纳他霉素与6种不同杀菌剂混配对平菇木霉M23的毒力比较

刘仁奎　刘斌

摘要[目的]明确纳他霉素与6种杀菌剂对木霉毒力的差异并比较纳他霉素与6种杀菌剂混配对木霉M23的毒力。[方法]采用菌丝生长速率法测定纳他霉素和6种不同杀菌剂以及纳他霉素与6种杀菌剂混配对木霉M23的室内毒力。[结果]6种不同杀菌剂对木霉的毒力不同，其EC50分别为0.448 4、0.709 9、1.390 8、8.648 3、12.448 1和18.185 6 mg/L；与6种杀菌剂相比，纳他霉素表现出较好的杀菌效果，其EC50为1.551 1 mg/L，与百菌清相近。混配试验结果表明，纳他霉素与百菌清以3∶1比例、与多菌灵以1∶6比例、与苯醚甲环唑以1∶6比例混配均具有最高的共毒系数，其值分别为250.020 0、373.990 3和189.194 4。[结论]纳他霉素与百菌清（3∶1比例）、多菌灵（1∶6比例）、苯醚甲环唑（1∶6比例）混配均具有较好的增效作用，可进一步用于生产实践。

关键词 纳他霉素；杀菌剂；农药混配；木霉

中图分类号 S482.2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2016）05-018-03

Abstract[Objective]The aim was to determine the toxicity difference of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride， and compare toxicity of mixture of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride M23.[Method]By the method of mycelium growing， the indoor toxicity of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride M23 was determined.[Result]The results showed that the 6 fungicides had different control efficiency， with their EC50 values of 0.448 4， 0.709 9， 1.390 8， 8.648 3， 12.448 1 and 18.185 6 mg/L； compared with the 6 fungicides， natamycin show good control effect with its value of 1.551 1 mg/L， similar to chlorothalonil. The mixprocess experiment showed obvious synergies， that the mixture of natamycin and chlorothalonil with ratio of 3∶1 had the highest cotoxicity coefficient of 250.020 0； natamycin and carbendazim with ratio of 1∶6 had the highest cotoxicity coefficient of 373.990 3； natamycin and difenoconazole with ratio of 1∶6 had the highest cotoxicity coefficient of 189.194 4.[Conclusion]The experimental results show that the three mixed proportions of the fungicides（natamycin：chlorothalonil=3∶1，natamycin：carbendazim=1∶6， natamycin：difenoconazole=1∶6） have good synergistic effect and could be used in further production.

Key words Natamycin； Fungicide； Mixed pesticides； Trichoderma viride

木霉（Trichoderma viride）属于半知菌亚门丝孢纲丝孢目粘孢菌类，是一类普遍存在的真菌，其孢子梗从菌丝上长出，在瓶梗式的小梗顶部产生分生孢子，分生孢子圆形或椭圆形，单细胞，淡绿色[1-2]。木霉在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上[2-3]。木霉是适应性很强的一种真菌，繁殖速度快，在食用菌栽培中能够污染整个菇包，通过分泌毒素，抑制、破坏食用菌菌丝细胞质生长，阻碍食用菌菌丝生长，且能生长在生长势较弱的菌丝体上，使组织细胞溶解死亡。木霉对蘑菇、香菇、平菇、银耳、木耳等多种食用菌菌种和栽培菇床都能侵染危害，导致菌种成品率降低和产量大幅度减少。木霉主要通过侵染食用菌的菌种、菌筒、栽培料和子实体，如香菇受害后菌柄和菌盖背面变褐腐烂，病部产生绿色霉层；银耳早期染病的子实体萎缩不长，后期感染的子实体逐渐腐烂，产量损失巨大[4]。因此，开展木霉防治研究十分必要。

