H19基因的单核苷酸多态性与猪生长性状的相关分析及其时空表达

孙 浩，王子帅，徐银学*，唐中林*



H19基因的单核苷酸多态性与猪生长性状的相关分析及其时空表达

孙 浩1，王子帅2，徐银学1*，唐中林2*

（1.南京农业大学动物科技学院，南京210095；2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193）

摘 要：本试验为了了解H19基因在猪骨骼肌生长发育过程中的作用，首先采用实时荧光定量PCR的技术检测了H19的组织分布以及在骨骼肌生长发育中的动态表达。然后通过混合池测序检测了H19外显子和内含子区的单核苷酸多态位点（SNP），利用质谱在大白猪群体中进行SNPs位点基因型鉴定，并进行标记性状关联分析。H19基因在大白猪的心、肝、脾、肺、肾、小肠、胃、腿肌、背肌中均有表达，且在骨骼肌（腿肌、背肌）和肾中高表达。在骨骼肌发育中，H19主要是在胚胎期和出生后40d之前有较高表达量，并且在胚胎期105d达到最大值。对7个SNPs位点进行相关性分析，结果显示，RS15位点与达100kg体重的校正日龄显著相关（P＝0.046 2＜0.05），RS20位点与100kg的校正眼肌面积显著相关（P＝0.009 5＜0.01）。RS15与RS16紧密连锁，其单倍型与校正背膘厚显著相关（P＝0.049 8＜0.05）；RS17与RS18单倍型与达100kg的校正眼肌面积显著相关（P＝0.037 1＜0.05）。结果表明H19基因参与猪骨骼肌发育调控，是猪产肉性状的候选基因。

关键词：猪；长链非编码RNA；H19；骨骼肌；生长性状

中国是养猪大国，猪肉是人们日常生活中肉类食品的主要来源。随着消费者对猪肉品质、风味的要求日益提高，相关优良产肉性状的猪种选育逐渐成为猪生产工作中的重点之一。而猪肉的品质、风味亦取决于猪骨骼肌的生长和脂肪的沉积。骨骼肌是组成酮体瘦肉的主要成分，进而是猪产肉性状的决定因素。猪产肉性状是微效多基因控制的，对猪产肉性状的相关基因研究中，最重要的两个基因是调节骨骼肌纤维跨膜转运Ca2＋的鱼尼丁受体HAL/RYR1［1］和影响肌肉糖原含量的RN基因［2］。长链非编码RNAs（Long non－coding RNAs，LncRNAs）是一类转录后不翻译成蛋白、仅编码长RNA序列的基因。近年来研究表明，在骨骼肌生长发育过程中，lncRNA同样发挥了重要作用。H19基因是依赖于RNA聚合酶II的胞质lncRNA，是首批发现的lncRNAs之一，通过转录高水平、大约2.5 kb的转录本发挥功能［3－4］。转录本只有一个短的ORF，在物种间保守性低［5］。H19基因第一内含子内部可以转录miR－675的序列［6］。H19的第一内含子编码miR－675－3p和miR－675－5p，一方面，压力反应RNA结合蛋白HuR可以通过调控miR－675的表达，继而影响其下游IGF1R的功能［7］；另一方面，这些miRNA与靶基因Smad1、Smad5、Cdc6结合，进而对骨骼肌发育分化和再生产生影响。H19基因在人和小鼠的成年肌肉中表达量很高［89］，并且在肌纤维分化和肌肉再生时它的表达都显著上调；另外，H19还可以通过募集吸附let－7，影响Hmga2和Igfbp2的功能，进而对肌纤维多核的形成产生影响［10］。提示H19在肌肉的生长发育中起着重要作用。在实际生产中，对QTLs的定位并进行分子标记是一种行之有效的重要育种手段。例如：Z.L.Tang等［11］通过鉴定CNN3基因的SNP位点初步确定了该基因与仔猪断奶重、出生重等生长性状有关。

