制剂微生物限度检查提供理论依据。

1 实验材料和仪器

1.1 实验仪器

BLYSC-DA-008净化工作台、隔水式电热恒温培养箱、电子分析天平、霉菌培养箱、电热鼓风干燥箱、紫外分析仪。

1.2 培养基

营养琼脂培养基、玫瑰红钠脂培养基、胆盐乳酸培养基、马丁培养基、pH 7.0氯化钠蛋白胨缓冲液等。

1.3 菌种

金黄色葡萄球菌；白色念珠菌/大肠埃希菌/枯草芽孢杆菌/黑曲霉菌。

1.4 中药制剂样品

肾炎清片、济生肾气胶囊、健肾颗粒。

2 方法与结果

2.1 制备供试品溶液

取出样品，各为10 g，放置于灭菌锥形瓶内，加入缓冲液到100 ml，搅拌均匀，比例为1：10，备用。

2.2 制备对照品溶液

把金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌的培养物进行接种，加入营养肉汤培养基，放在温度为35℃的环境下进行培养，时间为18～24 h，取其培养物，使用0.9%无菌生理盐水制备菌液（50～100 cfu/ml），备用。然后把白色念珠菌的培养物进行接种，加入改良马丁培养基中，放在温度为25℃的环境下进行培养，时间为24～48 h，取其培养物，使用0.9%无菌生理盐水制备菌液（50～100 cfu/ml），备用。最后，把黑曲霉的培养物进行接种，加入改良马丁琼脂培养基，放在温度为25℃的环境下进行培养，时间为7 d，取其培养物，使用0.9%无菌生理盐水5 ml，洗脱，吸出孢子悬液，放在无菌试管中，再使用0.9%无菌生理盐水制备菌液（50～100 cfu/ml）备用。

2.3 培养基适用性检查

取出各种菌体，量各为50～100 cfu，注入无菌容器中，倒入营养琼脂培养基，对每株实验菌进行平行制备，各为2个平皿，按照规定的时间和温度进行操作和计数。使用相应对照培养基取代被检测对象进行以上实验，见表1。

表1 计数培养基适用性检查结果

被检培养基上的菌落平均数大于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，说明该培养基的适用性检查符合规定。

2.4 菌落计数方法验证

中药制剂样品组：取出三种中药制剂的供试品溶液1 ml注入10个平皿里面，加入5中菌体的菌液1 ml，平均每株菌制备2个平皿，倒入温度在45℃以下的营养琼脂培养基，放在20～35℃的环境中进行细菌培养48 h，放在23～28℃的环境中进行细菌培养72 h。菌液组：取出5中菌液1 ml，放进平皿中，平行制备2个平皿，检测加入的试验菌数。稀释对照组：取出缓冲液替代供试品溶液1 ml，按照上述操作步骤进行操作，见表2。

表2 中药制剂菌体回收率测定（%）

2.5 控制菌检查方法验证

2.5.1 菌液制备取出大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌培养物少许，进行接种，加入营养肉羊培养基，放在35℃环境下进行培养，24 h后使用0.9%无菌生理盐水制备菌液（10～100 cfu/ml）。

2.5.2 控制菌检查的适用性（1）促生长能力检查，被检培养基的菌体生长情况优于对照组培养基。（2）抑制能力检查，实验菌体没有生长。（3）指示能力检查，被检培养基菌体生长情况、指示剂反应和对照组培养基一致。

3 讨论

中药制剂含有中药材种类较多，有的中药成分会对微生物限度检测准确度产生一定影响［4］。不同中药制剂由于含有抑菌成分的抑菌能力不同，因此其对微生物限度检查的准确度的影响也有所不同，应当根据抑菌成分的抑菌特性来选择合适的方法减少抑菌成分的数量或者浓度，从而提高微生物限度检查的准确度［4-6］。

本试验采用2010年版《中国药典》的微生物限度检查方法对三种中药制剂（肾炎清片、济生肾气胶囊、健肾颗粒）进行微生物限度检查［7］，研究显示被检培养基上的菌落平均数大于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，说明该培养基的适用性检查符合规定。

综上所述，2010年版《中国药典》的微生物限度检查方法在检测三种中药制剂中，准确可行，操作简单。

参考文献

［1］ 莫小林，伍小燕，韦振源，等. 10种中药制剂微生物限度检查方法学的验证［J］. 中国实验方剂学杂志，2012，18（13）：56-59.

［2］ 刘雅琴. 5种中药制剂微生物限度检查方法验证［J］. 天津药学，2010，22（4）：6-8.

［3］ 王慧敏. 4种中药制剂微生物限度检查方法验证探讨［J］. 临床合理用药杂志，2012，5（23）：87.

［4］ 李晓东，李娟，郭朝晖，等. 几种医院外用中药制剂微生物限度检查方法的建立［J］. 西部中医药，2012，25（2）：25-27.

［5］ 冒兴建，闫玉梅，秦建. 中药口服制剂微生物限度检查不合格的原因及解决办法［J］. 中国现代药物应用，2011，5（19）：130-131.

［6］ 闵红，唐娜，尹良君. 2种中药制剂微生物限度与控制菌方法验证［J］. 西北药学杂志，2013，28（3）：301-303.

［7］ 黄玉兰，李镇涛，吕谦. 中药制剂微生物污染的因素及对策［J］. 药物评价研究，2011，34（3）：204-207.

【中图分类号】R927

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9308（2016）15-0179-02

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.15.119

作者单位：河南省洛阳市第三人民医院药剂科，河南 洛阳 471002

Analyses on Three Kinds of Microbial Limit Examination of TCM Methodology Validation

MENG Xiaodan
Department of Pharmacy， The Third People's Hospital of Luoyang， Luoyang He'nan 471002， China

［Abstract］Objective To investigate the effects of three kinds of microbial limit examination of TCM and the results of the methodology. Methods According to "Chinese pharmacopoeia" in the method of microorganism limit inspection of nephritis tablet， Jisheng Shenqi capsule， the healthy kidney particles for microbial limit examination. Results Studies have shown that the colony average of test medium to average 70% greater than that of contrast medium colonies， and size of colony morphology and contrast medium colonies， check that the applicability of the medium within the rules. Conclusion The method of microbial limit examination test three kinds of traditional Chinese medicine preparation （nephritis tablet， dhi kidney capsule， the healthy kidney particles）， accurate and feasible， simple operation.

［Key words］Chinese native medicine preparation， Microbial limit， Check the methodology， Validation