罗布麻总黄酮的急性毒性实验研究

胡梦楠 梁泰刚*（山西医科大学药学院，山西 太原 030001）



罗布麻总黄酮的急性毒性实验研究

胡梦楠 梁泰刚*
（山西医科大学药学院，山西 太原 030001）

【摘要】目的 初步评价罗布麻总黄酮的安全性。方法 小鼠一次性灌胃给药，连续观察14 d，通过预实验判断测定半数致死量（LD50）的可能性，据此测定其LD50或最大耐受量（MTD）。结果 小鼠口服罗布麻总黄酮最大耐受量为10.24 g/kg。结论 罗布麻总黄酮对小鼠急性毒性低，安全性较高。

【关键词】罗布麻；总黄酮；急性毒性；最大耐受量

罗布麻（Apocynum venetum L.）为夹竹桃科罗布麻属植物罗布麻的干燥全草，又名红麻、茶叶花等，具有降压、强心、利尿、降血脂、延缓衰老、抗辐射、增强免疫等功效。临床用于治疗高血压、高血脂、慢性心功能不全、肾炎水肿、防治感冒等。现代药理研究表明罗布麻总黄酮是其降血压、降血脂和抗血小板聚集、镇静、利尿的有效部位之一［1］。为保证临床用药的安全性，合理开发利用罗布麻总黄酮提取物资源提供可靠的安全性资料，本实验对罗布麻总黄酮提取物进行了急性毒性评价。

1 实验材料

1.1 受试药物：称取适量罗布麻，加入10倍量65%乙醇，70 ℃回流提取2次，每次2 h［2］，过滤，合并滤液，回收乙醇至无乙醇味，浓缩至适量体积获得棕黄色罗布麻总黄酮粗提物。粗提物经HPD-400型树脂，以1 BV/h吸附流速上样，纯化水冲洗2 BV，60%乙醇洗脱3 BV，收集60%乙醇洗脱液，减压回收溶剂获得纯化后的罗布麻总黄酮有效部位［3］。以芦丁为标准品通过紫外分光光度法计算得出提取物中总黄酮的含量为25.4%。

1.2 实验动物：昆明种小鼠140只（SPF级），雌雄各半，6～7周龄，体质量18～25 g，由山西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（晋）2009-0001，动物房合格证号：医动字070102 号。

1.3 实验环境：实验室温度23～27 ℃，相对湿度50%～70%，雌雄分笼饲养，每笼5只，自由摄食和饮水。

2 实验方法与结果［4-5］

2.1 预实验：取小鼠40只，随机分成2组，每组20只，雌雄各半。分为对照组和实验组。实验组以最大给药浓度，最大给药剂量（0.4 mL/10 g）。一次灌胃，连续观察14 d，期间观察小鼠死亡数和一般情况。对照组灌胃等量0.5% CMC溶液，余同给药组。若死亡数≥30%，则进行半数致死量（LD50）测定，否则测定最大耐受量（MTD）。

2.2 最大耐受量测定：取小鼠100只，随机分成5组，每组20只，雌雄各半。分别为溶剂对照组（0.5% CMC-Na组）和罗布麻总黄酮组（4组，按剂量由高到低依次为16.00、12.08、10.24、8.20 g/kg组）。相邻两组剂量成等比级数，比值1.25：1。给药前隔夜禁食12 h，自由饮水。按剂量一次灌胃给药，对照组给予0.5% CMC-Na，给药容积均为0.4 mL/10 g BW。给药后2 h自由饮食，详细观察给药后4 h内动物的反应情况，然后每天观察1次。记录小鼠死亡情况和体质量变化，观察期限14 d。第14天时称量各组小鼠体质量后，剖检存活小鼠，观察主要脏器病变情况。

2.3 实验结果：在预实验中，小鼠以最大给药浓度和最大给药剂量灌胃后，观察14 d，死亡数＜30%，因此测不出LD50，所以进行最大耐受量（MTD）测定。按实验剂量分别进行灌胃给予罗布麻总黄酮提取物，实验中发现，灌胃给药后部分小鼠出现自主活动减少，呼吸短促，尿量增加，甚至出现死亡。灌胃后的小鼠连续观察14 d。小鼠灌胃后的死亡情况，体质量、行为活动、呼吸、排泄、精神状态、饮食情况见表1、2。