本研究通过对H19基因在组织和骨骼肌发育过程中的表达水平检测及性状关联分析，提示H19可能是猪骨骼肌生长发育过程中重要的调控基因，可作为产肉性状的一个候选标记基因。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样本采集 组织样品取自北京市顺义区某猪场的15头大白猪，分别于妊娠的8个时期和仔猪出生后的7个时期屠宰，采集背最长肌，分别表示为胚胎期（E33、E60、E65、E70、E75、E80、E95、E105）和出生后（D0、D20、D40、D60、D100、D140、D160）。另外采集3头成年母猪（160d）的心、肝、脾、肺、肾、小肠、胃、腿肌、背肌等组织。每个阶段及组织至少采集3份重复样品。采集后立即投入液氮中保存各个组织样品，少量于－80℃超低温冰箱中贮存备用。随机选取297个生长育肥的大白猪，进行血液样品采集。采集过程采用一次性抗凝管，置于－20℃保存备用。

1.1.2 主要试剂 2×Taq Master Mix购自北京康为生物技术公司，琼脂糖凝胶回收试剂盒购自北京天根生化科技有限公司，血液DNA裂解液、苯酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、70%乙醇、Trizol reagent购自Invitrogen；动物组织总RNA提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司，反转录试剂盒购自加拿大Fermentas公司；荧光定量试剂盒购自宝生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 组织总RNA提取和反转录 取黄豆粒大小的各个组织样品于液氮中研磨，RNA提取按照动物组织总RNA提取试剂盒进行操作，采用1%琼脂糖凝胶电泳检验RNA的完整性，并用分光光度计检测RNA的纯度和浓度。－80℃保存备用。cDNA第一链的合成按照RevertAidFirst StrandcDNA Synthesis Kit试剂盒步骤进行，取1μg RNA做模板，加入1μL随机引物Random Primer，用双蒸水补齐至12μL，在PCR仪中65℃5min后取出置于冰上，向其中分别加入5×Reaction Buffer 4 μL、RiboLockTM RNase Inhibitor（20U·μL－1）1 μL、10mmol·L－1dNTP Mix 2μL和RevertAidTM M－MULV Reverse Transcriptase（200 U·μL－1）1μL，PCR反应条件：25℃10min，42℃ 60min，70℃5min。反应产物放于－20℃保存备用。

1.2.2 H19定量引物设计 根据GenBank中猪H19基因序列（AY044827.1），利用Primer 5跨外显子设计合成H19定量引物。根据内参照基因GAPDHmRNA序列（NM＿001206359.1），设计定量引物，引物由北京天一辉远生物科技有限公司合成（表1）。

表1 H19基因定量引物Table 1 The primers for qRT－PCR of H19

1.2.3 H19基因组织和时空表达谱定量分析将反转录得到的cDNA稀释到同一浓度，按照实时定量方法的操作说明，以GAPDH为内参，检验H19基因在9个组织（心、肝、脾、肺、肾、小肠、胃、腿肌、背肌）和15个时期（胚胎期（E33、E60、E65、E70、E75、E80、E95、E105）和出生后（D0、D20、D40、D60、D100、D140、D160））中的表达情况，每个样本做3次平行试验。反应体系：TaqMan?Real－Time PCR Master Mixes 10μL，上下游引物各1 μL，模板2μL，双蒸水补齐至20μL。反应条件：StageⅠ：95℃30s；StageⅡ：95℃30s，60℃34 s，40个循环；StageⅢ：95℃15s，60℃1min， 95℃15s。

1.2.4 DNA混合池的构建 利用酚氯仿法抽提32个大白猪血液DNA，在分光光度计上测量纯度和浓度并在1%琼脂糖凝胶中验证DNA完整性后，按每一血液样本抽取1μg的标准，构建DNA混合池，混匀后置于－20℃保存备用。

1.2.5 部分H19基因序列的扩增引物设计 根据GenBank中猪H19基因序列（AY044827.1），利用Primer 5设计合成4对特异引物（表2），用来扩增基因DNA序列中的33 946～37 298bp区域，该区域包括6个外显子和5个内含子。引物由北京天一辉远生物科技有限公司合成。

