长效DPP-4抑制剂奥格列汀含量及有关物质的测定

马慧丽石药集团中诺药业（石家庄）有限公司

长效DPP-4抑制剂奥格列汀含量及有关物质的测定

马慧丽
石药集团中诺药业（石家庄）有限公司

采用HPLC法测定了奥格列汀原料药含量和有关物质。色谱条件如下：色谱柱：Apo11o Cl8，检测波长为263nm。结果表明：奥格列汀在0.5～3.5 μg/m L范围内，线性关系良好，平均加样回收率为99.95%，RSD为0.10%。此法操作简便、准确，可用于测定奥格列汀原料药含量和有关物质。

HPLC；奥格列汀；有关物质；含量

2型糖尿病的治疗理念近年来已悄然发生改变，由过去简单降血糖正逐渐演变为对糖尿病及其并发症的综合治疗。口服DPP-4抑制剂因其强效降糖、保护胰岛功能、安全性良好等优势备受关注［1］。第一个上市的DPP-4抑制剂为西格列汀，目前销售规模已达40亿美元。然而，最近发展起来的长效口服DPP-4抑制剂，由于每周仅需给药1次而提高了患者的便利性和依从性，其临床价值和临床地位或将有望提升。迄今为止，已有两个长效口服DPP-4抑制剂应用于临床，分别是于2015年3月26日和2015年9 月28日获日本医药品与医疗器械综管理局批准的武田公司的琥珀酸曲格列汀和默克公司的奥格列汀［2］。目前国内关于奥格列汀的分析检测方法尚未见报道，本文建立了该药物原料药的HPLC测定方法，该法灵敏、准确、专属性及重复性好，可用于奥格列汀的含量测定及有关物质限量检查。

1　实验

1.1试剂与仪器

奥格列汀标准品，进口；奥格列汀原料药样品，自制；乙腈，色谱纯；水为自制蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

日本岛津1C一10AT高效液相色谱仪；德国赛多利斯CP-224S型电子分析天平。

1.2方法

1.2.1色谱条件

色谱柱：Apo11o Cl8，5μm，250mm X 4.6mm；流动相：甲醇一0.03mol/l的磷酸二氢钾溶液（7：3）；检测波长为263nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；理论板数按奥格列汀计算应不低于2000；奥格列汀峰与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。

1.2.2标准品溶液的配制

取奥格列汀标准品约25mg，精密称定，置25mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品储备液。用流动相稀释10倍作为对照品溶液。

1.2.3供试品溶液的配制

精密称取奥格列汀原料药，配制成1 mg/mL的溶液，作为供试品储备液。用流动相稀释10倍得到供试品溶液。

2　结果与讨论

2.1系统适应性

分别量取空白溶液、标准品溶液、供试品溶液，按1.2.1色谱条件进样测定。结果表明，主峰保留时间5.1 min，拖尾因子为1.06，与相邻杂质峰的分离度均大于1.5，理论塔板数按奥格列汀峰计算不低于2000。

2.2专属性考察

取5 m L奥格列汀标准品储备液分别加入1 mol/L氢氧化钠溶液、1 mol/L盐酸溶液、30%过氧化氢溶液各2 mL和100℃水浴加热1 h。中和后加流动相至10 m L，分别进样10 μL，考察降解物的分离性能。经酸、碱、高温、氧化破坏后的降解物与主峰奥格列汀均能达到良好分离，分离度大于1.5，说明所建方法的专属性强。

2.3线性及最低检测限

精密量取奥格列汀标准品储备液适量，加流动相稀释制成浓度（μg/mL）分别为3.5、3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5系列溶液。各取10 μL进样测定，以峰面积（y）为纵坐标、进样浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线，拟合得回归方程y=1106.9x+2.972，R=0.9999，表明在0.5～3.5 μg/mL范围内，线性关系良好。在选定的色谱条件下，按信噪比（S/N=3），测得其最低检测限为0.0028%。

2.4精密度

取奥格列汀浓度为1.0 μg/mL的供试品溶液，按1.2.1色谱条件进样，连续进样6次，测定峰面积，主成分峰面积的RSD为0.6% （n=6），相关物质峰面积的RSD为1.1%（n=6）。

2.5稳定性

取“1.2.3”项下供试品溶液，按1.2.1色谱条件分别于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h进样10μL，记录色谱图，以峰面积计算主峰峰面积的RSD为0.2%（n=6），相关物质峰面积的RSD为0.7%（n=6）。表明供试品溶液在48 h内检测稳定性良好。

2.6重复性

取“2.5”项下的一份供试品溶液，按1.2.1色谱条件连续进针6次，计算奥格列汀的RSD为0.58%（n=6），表明重复性良好。

2.7加样回收率

精密量取“1.2.3”项下供试品溶液9份，每份10 mL，按其浓度的80%、100%、120%分别加入105℃干燥至恒重的奥格列汀对照品各3份，按1.2.1色谱条件进样10μL。平均加样回收率为99.95%，RSD为0.10%，说明该方法的准确度高。

2.8样品测定

按1.2.1色谱条件测定3批次供试品，量取“1.2.3”项下供试品溶液各10μL进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算奥格列汀含量分别为99.6%、99.9%、99.8%。

2.9有关物质的测定

按1.2.1色谱条件进样标准品溶液，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的2O%，再分别量取“1.2.2”项下标准品溶液和“1.2.3”项下供试品溶液各10μL进样，记录色谱图，参照有关物质测定方法测定，3批有关物质含量分别为0.256%、0.269%、0.251%。

3　结论

建立了HPLC法测定奥格列汀的含量和有关物质。色谱条件如下：色谱柱：Apo11o Cl8，5μm，250mm X 4.6mm；流动相：甲醇一0.03mol/l的磷酸二氢钾溶液（7：3）；检测波长为263nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。该法简便、精密、专属、灵敏，可用于奥格列汀原料药含量测定和有关物质的检查，可满足企业质量控制的要求。

［1］周辛波.关注长效口服降糖药-DPP4抑制剂，临床药物治疗杂志，2015年第5期，92页

［2］全球首个每周一次口服降糖药获批，中国食品药品监管，2015年第4期，8页

马慧丽（1981-），女，河北省石家庄市人，工程师，主要从事医药研发、知识产权方面工作。