由表1和表2可知，存活动物中对照组小鼠：行为活动、呼吸、排泄、精神状态、饮食均无异常，未有动物死亡。罗布麻总黄酮组：随着给药剂量的升高，小鼠表现为活动减少，中毒小鼠表现为呼吸短促、尿量增多等。16.00 g/kg 剂量组给药后24 h内死亡3只；12.08 g/kg剂量组给药后24 h内死亡1只；10.24 g/kg和8.20 g/kg 剂量组均未有动物死亡。未死亡小鼠3～7 d各项指标恢复正常。14 d后处死受试小鼠并解剖尸检，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，各实验组脏器外观均未见异常改变。结果，小鼠口服罗布麻总黄酮MTD 为10.24 g/kg。相当于临床成人日用量的161倍（成人每日口服生药量15 g，成人体质量60 kg计）。

3 实验讨论

罗布麻富含黄酮等活性物质，具有较高的药理活性和食疗保健作用［6-7］。总黄酮作为罗布麻的主要活性成分，具有降压、强心、利尿和降脂等作用。深化罗布麻总黄酮的研究将有助于进一步开发罗布麻总黄酮在食品保健和作为降压，强心，利尿等治疗药物方面的应用前景，带来更大的社会效益和经济效益。

本研究制备了罗布麻总黄酮提取物，通过罗布麻总黄酮对小鼠的急性毒性实验观察发现：口服给药未能测出罗布麻总黄酮的LD50，口服一次的MTD为10.24 g/（kg·d），相当于临床成人日用量的161倍，表明罗布麻总黄酮口服给药较为安全。但其安全性评价还应结合长期毒性实验做进一步验证，以全面保证临床用药的安全性。

表1 罗布麻总黄酮急性毒性试验小鼠死亡及反应情况

表2 罗布麻总黄酮小鼠急性毒性试验小鼠体质量（g，±s，n=20）

表2 罗布麻总黄酮小鼠急性毒性试验小鼠体质量（g，±s，n=20）

注：与对照组比较，*P＜0.05

组别　　实验前体质量　禁食后体质量　1 d体质量　3 d体质量　5 d体质量　7 d体质量　9 d体质量　11 d体质量　14 d体质量1　23.27±1.74　21.22±1.23　21.59±2.03* 22.07±1.65* 22.45±1.62* 23.43±1.38* 24.03±1.08* 25.11±1.45* 26.10±1.39* 2　23.24±1.13　20.98±1.05　22.18±1.32* 22.53±1.66* 22.69±1.32* 23.58±1.2* 24.25±1.45* 25.57±1.63* 26.89±1.30 3　23.66±1.25　20.86±1.73　22.98±1.80　23.29±1.6　23.71±1.57　24.96±1.28　25.13±1.27　26.95±1.35　27.97±1.12 4　23.15±1.61　21.23±0.96　23.34±1.22　23.8±1.73　24.06±1.49　24.98±1.37　25.75±1.33　27.46±1.63　27.66±1.49对照组　23.46±1.23　20.71±1.05　23.72±1.67　24.06±2.0　24.35±1.65　25.16±1.30　25.84±1.56　27.05±1.36　28.15±1.55

参考文献

［1］ 侯晋军，韩利文，杨官娥，等.罗布麻叶化学成分和药理活性研究进展［J］.中草药，2006，37（10）:1603-1606.

［2］ 叶菊，苏印泉.罗布麻叶总黄酮提取工艺研究［J］.安徽农业科学，2008，36（10）:3939-3940.

［3］ 张素琼，侯晋军，李青山.大孔树脂同步分离纯化罗布麻叶总黄酮和总鞣质的研究［J］.中国中药杂志，2008，33（10）:1141-1144+ 1230.

［4］ 崔明宇，孙志伟，王艳，等.蓬子菜有效部位总黄酮的急性毒性实验研究［J］.中医药信息，2011，28（6）:36-37.

［5］ 李冬梅，尹晓飞，蔡大伟.淫羊藿总黄酮急性毒性试验研究［J］.中国药师，2007，10（10）:1011-1012.

［6］ 张卫明，肖正春，钱学射，等.罗布麻保健茶在境外的研究与利用［J］.中国野生植物资源，2007，26（3）:22-27.

［7］ 喻春明.罗布麻的概况及开发利用前景［J］.中国麻作，1996，18（3）: 40-41.

中图分类号：R282.710.7

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）15-0037-02

*通讯作者