表2 部分H19基因序列扩增引物Table 2 Primers used to amplify partial sequence of H19gene

1.2.6 部分H19基因序列的扩增及SNP位点筛选 以混合DNA池为模板加入2μL，上下游引物（表2）各1μL，2×Taq Master Mix 10μL双蒸水补齐至20μL。PCR条件：95℃5min；95℃变性32s，59℃退火30s，72℃延伸1min 35s，32个循环；最后72℃10min。PCR产物胶回收纯化后，由北京天一辉远生物科技有限公司测序，测序结果用DNAStar软件的SeqMan中的SNP功能查找潜在的SNP位点，并进行人工确定。

1.2.7 SNP位点在大白猪群体中的遗传分析和标记性关联分析 对生长相关性状测定时，首先对待测猪进行24h空腹处理，在记录待测猪的个体号、性别、测定日期、测定人员等信息后，将待测猪置于电子称上称重，待示数稳定后记录读数。然后利用B型超声波测定仪，扫描测定倒数第3～4肋间处且距背中线左侧约5cm的背膘厚同时测定眼肌面积。将记录数据根据以下公式进行校正，即可获得3个产肉性状的校正值。公式：

100kg体重时校正日龄＝测定日龄－［（实测体重－100）/CF］

100kg体重时校正背膘厚＝实测背膘厚×CF

100kg体重时校正眼肌面积＝实测眼肌面积×CF

其中，CF为各性状的校正因子。

随机选取297个大白猪的DNA样品，将SNP的相关信息交给北京康普森生物有限公司进行核酸质谱测序。对得到的基因型信息，运用Haploview、SNPStats等软件进行基因型频率（Genotype frequency）、等位基因频率（Allele frequency）、Hardy－Weinberg平衡检验、遗传纯合度（Gene homozygosity，Ho）、杂合度（Heterozygosity，He）、最小等位基因频率（Minor allele frequency，MAF）、有效等位基因数（Effective number of alleles，Ne）、多态信息含量（Polymorphism information contenet，PIC）、单体型（Haplotype）的统计。运用GraphPad和R语言软件对数据进行处理，并做PCA分析和相关分析。

2 结 果

2.1 H19基因在大白猪骨骼肌不同发育阶段的表达谱

以GAPDH作为内参，通过使用real－time PCR分析H19基因在大白猪的不同发育阶段（胚胎期（E33、E60、E65、E70、E75、E80、E95、E105）和出生后（D0、D20、D40、D60、D100、D140、D160））的相对表达量，其中以出生后160d（D160）的Ct为基准，根据2－△△Ct公式计算。结果显示，在骨骼肌整个发育期只有在出生后40d（D40）之前检测出H19的表达（图1），主要集中于骨骼肌生长发育的胚胎期和仔猪初生时期。在胚胎期105d（E105）达到峰值，且极显著高于其他各个时期（P＜0.01），而在出生40d之后直至成年背肌中几乎不表达，在其他时期表达量呈低度波状表达趋势。

图1 H19在大白猪骨骼肌不同发育阶段的相对表达Fig.1 The relative expression of H19at different development stages of Large White pigs

2.2 H19在大白猪不同组织中的表达谱

以GAPDH作为内参，通过使用qRT－PCR检测H19在160d大白猪的不同组织（心、肝、脾、肺、肾、小肠、胃、腿肌、背肌）中的相对表达量，其中以心的Ct值为基准，根据2－△△Ct公式计算。结果显示，H19在所有组织中均有表达，且在骨骼肌（腿肌、背肌）含量最丰富，其次在肾中含量较高（P＝0.184＞0.05），远远高于其他组织（P＝0.002＜0.01）；而心组织中H19表达量最低。H19在其他组织（肺、胃、肝、脾、小肠）中表达丰度居中（图2）。

