90例寻常型儿童白癜风患者免疫相关指标检测分析

杨荣明，刘立湘，钟以文，张灵秀，田丽娟，罗 丹，宋培源

(1.上犹县妇幼保健院a.皮肤科； b.内儿科； c.检验科； d.妇产科，江西 上犹 341200； 2.南昌大学基础医学院实验中心，南昌 330046)



90例寻常型儿童白癜风患者免疫相关指标检测分析

杨荣明1a，刘立湘1b，钟以文1c，张灵秀1d，田丽娟1c，罗 丹2，宋培源2

(1.上犹县妇幼保健院a.皮肤科； b.内儿科； c.检验科； d.妇产科，江西 上犹 341200； 2.南昌大学基础医学院实验中心，南昌 330046)

目的 了解寻常型儿童白癜风患者不同分期、不同病程及不同皮损面积的免疫功能状态。方法 对90例寻常型儿童白癜风患者(进展期组52例、稳定期38例)，分别采用流式细胞仪对外周血CD3+、CD4+和CD8+细胞进行定量分析，免疫透射比浊法检测血清IgG、IgA、IgM和补体C3、C4，双抗体夹心ELISA法检测血浆IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平，同时以30例健康儿童(正常对照组)作对照。结果 进展期组外周血CD3+细胞、CD4+细胞及CD4+/CD8+比值低于正常对照组，CD8+细胞高于正常对照组(均P<0.01)。进展期组IgG、IgM较正常对照组明显增加，C3、C4明显减少(P<0.01)；寻常型儿童白癜风患者皮损面积越大，IgG、IgA、IgM升高越明显，C3、C4水平降低越明显(P<0.01)。进展期组血清IL-2水平低于正常对照组，IL-6、IL-8、IL-18高于正常对照组(均P<0.01)，稳定期组血清IL-6与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)；病程在1年以内与1年以上的患者外周血T淋巴细胞亚群和血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平相比差异无统计学意义(P>0.05)；血清IL-2水平随皮损面积增加而降低，IL-6、IL-8、IL-18水平随皮损面积增加而升高(P<0.05或P<0.01)。结论 寻常型儿童白癜风患者存在细胞免疫缺陷，体液免疫功能亢进，自身免疫和细胞因子共同参与了寻常型儿童白癜风的发生和进展。

儿童白癜风； 寻常型； T细胞亚群； 免疫球蛋白； 补体； 细胞因子

白癜风(vitiligo)是一种常见的色素脱失性皮肤黏膜疾病，临床易诊难治，其病因和发病机制目前尚不十分清楚。近年来，儿童白癜风的发病呈上升趋势，但其与免疫机制的关系不明。为了解不同分期、不同病程及不同皮损面积寻常型儿童白癜风患者的免疫功能状态，本研究对90例寻常型儿童白癜风患者外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白、补体及相关细胞因子进行检测，并与30例健康儿童作对照，结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2013年6月至2015年7月上犹县妇幼保健院门诊确诊的寻常型儿童白癜风患者90例，其中男57例，女33例，年龄5～15岁，平均9.9岁；病程2个月～8年，平均1.82年。入选患者均除外其他自身免疫性疾病，肝肾功能正常，且检测前1个月内未接受任何治疗。另选取同期在本院体检的健康儿童30例作为正常对照组，其中男16例，女14例，年龄6～15岁，平均10.6岁。2组在性别及年龄组成上差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例分组

90例患者参照《白癜风临床分型及疗效标准》[1]，分为进展期组(52例)和稳定期组(38例)。按患者每一手掌面积占体表面积1%计算，分为<1%(52例)、1%～5%(30例)、>5%(8例)3组。病程以1年为界分为病程≤1年(58例)和病程>1年(32例)2组。

1.3 标本采集

所有研究对象均于清晨空腹抽取外周静脉血3 mL，3500 r·min-1离心1 min，收集上清液，置-80 ℃保存，24 h内送南昌华星医学检验中心检测。

1.4 外周血T淋巴细胞亚群检测

采用美国BDFACSCAL流式细胞仪对外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞进行定量分析。

1.5 血清免疫球蛋白以及补体的测定

采用免疫透射比浊法测定血清IgG、IgA、IgM以及补体C3、C4，仪器为美国贝克曼IMMAGE800全自动生化分析仪，试剂盒由南昌普健公司提供。操作按说明书进行。

