离子色谱法测定艾附暖宫丸中9种无机阴离子含量

吴卫东

(天津中医药大学第二附属医院药学部，天津　300150)



◇药物分析◇

离子色谱法测定艾附暖宫丸中9种无机阴离子含量

吴卫东

(天津中医药大学第二附属医院药学部，天津300150)

摘要：目的建立同时测定艾附暖宫丸中9种无机阴离子(氟离子、甲酸根离子、氯离子、亚硝酸根离子、溴离子、硝酸根离子、硫酸根离子、草酸根离子和磷酸根离子)含量的分析方法。方法采用加速溶剂萃取法萃取，离子色谱法测定。Ion Pac AS11-HC阴离子交换分析柱为色谱柱(250 mm×4 mm)，氢氧化钾溶液为淋洗液，梯度洗脱(6～46 mmol·L-1)，流速为1.0 mL·min-1，洗脱24 min，柱温为30 ℃，进样量为25 μL。结果9种无机阴离子达到基线分离，0.1～20 mg·L-1线性关系良好，相关系数为0.999 0～0.999 9范围内，仪器精密度、重复性和稳定性的RSD<3.0%，平均加样回收率为86.3%～113.2%，RSD为0.68%～2.48 %。结论该方法简便快速和自动化，可用于艾附暖宫丸中9种无机阴离子含量的测定。

关键词：中药化学成份；色谱法,离子交换；阴离子；艾附暖宫丸/分析

原发性痛经是指经行前后或行经期间出现下腹疼痛、坠胀，伴有腰酸或其他不适的症状，但无器质性病变，严重者可伴有恶心、呕吐、冷汗淋漓、手足阙冷，甚至昏厥等，这严重影响女性的生活和工作质量[1-2]。流行病学资料表明女性中的发病率在25%以上，而青少年时期发病率可高达90%，是我国最常见的妇科疾病之一[3]。目前治疗原发性痛经的方法主要有西医治疗、中医中药治疗及其他疗法，而中医中药治疗是最主要的治疗方法[4]。而艾附暖宫丸是妇科中常用的中成药，此处方出自《仁斋直指附遗》(宋)卷二十六，是由艾叶(炭)、香附(醋炙)、吴茱萸(制)、肉桂、当归、川芎、白芍(酒炒)、地黄、黄芪(蜜炙)和续断10味中药组成，具有理气养血，暖宫调经的功效，主要用于治疗血虚气滞、下焦虚寒或寒凝冲任所致的月经不调、经来腹痛等病症的经典方剂，可以改善广大女性的生活和工作质量[5]。为了保证广大女性用药安全和疗效，需要控制该药的质量。根据现代中医理论的研究表明，有效成分包括有机成分和多种无机成分[6]。目前对于艾附暖宫丸的质量控制主要集中在用高效液相测定该药中的吴茱萸次碱、芍药苷、阿魏酸和川续断皂苷Ⅵ等的含量方面，以控制其有机成分，也有少量文章控制该药中金属元素含量等无机成分[7-9]，但是目前对该药的无机离子的测定尚未有报道。由于在生产或贮存过程中药物容易引入或水解产生各种阴阳离子。这些离子不仅能够直接或间接的影响药物的质量和疗效，而且能够间接的反映药物中某些主成分或杂质的含量，因此有必要测定该药中的无机阴离子[10]。离子色谱(ion chromatography，IC)在阴离子分析检测方面极具优势，具有简单、快速、选择性强等特点，在环境、食品、化妆品、医药、生命科学等领域得到广泛的应用[10-13]。中成药基体较复杂，各种离子含量差异比较大，本文采用梯度洗脱-离子色谱法对9种无机阴离子进行测定。

1仪器和试剂

1.1仪器ICS-2100型离子色谱仪，ASRS 300(4 mm)抑制器(美国Dionex公司)，配有IonPacAS11-HC(250 mm×4 mm，5 μm)分析柱和Ion Pac AG11-HC(50 mm×4mm)保护柱；ASE350加速溶剂萃取仪(美国Dionex公司)；Milli-Q超纯水处理系统(美国Millipore公司)，AB204-S电子天平(感量：0.0001g，瑞士Mettler-Toledo公司)；高速台式冷冻离心机(美国Beckman-Coulter公司)；KQ-500DE超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；尼龙66滤膜(0.22 μm，天津津腾实验设备有限公司)。