2.3 骨骼肌相关生长性状的统计分析

在大白猪中，校正背膘厚在不同性别中差异不显著（P＝0.681 0＞0.05）（表3）；而达100kg时的校正日龄（Corrected age of animals with body weight of 100kg，CA100）在不同性别中差异极显著（P＜0.01），且公猪生长比母猪快了9.29d；达100kg时的校正眼肌面积（Corrected eye muscle area of animals with body weight of 100kg，CEMA100）在不同性别中差异显著（P＝0.036 4＜0.05），母猪比公猪大了1.59cm2（表3）。

图2 H19在大白猪不同组织中的相对表达量Fig.2 The relative expression of H19in different tissues of Large White pigs

表3 性别对大白猪校正背膘厚、达100kg校正眼肌面积和校正日龄的影响Table 3 The impact of sex on the corrected backfat，CA100and CEMA100in Large White pigs

2.4 基因型及基因统计分析和遗传多样性分析

通过混合池测序和人工筛选，确定7个潜在的SNPs位点，分别命名为RS15、RS16、RS17、RS18、RS20、RS21、RS22。在297个大白猪的DNA样品中，RS15、RS16、RS17、RS18、RS20、RS21、RS22均检测到多态性。RS15的3个基因型中TT频率最高，RS16、和RS21的3个基因型中CC频率最高，在RS18、RS20的3个基因型中CT频率最高，RS17、RS22的两个基因型中分别是CC和AA频率最高。RS15、RS16、RS17、RS18、RS20、RS21、RS22的优势等位基因分别是T、C、C、G、C、C、A（表4）。RS15、RS16、RS17、RS21和RS22的PIC＜0.25，均属于低度多态；RS20的0.25＜PIC＜0.5，属中度多态，RS18的PIC＞0.5，属高度多态（表5）。在表5中，经过Hardy－Weinberg平衡检验，RS15、 RS18、RS20、RS21严重偏离了HW平衡，而RS16、RS17、RS22符合Hardy－Weinberg平衡，综上所述，这3个SNPs遗传一致。

2.5 单体型分析和主成分分析

利用Hapoview软件，进行D＾/R2连锁不平衡分析，发现RS15和RS16、RS17和RS18、RS20和RS21、RS22分别形成3个具有连锁遗传的特性区域（图3）。RS15和RS16形成TC、CC和CT 3种单体型，RS17和RS18形成CT、CG、TT和TG 4种单体型，RS20、RS21和RS22形成CCA、TCA、TTA、TTG和CTG 5种单体型（图4）。利用R Studio的PCA主成分分析程序，对3个生长性状的所有观测到的SNPs进行PCA分析，发现相同基因型趋于聚集在一起，说明基因型是影响生长性状的主要遗传因素（图5、图6和图7）。