使用现代杀菌剂防治植物病害是保证农作物高产、稳产的重要措施之一，但单一药剂的使用在病害防治方面不仅面临着杀菌谱小的问题，更重要的是由于长期单一使用某种杀菌剂，必将导致病害抗药性的产生[5]，而杀菌剂混配能够解决这些农药使用的不足[6]。多菌灵、百菌清已被广泛应用于食用菌生产中的病害防治[7]，多菌灵为苯并咪唑类杀菌剂，能干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂，起到杀菌作用，百菌清为取代苯类广谱性杀真菌剂，能与真菌细胞中的三磷酸甘油酸醛脱氢酶发生作用与该酶中含有半胱氨酸的蛋白质相结合，从而破坏该酶活性，使真菌细胞的新陈代谢受破坏而失去活性；苯醚甲环唑是由先正达公司开发的具有保护、治疗和内吸性的三唑类杀菌剂，属甾醇合成抑制剂，可阻止真菌的生长，对子囊菌亚门、担子菌亚门、半知菌亚门多个属病原菌引起的作物病害均有良好的保护治疗作用[8]；嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀菌农药，高效、广谱，对几乎所有的真菌界（子囊菌亚门、担子菌亚门、鞭毛菌亚门和半知菌亚门）病害如白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性；甲基硫菌灵是一种广谱性内吸低毒杀菌剂，具有内吸、预防和治疗作用，是由日本曹达株式会社研制开发出来，能够有效防治多种作物病害。纳他霉素是一种多烯大环内酯类抗真菌剂，能够专性地抑制几乎所有的霉菌和酵母菌等真菌，而对细菌和病毒无效。纳他霉素作为抗生素极安全，不具有急性毒性，通常用于食品的表面防腐，也被医学上用于治疗真菌感染。为明确纳他霉素与不同类型传统杀菌剂对木霉的药效差异，笔者研究了纳他霉素与百菌清、苯醚甲环唑、嘧菌酯、甲基硫菌灵、多菌灵溴菌腈6种杀菌剂单剂及混配对木霉的室内毒力。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株。

木霉M23由广西大学食用菌研究所分离获得，为木霉的一个亚种，对食用菌产生的病害较严重。

1.1.2 供试培养基。

马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂18 g，水1 L。

1.1.3 供试杀菌剂。

98%纳他霉素，新疆梅花氨基酸责任有限公司；98%多菌灵原药，江苏省江阴苏利化学股份有限公司；97.2%百菌清原药，江苏省江阴苏利化学股份有限公司；98%溴菌腈原药，江苏省盐城经纬化工有限公司；95.5%苯醚甲环唑原药，浙江禾本科技有限公司；98%嘧菌酯原药，浙江省湖州南浔农惠达化工有限公司；98%甲基硫菌灵原药，安徽广信农化股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 室内毒力测定。

采用菌丝生长速率法[9]。根据预试验结果确定药剂试验浓度并配制成适量的各供试药剂母液，按量加入熔化并冷却至50 ℃左右的PDA培养基中，配制成不同浓度的加药培养基。纳他霉素的浓度梯度设置为0.500、1.000、1.500、2.000、2.500 mg/L；嘧菌酯、溴菌腈、甲基硫菌灵的浓度梯度设置为1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 mg/L；百菌清的浓度梯度设置为0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；苯醚甲环唑的浓度梯度设置为0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg/L；多菌灵的浓度梯度设置为0.250、0.500、1.000、2.000、4.000 mg/L。将纳他霉素与不同杀菌剂按A（6∶1）、B（3∶1）、C（1∶1）、D（1∶3）、E（1∶6）质量比进行混配，其中纳他霉素与嘧菌酯混配的浓度梯度设置为0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；纳他霉素与溴菌腈的混配浓度梯度设置为0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；纳他霉素与多菌灵的混配浓度梯度设置为0.250、0.500、1.000、2.000、4.000 mg/L；纳他霉素与百菌清的混配浓度梯度设置为0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；纳他霉素与苯醚甲环唑混配浓度梯度设置为0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg/L；纳他霉素与甲基硫菌灵混配浓度梯度设置为1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 mg/L，各处理3次重复，以蒸馏水为对照。将木霉M23置于无药的PDA培养基上，25 ℃培养3 d后，从菌落边缘打取直径为0.5 cm的菌碟，菌丝朝下接种于系列含药PDA平板中央，每处理设5次重复，以不含药的平板为对照，3 d后采用十字交叉法测量各处理菌落直径。