1.6 血清相关细胞因子的测定

采用双抗体夹心ELISA法测定血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18，试剂盒由北京邦定生物技术有限公司提供，操作按说明书进行。

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 不同分期寻常型儿童白癜风患者与正常对照组外周血T淋巴细胞亚群表达比较

进展期组外周血CD3+细胞、CD4+细胞及CD4+/CD8+比值低于正常对照组，CD8+细胞高于正常对照组(均P<0.01)；稳定期组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

组别nCD3+/%CD4+/%CD8+/%CD4+/CD8+正常对照组3068.28±1.4239.05±1.0225.57±0.491.53±0.068进展期组5263.26±1.82*35.84±0.87*28.34±0.99*1.26±0.038*稳定期组3867.58±1.5038.47±1.6425.71±0.831.50±0.062

*P<0.01与正常对照组比较。

2.2 不同病程寻常型儿童白癜风患者外周血T淋巴细胞亚群表达比较

病程在1年以内与1年以上的儿童白癜风患者外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞以及CD4+/CD8+比值比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

病程nCD3+/%CD4+/%CD8+/%CD4+/CD8+病程≤1年5865.25±2.6536.99±1.7427.00±1.521.37±0.120病程>1年3264.79±2.8736.89±1.9527.65±1.671.34±0.135

2.3 不同分期寻常型儿童白癜风患者与正常对照组外周血免疫球蛋白及补体水平比较

进展期组IgG、IgM较正常对照组明显增加，补体C3、C4明显减少(P<0.01)，稳定期组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，进展期组和稳定期组IgA与正常对照组比较均差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 不同分期儿童白癜风患者与正常对照组外周血免疫球蛋白及补体水平比较

组别nIgGIgAIgMC3C4正常对照组3010.37±1.611.52±0.451.24±0.231.13±0.150.31±0.024进展期组5215.59±1.79*1.68±0.201.92±0.23*0.79±0.18*0.28±0.040*稳定期组3811.13±1.851.64±0.291.34±0.191.08±0.150.30±0.026

*P<0.01与正常对照组比较。

2.4 不同皮损面积寻常型儿童白癜风患者外周血免疫球蛋白及补体水平比较

儿童白癜风患者外周血IgG、IgA、IgM水平随皮损面积增加而增高，补体C3、C4水平随皮损面积增加而下降。各检测指标在3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)，见表4。

表4 不同皮损面积儿童白癜风患者外周血免疫球蛋白补体水平比较

皮损面积nIgGIgAIgMC3C4<1%5211.83±2.011.55±0.211.45±0.251.07±0.1420.31±0.0191%^5%3015.87±1.25*1.75±0.161.92±0.18*0.74±0.102*0.26±0.020*>5%817.83±1.55*#2.03±0.15*#2.24±0.24*#0.58±0.086*#0.22±0.015*#

*P<0.01与<1%比较，#P<0.01与1%～5%比较。

2.5 不同分期寻常型儿童白癜风患者与正常对照组血清相关细胞因子水平比较

进展期组血清IL-2水平低于正常对照组，血清IL-6、IL-8、IL-18水平高于正常对照组(均P<0.01)；稳定期组血清IL-6与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，其他指标间比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表5。

组别nIL-2ρ/(μg·L-1)IL-6ρ/(μg·L-1)IL-8ρ/(pg·L-1)IL-18ρ/(μg·L-1)正常对照组304.14±0.5097.78±5.230.302±0.0190.26±0.035进展期租521.75±0.33*146.69±17.60*0.545±0.085*0.39±0.057*稳定期组384.04±0.84103.84±7.80*0.310±0.0160.28±0.032

*P<0.01与正常对照组比较。

2.6 不同病程寻常型儿童白癜风患者血清相关细胞因子水平比较

病程在1年以内与1年以上的儿童白癜风患者血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平相比差异无统计学意义(P>0.05)，见表6。

病程nIL-2ρ/(μg·L-1)IL-6ρ/(μg·L-1)IL-8ρ/(pg·L-1)IL-18ρ/(μg·L-1)病程≤1年582.89±1.32125.97±25.760.433±0.1360.34±0.078病程>1年322.40±1.18133.36±25.030.471±0.1270.35±0.067

