1,25二羟维生素D3联合脾氨肽口服冻干粉对哮喘CD4+CD25+T细胞、TGF-β1及VEGF影响研究

高志刚，袁永红，詹建华，潘开宇

(杭州市萧山区第一人民医院 儿科，浙江 杭州 311200)

1,25二羟维生素D3联合脾氨肽口服冻干粉对哮喘CD4+CD25+T细胞、TGF-β1及VEGF影响研究

高志刚Δ，袁永红，詹建华，潘开宇

(杭州市萧山区第一人民医院 儿科，浙江 杭州 311200)

目的 探讨1,25-二羟维生素D3联合脾氨肽口服冻干粉对哮喘患者CD4+CD25+T细胞、TGF-β1及VEGF的影响。方法 收集56例支气管哮喘患者，随机分为对照组和实验组，每组各28例，分别给予相应的药物治疗，治疗结束后，对所有患者的静脉血CD4+CD25+T细胞水平、血清TGF-β1、VEGF水平、ACT评分及肺功能情况进行检测。结果 治疗后，与对照组比较，实验组患者静脉血CD4+CD25+T细胞水平较高(P<0.05)；血清TGF-β1水平较高(P<0.05)；血清VEGF水平较低(P<0.05)；FEV1%、FEV1/ FVC值较高(P<0.05)；ACT评分较高(P<0.05)。结论 1,25-二羟维生素D3联合脾氨肽口服冻干粉能够显著升高支气管哮喘患者静脉血CD4+CD25+T细胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力，改善肺功能和治疗效果。

1,25二羟维生素D3；脾氨肽口服冻干粉；哮喘；CD4+CD25+T细胞；TGF-β1；VEGF

全世界约有3亿哮喘患者[1]，发病率以每10年20%～50%的比率增长，我国约有1000万～3000万哮喘患者[2]，患病率为0.31%～3.38%，并且有不断增加的趋势。现有对哮喘的治疗临床多用布地奈德吸入疗法，虽然糖皮质激素的作用比较明显，但是其作用是非特异性的，长期使用可以引起机体一系列的代谢及内分泌的紊乱。随着现代分子免疫学及遗传学方面研究的进展，人们认为免疫因素在哮喘的发病过程中发挥重要作[3]，治疗上加用免疫调节相关药物可以取得更好的疗效。研究显示，脾氨肽佐治哮喘能更有效地控制哮喘症状[4]。本研究探讨1，25-(OH)2-VitD3联合脾氨肽口服冻干粉对哮喘患儿的影响。

1 资料与方法

1.1.1 临床资料：收集杭州市萧山区第一人民医院儿科2013年12月～2015年7月的确诊为支气管哮喘的患儿56例。将所有患者按照随机数字表分为实验组和对照组，每组各28例患者，实验组男性13例，女性15例，年龄5～10岁，平均年龄(7.14±0.91)岁，病程0.5～4.1年，平均病程(3.31±0.80)年；对照组男性14例，女性14例，年龄5～10岁，平均年龄(7.12±0.99)岁，病程0.6～4.2年，平均病程(3.20±0.78)年。2组患儿的年龄分布、性别组成、病程等一般临床资料方面差异无统计学意义。

纳入标准：符合《儿童支气管哮喘的诊断及治疗》[5]的5～10岁儿童，存在咳嗽、喘息、呼吸困难等临床表现，并经X线等影像学检查排除其他肺部感染及占位性病变。本研究获得患者知情同意，且得到本院伦理委员会批准。排除标准：①近3个月内合并感染性疾病，应用任何类型或剂量的抗生素、糖皮质激素等治疗的患儿；②合并先天性免疫功能缺陷或近期服用影响免疫功能的药物的患儿；③存在心血管系统疾病或严重肝肾功能不全等基础疾病的患儿。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：所有患者均严格按照全球哮喘防治创议(GINA方案)治疗。对照组患者给予1，25-二羟维生素D3 800 IU/d口服。实验组患者在对照组基础上给予脾氨肽口服冻干粉(商品名：复可托，浙江丰安生物制药有限公司，国药准字H1097021)4 mg，1次/天睡前凉开水冲服。1个月为1个周期，2组患者均治疗2个周期。

