HPLC法测定盐酸二甲双胍中二甲双胍的含量

陈秀伶

【摘要】目的：通过HPLC方法测定二甲双胍在盐酸二甲双胍片剂中的含量。方法：在色谱条件：选择Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，流动相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（32∶78），检测波长：234 nm， 进样量10μl，1.0 mL/min流速，柱温为室温（30℃）条件下进行检测。结果：二甲双胍在2.56ug·mL-1-64.00ug·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为：Y =65347X-324521（r=0.9996）， 平均回收率为100.46%，RSD为1.43%。结论：采用高效液相色谱方法，可有效评估盐酸二甲双胍片剂中二甲双胍的含量，本法结果准确、方法简单、灵敏度高。

【关键词】HPLC法； 二甲双胍； 盐酸二甲双胍；含量

【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2016）03-0043-02

二甲双胍是目前治疗2型糖尿病的首选药物，目前对于盐酸二甲双胍的含量测定方法较多，紫外及高效液相等检测方法，都有相继报道[1]。考虑到紫外检测不能有效分离制剂中有关物质，所测结果准确性不高，故考虑分析高效液相法对盐酸二甲双胍片剂检测的有效性，结果报道如下：

1 材料

1.1 仪器与试药

岛津 LC-20A 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；乙腈由国药集团化学试剂有限公司提供，为色谱醇；磷酸、磷酸二氢钾均为分析纯；盐酸二甲双胍对照品（中国药品生物制品检定所，批号：150913-151102）；盐酸二甲双胍胶囊（常州兰陵制药有限公司，国药准字H11021518，批号为：140923、150316、150728）。

2 方法与结果

2.1 方法学验证

2.1.1 色谱条件

色谱柱选择Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm），，流动相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（32∶78），检测波长：234 nm， 进样量10μl，1.0 mL/min流速，柱温为室温（30℃）。

2.1.2 溶液的制备

2.1.2.1 供试品溶液的制备

精密称取30粒盐酸二甲双胍胶囊，倾出内药物后，混合均匀，精密称取上述供试品0.1g置于50ml容量瓶中，加入流动相30ml稀释，超声5min，至澄清后，放置室温，稀释至对应刻度，取适量溶液经微孔滤膜（0.2um）过滤后，待用。

2.1.2.2 对照品溶液的制备

采用十万分位天平称取盐酸二甲双胍对照品12.80mg于100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

2.1.3 系统适用性试验

2.1.3.1 精密度试验

在相同色谱条件下，重复进样6次，每次10ul，分别测定峰面积，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为 1.1%<2.0%，符合药典规定，提示，本组方法精密度良好。

2.1.3.2 重复性试验

选择同批号盐酸二甲双胍胶囊6份，精密称定后，根据供试品“2.1.2.1”项操作制备溶液，采用相同色谱条件，进样10ul，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD = 1.2% （小于2.0%），符合标准规定，提示本组方法具有较好的重复性。

2.1.3.3 稳定性试验

于0h、4h、8h、12h、24h分别取供试品与对照品溶液，采用相同色谱条件，进样10ul，根据测得的色谱峰面积，对照品组RSD为1.1%<2.0%，供试品组RSD为1.2%<2.0%，提示对照品及供试品溶液在48h内较为稳定。

2.1.3.4 回收率考察

取“2.1.2.1”项供试液于，保存至3个锥形瓶内，依次加盐酸二甲双胍对照品2.23mg、5.17和10.31mg，根据制作“2.1.2.1”项步骤，进样10ul，对峰面积进行测定，得到回收率分别为：100.43%、100.58%和99.96%，平均100.46%，RSD 1.43%，与药典标准相符。

2.1.4 线性关系考察

采用移液管精密移取“2.1.2.2”下对照品溶液0.20ml、0.50ml、0.80ml、1ml、2ml、5ml于10ml容量瓶中，使用流动相稀释至刻度，澄清后，采用微孔滤膜过滤，得到系列标准溶液。结合对应色谱条件，进样10ul，测定样品色谱峰面积，以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为：Y =65347X-324521（r=0.9996），提示，盐酸二甲双胍浓度在2.56ug·mL-1 ～64.00ug·mL-1范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.2 样品中盐酸二甲双胍含量测定

在同一色谱条件下分别测定盐酸二甲双胍对照品溶液与3批盐酸二甲双胍胶囊供试品溶液（取供试品25mg），采用两组方式（峰面积归一化法和自身对照法）分别对供试品中盐酸二甲双胍含量进行测定（结果与样品标示量对比）。

3 结果

结果显示，通过上述色谱条件测定盐酸二甲双胍胶囊中盐酸二甲双胍含量，与标识量比较结果显示，三个批次的样本含量分别为100.51%、100.49%、100.39%，RSD<2.0%。

4.讨论

盐酸二甲双胍（C4H12ClN5）属双胍类降糖药物，本文首先通过对其进行全波段扫描，确定234nm作为其检测波长，因此时吸收最大；前期试验及文献调查显示[2]，由于本药物属盐类物质，分离过程极易出现拖尾或者双头峰，故而考虑加入缓冲盐，使其测定过程酸碱保持平衡态，利于测量及分离，经分析可知，在乙腈、磷酸二氢钾溶液缓冲盐条件下，所测色谱峰行较好，分离度高，故选择其为流动相。本组实验结果显示，高效液相法测定盐酸二甲双胍胶囊中盐酸二甲双胍含量准确性好、精密度高，方法重复性好，可考虑作为此类物质的检测方式。

参考文献

[1] 杨青. 高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量[J]. 中国药业， 2008， 17（19）：35-35.

[2] 周平， 童卉琦， 白金，等. RP-HPLC测定盐酸二甲双胍肠溶片的含量[J]. 中国执业药师， 2014（12）.