2.7 不同皮损面积寻常型儿童白癜风患者血清相关细胞因子水平

血清IL-2水平随皮损面积增加而降低，IL-6、IL-8、IL-18水平随皮损面积增加而升高，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，见表7。

皮损面积nIL-2ρ/(μg·L-1)IL-6ρ/(μg·L-1)IL-8ρ/(pg·L-1)IL-18ρ/(μg·L-1)<1%523.42±1.21111.44±15.320.360±0.0800.29±0.0411%^5%301.82±0.55*149.25±15.21*0.556±0.095*0.41±0.039*>5%81.56±0.62*162.63±18.18*#0.598±0.104*0.45±0.051*##

*P<0.01与<1%比较，#P<0.05与1%～5%比较，##P<0.01与1%～5%比较。

3 讨论

白癜风是一种常见的后天性色素脱失性皮肤黏膜疾病，可发于任何年龄段，但以10～30岁居多，占总数的62.65%，其病因及发病机制目前有黑素细胞自毁学说、遗传学说、自身免疫学说、神经化学因子学说、微量元素相对缺乏说等，也可能多种因素互为因果[2]，其中免疫机制失衡导致的免疫炎性损伤是其主要的发病机制之一[3]。

T淋巴细胞是机体的主要免疫效应细胞，是皮肤免疫的主要参与者。当T细胞亚群的数量和功能发生异常时，可导致机体免疫功能的紊乱[4]。本研究结果显示寻常型进展期儿童白癜风患者CD3+、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值显著下降，CD8+细胞升高，但与病程无明显关系，提示寻常型进展期儿童白癜风患者存在细胞免疫功能低下。当T细胞受到抗原刺激而激活，进一步刺激CD4+不断分泌减少，而具有细胞毒性作用的CD8+细胞不断增殖，造成对黑素细胞的损伤和破坏，从而诱发白癜风。

免疫球蛋白最基本的特征是能与相应的抗原结合，活化补体，促进吞噬、溶解等作用[5]。有研究[6]报道白癜风患者血清免疫球蛋白均低于健康人群，认为免疫球蛋白异常与血中免疫调节性T细胞的不平衡和不成熟B淋巴细胞的增多有关。本研究采用免疫透射比浊法对90例寻常型儿童白癜风患者及30例正常对照组血清IgG、IgA、IgM及补体C3、C4水平进行检测，结果表明2组IgA与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，进展期组IgG、IgM较正常对照组明显增加，稳定期组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明寻常型儿童白癜风患者血清内存在抗黑素细胞IgG、IgM抗体，并且其抗体滴度与疾病的活动性和皮损范围有明显关系，这些抗体与相应的抗原结合，通过免疫复合物产生补体，与抗体联合介导的细胞毒作用破坏黑素细胞。寻常型儿童白癜风患者补体C3、C4下降,尤以进展期明显，考虑与补体生成缺陷及过度消耗，以致循环免疫复合物不能有效消除有关。提示寻常型儿童白癜风患者存在体液免疫功能亢进，体液免疫介导了白癜风的发病与进展。

IL-2是由辅助性T淋巴细胞产生的一种重要免疫调节因子，具有促进T细胞增殖、诱生LAK细胞、促进B细胞产生抗体、促进T细胞杀伤作用及增强NK细胞活性等作用[7]。有研究[8-9]报道，血清IL-2水平在许多自身免疫性疾病和血液病、肿瘤患者中均明显低下。本研究结果表明，寻常型进展期儿童白癜风患者血清IL-2水平显著低于正常对照组(P<0.01)，提示患者细胞免疫功能受抑制。

IL-6是一种来源于单核巨噬细胞及淋巴细胞的多功能细胞因子，能调节多种细胞功能，包括细胞增殖、细胞分化、免疫防御机制及血细胞生成等，与自身免疫性疾病的发生密切相关[10]。IL-6能抑制黑素细胞的增殖和黑素生成，能增进黑素细胞表面ICAM-1等的表达，诱导多克隆B淋巴细胞活化，促进自身抗体产生，引起黑素细胞损伤[11]。本研究结果表明，寻常型儿童白癜风患者血清IL-6水平显著高于正常对照组(P<0.01)，提示IL-6在寻常型儿童白癜风发病中发挥了重要的作用。

