HPLC-MS/MS法检测中成药和食品中违法添加的10种降糖类药物

2016-07-11隋海山王立娟戚

中国医药指南 2016年1期

关键词：液相色谱降糖药质谱

隋海山王立娟戚威

（1 山东省潍坊市食品药品检验检测中心，山东潍坊 261041；2 潍坊市红十字中心血站，山东潍坊 261041）

HPLC-MS/MS法检测中成药和食品中违法添加的10种降糖类药物

隋海山1王立娟2戚威1

（1 山东省潍坊市食品药品检验检测中心，山东潍坊 261041；2 潍坊市红十字中心血站，山东潍坊 261041）

【摘要】目的建立快速、准确HPLC-MS/MS法测定中成药和食品中添加的10种降糖类药物。方法采用Waters Atlantis T3色谱柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）；用含0.01 mol/L的乙酸铵水溶液（A）-甲醇（B）为流动相，梯度洗脱，流速为0.3 mL/min进样量1 μL，选择ESI离子源、正离子扫描、多反应监测（MRM）方式检测，一级质谱、二级质谱，确定样品中是否添加了降糖类药物，并根据外标法计算添加药物的准确量。结果在上述色谱及质谱条件下，10种药物的分离度良好，方法检测限在0.6～30 ng/g，回收率91%～99%。结论该方法简便准确，灵敏度高，可作为保健品及中成药非法添加降糖类药物的测定方法。

【关键词】MRM；液相色谱；质谱；非法添加；降糖药

在日常工作中，食品和中成药中检出降糖类药物的现象日益突出，有的含量较高，有的含量较低，造假者利用患者充分信任食品和中成药的心理，肆意添加降糖类西药，给广大患者的健康带来严重威胁。本文用HPLC-MS/MS法检出了盐酸苯乙双胍、格列本脲、马来酸罗格列酮，从保留时间、一级质谱、二级质谱三个方面判断食品和中成药中是否添加降糖类药物，检出违法添加西药的种类同文献［1］报道的一致。

1 研究方法与结果

1.1 仪器、试剂试药：LC-20AD液相色谱仪-API4000+质谱仪，Thermo冷冻离心机，型号：ST-16R，Synthesis A10超纯水系统，XS-205DU电子天平（德国梅特勒公司），KQ-200KDE型高功率数控超声波清洗器（昆山超声波仪器有限公司）。

甲醇（色谱纯，默克公司）乙酸钠（色谱纯），实验用水为超纯水。

对照品盐酸苯乙双胍、格列本脲、盐酸二甲双胍、格列喹酮、格列吡嗪、盐酸吡格列酮、格列齐特、格列美脲、瑞格列奈、马来酸罗格列酮（中国食品药品检定院）。

1.2 溶液制备

1.2.1 对照品储备液：准确称取含盐酸苯乙双胍、格列本脲、盐酸二甲双胍、格列喹酮、格列吡嗪、盐酸吡格列酮、格列齐特、格列美脲、瑞格列奈、马来酸罗格列酮各10.0 mg，分别用甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，配成1 mg/mL储备液，于4 ℃下保存，使用前用甲醇稀释至所需浓度。

1.2.2 标准混合使用液1：分别准确吸取1.0 mL各对照品储备液于100 mL容量瓶中用甲醇定容。

1.2.3 标准混合使用液2：准确吸取1.0 mL标准混合使用液1于100 mL容量瓶中用甲醇定容至刻度。

1.2.4 供试品溶液：取本品10粒，倾出内容物，研碎，混匀，精密称取一次口服剂量的内容物，加甲醇25 mL超声处理20 min，静置，放冷，以8000 r/min离心15 min取上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤后，取0.1 mL置100 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，作为供试液。

1.3 色谱条件：参考相关文献［2］：采用Waters Atlantis T3色谱柱（2.1 mm× 100 mm，5 μm）；用含0.01 mol/L的乙酸铵水溶液（A）-甲醇（B）为流动相，梯度洗脱（0～30 min，30%～40% B，30～40min，40%→60% B，40～60 min，60%～70% B，60～70 min，70% B，70～72 min，70%～30%B，72～77 min，30%B；流速为0.3 mL/min进样量1 μL。

1.4 质谱条件：离子源为电喷雾电离源，采用正离子模式检测，CAD（喷撞气）：4 psi；CUR（气帘气）25 psi；GS1（喷雾气）65 psi；GS2（辅助加热气）65 psi；IS（离子化电压）5500 V；TEM（温度）600 ℃；采用多反应监测（MRM）。

1.5 方法与结果

1.5.1 线性关系及检出限：取各对照储备液，准确配制一系列不同浓度的混合标准溶液，重复进样测定3次，以各物质特征碎片离子峰面积平均值（Y）对被测组分的的质量浓度（X，μg/mL）进行线性回归，得回归方程、相关系数和线性范围及定量限。分别以信噪比（S/N）等于3和10为标准，测得10个待测组分的检出限及定量限，见表1。