表4 基因型和等位基因频率Table 4 Frequency of genotype and allele

表5 遗传多样性分析Table 5 Genetic diversity analysis

图3 H19基因SNPs的D＾/R2连锁不平衡分析Fig.3 The linkage disequilibrium analysis of H19gene

图4 H19基因的单体型Fig.4 The haplotype analysis of H19gene

2.6 SNPs、单体型与生长性状的关联分析

利用GraphPad对同一性状不同SNP位点不同基因型之间进行Person检验，发现在校正背膘中，各个SNP位点基因型间均无显著差异。RS15 的TT基因型在达到100kg时校正日龄要比CT型长3.6d（P＝0.046 2＜0.05），说明RS15的TT基因型显著影响达到100kg时校正日龄，即两者显著相关。而在达到100kg校正眼肌面积中，RS20的CC基因型要比CT型小0.92cm2（P＝0.037 4＜0.05），TT比CT大3.84cm2（P＝0.047 8＜0.05），RS20的CC基因型要比TT型小4.76cm2（P＝0.009 3＜0.01）。独立样本t检验表明，RS20位点显著影响100kg的校正眼肌面积（P＝0.009 5＜0.01），两者极为显著相关（表6）。对单体型进行进一步关联分析，发现在RS15和RS16连锁的单体型中，TC/CT的校正背膘平均要比CC/CT少2.95cm（P＝0.049 8＜0.05）；在RS17和RS18连锁的单体型中，CT/CT的校正眼肌面积要比CT/TG大3.09cm2（P＝0.037 1＜ 0.05）。提示RS15与RS16、RS17与RS18的单倍型分别与校正背膘厚、达100kg的校正眼肌面积显著相关（表7）。

图5 在校正背膘厚中SNPs的PCA分析Fig.5 The PCA analysis in corrected backfat

图6 在校正日龄中SNPs的PCA分析Fig.6 The PCA analysis in CA100

图7 在校正眼肌面积中SNPs的PCA分析Fig.7 The PCA analysis in CEMA100

表6 各个SNPs基因型与3个生长性状的相关分析Table 6 The relative analysis between genotypes of SNPs and 3growth traits

表7 单体型之间的差异相关分析Table 7 The relative analysis between the genotypes of haplotypes

3 讨 论

猪骨骼肌细胞主要由肌纤维构成。在猪胚胎期14～22d，体节形成并发育；胚胎期35d左右，初级肌管（Primary myotubes）形成，并在胚胎期49d左右达到细胞增殖高峰；在初级肌管增殖变慢的同时次级肌管（Secondary myotubes）开始形成，到胚胎期91d时，初级肌管消失，次级肌管完成增殖。次级肌管在出生前形成肌纤维，在出生后的2个月里肌纤维完成终末发育［12－13］。Z.L.Tang等［12］利用LongSAGE技术比较通城和长白猪在胚胎期33、65 和90d的骨骼肌中筛选了一批与产肉性状有关的基因，并鉴定到数个与产肉性状相关的SNPs。之后的时间里，肌纤维数目不再变化，因此骨骼肌的生长主要是依赖于肌纤维的生长，或者说骨骼肌细胞的发育阶段就是从胚胎期到出生后2个月之间的时间。

对猪骨骼肌的相关基因研究中，MRFs家族中的Myf5（Myogenic factor 5）最先表达，影响生皮肌节的发育，而后MyoD（又称MyoD1，Myogenic differentiation 1）在生肌节中表达，参与决定成肌细胞的形成［14］。Myog（myogenin）和myf6（MRF4）主要参与成肌细胞分化为肌纤维的过程［15］。MEFs家族的MEF2a、MEF2b、MEFc和MEFd协同作用，共同参与成肌细胞到肌纤维的分化过程［16］。另外，PNAS－4基因可能与早期胚胎发育中骨骼肌纤维数目的增加有关［17］。CA3基因在骨骼肌中具有很高的表达水平，其多态性在中外猪种中有显著差异，并与脂肪含量、瘦肉率相关［18］。

对猪产肉性状相关基因的研究表明，肌纤维类型特异性蛋白TNNI1和TNNI2的表达水平改变肌纤维的构成，进而影响猪的产肉性状，研究还发现它们的内含子上的SNP位点显著影响背最长肌的pH、肉色、大理石花纹等性状［19］。bR10D1、HMGA2、NME1、PDGFRA、ERC1 5个基因对产肉性状有影响，特别是bR10D1、HMGA2、NME1基因与肉色、pH、失水重、剪切力和电导率极显著相关，bR10D1更是极显著的影响瘦肉率、眼肌面积和后腿质量［20］。HSP72、ANXA2和cMDH的表达量可能与屠宰前压力水平、肌纤维组成密切相关［21］。