2方法

2.2样品前处理准确称取100 mg艾附暖宫丸样品或100 mg去离子水于ASE350萃取池中，设定萃取温度为50 ℃；萃取压力为1 500 psi；萃取溶剂为40 mL去离子水，静态循环5 min；循环2次；以50%的冲洗体积，冲扫60 s，萃取液转移至离心管中，最终定容至100 mL，充分摇匀后离心(8 000 r·min-1)5 min，采用0.22 μm微孔滤膜过滤即得样品溶液和空白样品。

2.3色谱条件 Ion Pac AS11-HC (250 mm×4 mm，5 μm) 阴离子交换分析柱和Ion Pac AG11-HC(50 mm×4 mm)保护柱；淋洗液：氢氧化钾溶液梯度洗脱(0～24 min，6～46 mmol·L-1)；柱温：30 ℃；抑制器：ASRS 3004 mm阴离子抑制器，抑制电流为75 mA，自循环抑制模式；检测器电导检测器，检测池30 ℃；流速1.0 mL·min-1；洗脱时间24 min；进样体积25 μL；空白样品图，混合标准溶液和样品离子色谱图如图1所示。

3结果

3.1线性关系、检测限和定量限在优化的色谱条件下，按照“2.3”项，将混合标准工作液依次进样分析，以各离子的质量浓度X(mg·L-1)为横坐标，峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线。将标准工作液浓度逐级稀释到响应值为3倍的噪音，此时溶液浓度为检出限(信噪比3∶1)。将样品溶液逐级稀释至响应值的10倍的噪音，此时溶液浓度为定量限(信噪比为10∶1)。此时的结果显示各离子的线性关系良好(r2≥0.999)，检出限为0.003～0.026 mg·L-1，定量限为0.018～0.078 mg·L-1，结果符合检测的要求，具体结果见表1。

空白溶液对照品溶液样品溶液

注：1．氟离子；2．甲酸根离子；3．氯离子；4．亚硝酸根离子；5．溴离子；6．硝酸根离子；7．硫酸根离子；8．草酸根离子； 9．磷酸根离子。

图1离子色谱图

3.6样品含量测定取6个批次艾附暖宫丸的样品，按照“2.2”项的方法制备样品溶液，并按照“2.3”项的色谱条件测定，用标准曲线法定量。结果显示，艾附暖宫丸样品中9种离子的质量分数在0.13～3.63 mg·g-1，结果见表3。

表1　无机离子的回归方程、检测限和定量限

表2　加标回收率与精密度试验

表3　艾附暖宫丸样品测定结果/mg·g-1

4讨论

参考文献

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Determination of 9 inorganic anions in Aifunuangong pills using accelerated solvent extraction and ion chromatography

WU Wei-dong

(DepartmentofPharmacy，TheSecondAffiliatedHospitalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300150，China)

Abstract:ObjectiveTo establish the method for simultaneous determination of nine inorganic anions (fluoride,formate,chloride,nitrite,bromide,nitrate,sulfate,oxalate and phosphate ) in Aifunuangong pills by ion chromatography．MethodsThe samples were extracted using accelerated solvent extraction (ASE) and determined by ion chromatography.Nine inorganic anions were determined by anion exchange column Ion Pac AS11-HC (250 mm×4 mm),and eluted for 24 min by gradient hydroxide potassium (6～46 mmol·L-1) at the rate of 1.0 mL·min-1and the temperature of 30 ℃,and the sampling volume was 25 μL.ResultsGood resolution can be achieved among the above mentioned nine inorganic anions．The nine inorganic anions showed a good linear relationship in the ranges of 0.1～20 mg·L-1and their linear correlations over the investigated concentration were in the range of 0.999 0～0.999 9,while RSDs of degree of precision,repeatability and stability were lower than 2.0%.The average recoveries were 86.3%～113.2% with relative standard deviation of 0.68%～2.48%,respectively.ConclusionsThe ion chromatography method is simple,fast and automated for the assay and quality control of nine inorganic anions in Aifunuangong pills.

Key words:Chemical principles (tcd);Chromatography,ion exchange;Anions;Aifunuangong pills/analysis

通信作者：吴卫东，男，副主任药师，研究方向：中成药益气养血机制研究及其安全性评价，E-mail：tidy_li@163.com

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.06.011

(收稿日期：2016-02-14，修回日期：2016-03-30)