IL-8主要来源于单核巨噬细胞，它对T淋巴细胞、中性粒细胞有强烈的趋化和激活作用[12]。本研究结果显示，寻常型进展期儿童白癜风患者血清IL-8水平显著高于正常对照组(P<0.01)，提示其体内趋化机制存在异常，IL-8可能参与了白癜风的免疫机制。

IL-18主要来源于单核巨噬细胞，可刺激Th1细胞产生IFN-γ，并增强自然杀伤细胞的细胞毒效应[10]。本研究结果显示，寻常型进展期儿童白癜风患者血清IL-8水平显著高于正常对照组(P<0.01)，推测血清IL-18通过刺激Th1细胞和NK细胞相关细胞因子的产生发挥细胞毒作用，破坏黑素细胞，进而诱发白癜风。

此外，本研究结果亦显示，血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-18水平与病程无明显关系，血清IL-2水平随皮损面积增加而降低，IL-6、IL-8、IL-18水平随皮损面积增加而升高。说明血清相关免疫因子水平在一定程度上反映白癜风病情的严重程度，联合检测这些指标可以作为白癜风病情的评估依据。

综上所述，寻常型儿童白癜风患者存在细胞免疫功能低下，而体液免疫功能亢进，自身免疫和细胞因子在白癜风的发病和进展中发挥了重要的作用。从免疫学这一角度深入研究寻常型儿童白癜风的发病机制，寻找特异性的客观指标，将有利于评估病情及判断疾病的活动性，为临床提供靶向治疗带来新思路、新方法。

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(责任编辑：钟荣梅)

Detection and Analysis of Immune-Related Indexs in 90 Children with Vitiligo Vulgaris

YANG Rong-ming1a,LIU Li-xiang1b,ZHONG Yi-wen1c,ZHANG Ling-xiu1d,TIAN Li-juan1c,LUO Dan2,SONG Pei-yuan2

(1a.Department of Dermatology； 1b.Department of Internal Pediatrics； 1c.Department of Laboratory； 1d.Department of Gynaecology and Obstetrics，Shangyou County Maternal and Child Health Hospital，Shangyou 341200，China； 2.Experiment Center,College of Basic Medical Sciences，Nanchang University，Nanchang 330046,China)

Objective To understand the state of immune function in different stages,courses and lesion areas of vitiligo vulgaris in children.Methods Fifty-two children with progressive vitiligo vulgaris,38 children with stable vitiligo vulgaris and 30 healthy children were selected as progressive group,stable group and control group,respectively.The levels of CD3+,CD4+and CD8+cells in peripheral blood were measured by flow cytometry.Serum levels of immunoglobulin(IgG,IgA,IgM) and complement (C3,C4) were measured by immune transmission turbidimetry.Plasma levels of IL-2,IL-6,IL-8 and IL-18 were measured by double antibody sandwich ELISA.Results Compared with control group,the number of CD3+cells and CD4+cells,CD4+/CD8+ratio and levels of C3,C4 and IL-2 decreased but the number of CD8+cells and levels of IgG,IgM,IL-6,IL-8 and IL-18 increased in progressive group(P<0.01).The increased lesion areas were associated with the elevated levels of IgG,IgA,IgM,IL-6,IL-8 and IL-18 and the reduced levels of C3,C4 and IL-2(P<0.05 orP<0.01).The difference was significant in serum IL-6 level between stable group and control group(P<0.01).However,there were no significant differences in peripheral blood T-lymphocyte subpopulations and serum IL-2,IL-6,IL-8 and IL-18 levels between children with disease course shorter than 1 year and children with disease course longer than 1 year(P>0.05).Conclusion Children with vitiligo vulgaris have cellular immunodeficiency and humoral immune hyperfunction.Both autoimmunity and cytokines are involved in the occurrence and development of vitiligo vulgaris in children.

childhood vitiligo; vulgaris; T-lymphocyte subpopulation; immunoglobulin; complement; cytokines

2016-01-19

江西省卫生厅科技计划项目(20142078)

杨荣明(1973—)，男，学士，主治医师，主要从事皮肤性病学的研究。

R758.4+1

A

1009-8194(2016)04-0044-05

10.13764/j.cnki.lcsy.2016.04.020