近些年来，LncRNA在骨骼肌生长发育过程中的作用越来越引起人们的关注。主要包括eRNAs、Gtl2/MEG3、H19、Linc－MD1、Malat1、Neat1、Nctc1、SRA、Yams和SINE中的lncRNAs。同属于eRNAs（Enhancer－derived RNAs）的CERNA 和DRRRNA却通过相反的作用机制调控骨骼肌的分化，CERNA通过顺式作用激活MyoD，而DRRRNA通过反式作用促进MyoG的转录。Linc－MD1 （Long intergenic noncoding RNA－muscle differentiation 1）是一个骨骼肌特异的lncRNA，通过募集吸附miR－133和miRNA－135，促进MEF2C和MAML1（Mastermind－like protein 1）表达，进而影响骨骼肌的分化［18］。Malat1做为myostatin的下游靶基因，参与骨骼肌的生长发育调控［19］。SRA （Steroid receptor RNA activator）作为支架将介导骨骼肌发育的MyoD蛋白与其他因子结合在一起，从而发挥生物学功能［20］。Yams（YY1－associated muscle lincRNAs）可以直接通过表达影响骨骼肌基因的功能，其中Yams－1编码的miR－715可以作用于Wnt7b，从而对骨骼肌的形成产生影响［21］。最近，W.M.Zhao等人得到了一系列的在猪胚胎期骨骼肌发育中起作用的候选LncRNAs［22］。

猪在胚胎期35d时，胎儿基本成形，在35d之后到出生之前组织和器官进一步分化和成熟。在胎鼠上，H19基因主要在起源于胚胎期中胚层和内胚层的组织中高表达，包括肝、心、肾周组织、间充质细胞和肌肉［23－24］；在出生后，仅能在骨骼肌中检测到［25］。这与A.N.Kallen等［23］和B.K.Dey等［9］发现的H19基因在成年人和小鼠中也有很高表达量是吻合。在本研究的图2中可以明显看到，H19基因在成年猪的组织中也有类似的表达分布规律。为了进一步验证H19基因是在骨骼肌生长发育的特定时期被特异性转录表达的，对骨骼肌的15个时期H19基因的动态表达进行检测，由图1可以发现，H19基因主要在胚胎期活跃转录，出生40d以后表达量相对极低。表达水平在胚胎期105d达到高峰，且极显著高于其他任何时期（P＜0.001）。目前，据报道的H19参与骨骼肌发育过程的两种途径：一种是通过反式调控IGF的表达，进而影响骨骼肌的生长；另一种是通过自身转录的miR675作用于Smads通路，然后对骨骼肌发育起到调控作用。根据D.E.Gerrard等1998年的研究，IGF2在胚胎期59d表达达到峰值，随着胚胎和胎儿的发育表达量逐步降低［26］，这与本试验中H19的在胚胎期的表达趋势相反，提示IGF2表达量的降低可能与H19被逐步特异性激活转录有关。IGF2主要是促进成肌细胞增殖分化为初级肌管。提示H19主要参与肌管的成熟过程。而在小鼠中，miR675被证实与H19基因具有共表达关系［9］。miR675主要通过直接作用并下调作用于BMP通路的抗分化转录因子Smad家族相关基因的表达。这种作用和这一时期次级肌管围绕初级肌管形成并不发生进一步分化成为肌纤维的过程相符合。提示H19基因很可能参与了次级肌管的发生过程。