1.2.2 血液指标检测：酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平，试剂盒购买于罗氏诊断产品上海有限公司；双抗体蛋白夹心法检测CD4+CD25+T细胞水平，试剂盒购买于罗氏诊断产品上海有限公司。DG5033A全自动酶标仪(华东电子)。

1.2.3 肺功能及ACT评分检测：采用HI-101肺功能检测仪(北京裕天医疗技术)，分别于治疗前后对患者第1秒用力呼气容积占预计值百分比( FEV1% )以及FEV1/ FVC值；根据哮喘控制测试(ACT评分)表[6]，在治疗前后对患者进行评分，来评估对哮喘病情的控制情况：未控制：≤19分，部分控制：20～24分，控制良好：≥25分。

2 结果

2.1 治疗前后2组患者血CD4+CD25+T细胞及TGF-β1水平比较 治疗后2组患者ACT、血CD4+CD25+T细胞水平及TGF-β1水平均明显改善，与对照组比较，实验组患者ACT、血CD4+CD25+T细胞水平及TGF-β1水平较高(P<0.05)。见表1。

表1 治疗前后2组患者ACT 、CD4+CD25+T、TGF-β1水平比较

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.2 治疗前后2组患者血清VEGF水平比较 治疗后2组患者的血清VEGF水平均明显下降，与对照组比较，实验组患者血清VEGF水平明显降低(P<0.05)。见表2。

组别 例数时间VEGF(pg/mL) 对照组28治疗前261 54±30 95治疗后175 34±20 17∗实验组28治疗前253 44±32 54治疗后102 43±12 33∗#

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.3 治疗前后2组患者的FEV1%、FEV1/ FVC值比较 治疗后2组患者的肺功能均明显改善，与对照组比较，实验组患者的FEV1%、FEV1/ FVC值明显升高(P<0.05)。见表3。

组别 例数时间FEV1%FEV1/FVC(%)对照组28治疗前64 71±7 2952 84±6 32治疗后77 54±11 02∗65 56±8 36∗实验组28治疗前64 36±7 3752 58±6 85治疗后89 74±10 28∗#72 15±9 47∗#

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

3 讨论

支气管哮喘的发生与遗传因素、性别、肥胖、种族、变应原暴露、呼吸道感染、空气污染、社会环境等因素有关，其中环境因素是哮喘发生发展的重要原因[7]，其发病机制尚未完全明确，免疫相关机制是目前研究的热点。研究认为[8]，哮喘患者在受到过敏原刺激后，B7和CD28细胞结合，激活T淋巴细胞细胞，产生气道免疫炎症反应；外周血中存在组成性的不依赖抗原刺激的Th1异常表达，Th1/Th2合成分泌失衡，机体免疫功能受损，刺激炎症相关细胞因子的产生，是哮喘发病的基础；气道炎症反应反复、慢性发作，刺激细胞外基质聚集、新生血管生成、平滑肌细胞增殖，并最终形成气道重塑，导致气道阻塞和非特异性气道高反应。脾氨肽口服冻干粉是一种免疫体调节剂，含有多种免疫调节因子和氨基酸，用于免疫缺陷、免疫功能低下、自身免疫功能紊乱等疾病的治疗，已有研究显示[9]，对小儿哮喘具有较好的疗效，并能调节患儿免疫功能平衡,其能够通过免疫信息传递、淋巴细胞活化及受体调节等3个环节来发挥作用；通过加强T淋巴细胞的杀伤效应、协同效应、增强效应和复制效应，来提高机体的免疫功能，从而发挥排斥抗原性改变的自身细胞及抗细菌、霉菌和病毒性细胞内感染的作用。1，25-(OH)2-VitD3是维生素D3的活性形式，维生素D具有免疫调节作用，能够降低细胞通透性，减少过敏物质透过损伤气道上皮细胞，对哮喘患者气道起到保护作用。

结果发现，实验组患者静脉血CD4+CD25+T细胞水平及TGF-β1与对照组比较明显升高(P<0.05)，证实了1，25-(OH)2-VitD3联合脾氨肽口服冻干粉能够改善患者的免疫功能。CD4+CD25+T细胞分为效应性T细胞和调节性T细胞两种，调节性T细胞是具有免疫调节及免疫耐受介导作用的调节细胞，由胸腺合成分泌，具有免疫抑制和免疫无能性功能。CD4+CD25+T调节性T细胞与哮喘的发生关系密切。TGF-β1具有调节细胞生长和分化的作用，能够促进损伤气道的修复，抑制炎症细胞表达，减轻气道炎症，还对Th2具有促进和抑制双重作用，具有免疫调节功能。

本研究结果显示，实验组患者血清VEGF水平与对照组比较明显降低(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3联合脾氨肽口服冻干粉能够防止哮喘患者的气道重构。气道重构是指哮喘患者的气道、平滑肌不可逆性的增厚，是气道功能减退的基础。VEGF属于血小板生长因子家族，能够促进血管内皮细胞增殖、生长，促进新生血管形成，对上皮细胞的生长也有促进作用。在支气管哮喘发生过程中，VEGF能够刺激嗜酸性粒细胞活化、趋化以及新生血管形成来增强气道炎症反应，同时使呼吸道粘膜血管化、通透性增加，加速血管重构过程。FEV1%降低与呼气性的呼吸困难有关，是反映儿童支气管哮喘严重程度的重要指标[11]，实验组患者的FEV1%、FEV1/ FVC是气道阻塞的肺量测定，比值越小，提示肺功能越差。本研究结果显示，与对照组比较明显升高(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3联合脾氨肽口服冻干粉能够提高哮喘患者的肺功能。

本实验通过对56例支气管哮喘患者进行分析，1，25-二羟维生素D3联合脾氨肽口服冻干粉能够显著升高支气管哮喘患者静脉血CD4+CD25+T细胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力。

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[4] 毕文淼， 何志红， 金颖， 等. 脾氨肽佐治支气管哮喘对白细胞介素及肺功能的影响[J]. 临床误诊误治， 2015， 28(7)： 106-108.

[5] 陈育智. 儿童支气管哮喘的诊断及治疗[M]. 人民卫生出版社， 2010.

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(编校：谭玲)

Effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF-β1 and VEGF in patients with asthma

GAO Zhi-gangΔ, YUAN Yong-hong, ZHAN Jian-hua, PAN Kai-yu

(Department of Pediatrics, The First People’s Hospital of Xiaoshan District of Hangzhou City, Hangzhou 311200, China)

ObjectiveTo analysis the effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF- β1 and VEGF in patients with asthma.Methods56 patients who were diagnosed with bronchial asthma were randomly divided into experiment group and control group, 28 cases in each group. Patients were given the appropriate drug treatment, after the treatment,the venous blood level of CD4+CD25+T cells, the serum levels of TGF-β1 and VEGF, the ACT score and pulmonary function were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the venous blood level of CD4+CD25+T cells was higher in the experiment group(P<0.05);the serum TGF-β1 level was higher(P<0.05);the serum VEGF level was lower(P<0.05); the FEV1% and FEV1/ FVC were higher(P<0.05); the ACT score was higher(P<0.05).ConclusionThe 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder can improve significantly the venous blood level of CD4+CD25+T cells and the serum TGF-β1 level, reduce serum VEGF level in patients with bronchial asthma, improve immunity, ameliorate lung function and treatment effect.

1,25-(OH)2-VitD3; spleen ammonia peptide oral freeze dry powder; asthma; CD4+CD25Tcells; TGF- β1; VEGF

高志刚，通信作者，男，本科，主治医生，研究方向：小儿呼吸，E-mail：gaozhiganghz15@163.com。

R914

A

1005-1678(2016)02-0094-03