在Beckwith－Wiedemann综合征（BWS）中，位于H19基因第5外显子的1个SNP位点rs2839703被作为检测患有BWS并有病理变化的病人的标记位点使用［27］。rs10732516对来自于母本的染色体上的H19－ICR区域的甲基化程度具有潜在影响；与rs2839701、rs10732516连锁不平衡的rs4930103位点与其特定的CpG岛甲基化显著相关［28］。通过GWAS方法发现，rs11897432、rs2412488和rs2555155等3个SNPs也与该区域的甲基化有关［29］。H19基因的两个多态位点rs2107425、rs2107425的突变与乳腺癌相关［30］。rs76162918的等位基因频率在4个日本人群样本中为0.068～0.088，但在2个韩国人群中却只有0～0.005；进一步的研究显示，该位点可以作为日本人特有的3个人群标记基因之一［31］。在中国人群中，rs217727的T型等位基因导致冠状动脉疾病发生率上升，然而rs2067051的等位基因却会减少发病的风险［32］。由上述研究可以看出，H19基因的SNPs与多种疾病有关，而对猪产肉性状，特别是骨骼肌相关的生长性状的候选SNP筛选报道甚少。根据本试验研究结果，RS20 3个基因型间的个体表型均值间差异都显著，可以作为达100kg体重时的校正眼肌面积的候选标记位点，在猪中由于眼肌面积与瘦肉率呈正相关，因此，可以作为筛选高瘦率的候选位点，瘦肉率在屠宰胴体中主要是指骨骼肌占酮体重的比例，提示H19基因的点突变对骨骼肌的生长具有重要影响。骨骼肌的生长主要依赖于在猪出生后肌纤维的增肥，如前文所提及的，H19在猪出生后只在骨骼肌中特异性表达，综上所述，H19基因可能参与了肌纤维的出生后生长。

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（编辑 郭云雁）

The Correlation between H19Single Nucleotide Polymorphism and Pig Growth Characters and Its Spatio－temporal Expression

SUN Hao1，WANG Zi－shuai2，XU Yin－xue1*，TANG Zhong－lin2*
（1.College of Animal Science ＆Technology，Nanjing Agricultural University，Nanjing210095，China；2.Institute of Animal Science，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing100193，China）

Abstract：An attempt was made to reveal the function of H19gene in skeletal muscle development in pigs in this study.The distribution of H19in different tissues and dynamic expression at different developmental stages in skeletal muscle were determined by Quantitative real－time PCR（qRTPCR）.The sites of single nucleotide polymorphisms（SNPs）in its exons and introns were identified by pool DNA sequencing，and individual SNPs were genotyped using mass spectrum in Large White pig population.The trait－marker association analysis was carried out between H19genotypes and growth performance.The expression profiles showed that H19RNA was expressed in all tissues detected，including heart，liver，spleen，lung，kidney，intestine，stomach and skeletal muscle（leg muscle and longissimus muscle），with remarkably high expression in skeletal muscle and kidney.Meanwhile，H19expression existed only before postnatal 40days and reached the peak at 105days in embryo period during the development of skeletal muscle.Correlation analysis between SNPs and traits showed the RS15was significantly associated with corrected age of animals with body weight of 100kg（P＝0.046 2＜0.05），RS20was associated with the corrected eyemuscle area of animals with body weight of 100kg（P＝0.009 5＜0.01）；The correlation analysis between haplotypes and traits shown that RS15had a close linkage with RS16，and their haplotype was significantly correlated with corrected backfat thickness（P＝0.049 8＜0.05）.RS17was closely linked to RS18，and their haplotype was also significantly correlated with corrected eye muscle area of animals with body weight of 100kg（P＝0.037 1＜0.05）.In conclusion，H19gene is involved in regulation of pig skeletal muscle development and is a candidate gene for meat traits.

Key words：pig；long non－coding RNA；H19；skeletal muscle；growth traits

中图分类号：S828；S813.3

文献标志码：A

文章编号：0366－6964（2016）05－0870－12

doi：10.11843/j.issn.0366－6964.2016.05.003

收稿日期：2015－05－28

基金项目：转基因重大专项（2014ZX08009－001）；国家自然科学基金（31330074；31171192）

作者简介：孙 浩（1989－），男，山东莱芜人，硕士，主要从事动物遗传育种与繁殖研究，E－mail：littlesun2015@126.com

*通信作者：徐银学，教授，E－mail：xuyinxue@njau.edu.cn；唐中林，研究员，E－mail：zhonglinqy＿99@sina.com