1.2.2 杀菌剂混配剂效果评价。

根据不同处理中木霉M23菌落直径的平均净增长直径计算抑制率，利用 DPS 软件，分别建立药剂质量浓度自然对数值（x）和抑制率几率值（y）之间的回归关系，计算各供试药剂的毒力回归方程、EC50、相关系数及其95%置信区间[10-12]。

混配剂作用效果评价是依据共毒系数（CTC）。各药剂毒力指数（TI）、复配剂实际毒力指数（ATI）、理论毒力指数（TTI）和共毒系数（CTC）计算参照Sun等[13]的方法进行。

TI=标准药剂的EC50/供试药剂的EC50×100

ATI=标准药剂的EC50/复配剂药剂的EC50×100

TTI=TI（A）×A在混剂中所占百分比+TI（B）×B在复配剂中所占百分比

CTC=[混剂实际毒力指数（ATI）/混剂理论毒力指数（TTI）]×100

CTC≥170为明显增效；120≤CTC<170为略有增效；70≤CTC<120为相加作用；CTC<70为拮抗作用。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂单剂对木霉M23的毒力

由表1可知，苯醚甲环唑对木霉M23的抑制作用最强，EC50是0.448 4 mg/L，其次是百菌清，EC50是1.390 8 mg/L，随后依次为溴菌腈、嘧菌酯、甲基硫菌灵，它们的EC50分别为8.648 3、12.448 1、18.185 6 mg/L，抑菌效果较弱；纳他霉素对木霉M23的EC50则为1.551 1 mg/L，抑菌效果明显。

由于百菌清、多菌灵与苯醚甲环唑的杀菌效果较高，并且与纳他霉素的杀菌机理皆不同，所以选择纳他霉素与百菌清、多菌灵与苯醚甲环唑进行后续混配试验。

2.2 杀菌剂混配对木霉M23的毒力

由表2可知，混配组合B、C、D、E的EC50较低，有较好的抑菌效果；组合A的EC50较大，其抑菌效果较差。组合B、C的共毒系数分别为250.020 0、219.270 0，增效明显；组合A、D略有增效，组合E有拮抗作用。

由表3可知，混配组合的EC50均较低，抑菌效果均较好；组合E增效明显，组合D略有增效，组合A、B、C的共毒系数分别是60.826 7、62.680 9、138.236 8，都为拮抗作用。

由表4可知，混配组合的EC50均较低，抑菌效果较好；组合E的共毒系数为189.194 4，明显增效，组合D略有增效，组合A、B、C都产生拮抗作用，共毒系数分别为51.821 1、90.475 5、87.644 2。

3 结论与讨论

该研究采用菌丝生长速率法测定了纳他霉素与不同杀菌剂对木霉M23的毒力。结果表明，纳他霉素与6种杀菌剂对木霉M23均有一定的杀菌效果，且随着浓度的升高效果增强，毒力最好的是苯醚甲环唑，其次是多菌灵、百菌清、纳他霉素，而溴菌腈、甲基硫菌灵、嘧菌酯对木霉M23的毒力均较差，由于纳他霉素对木霉具有较好的杀菌作用，且其本身为较安全的抑菌杀菌剂，所以做进一步的杀菌剂混配筛选试验。不同杀菌剂室内毒力试验结果中的斜率越大，表明病原菌对该药剂反应的灵敏度越高，即杀菌剂的抑菌效果是随着杀菌剂质量浓度的增加而提高的。结合各供试药剂的EC50发现：与其他6种杀菌剂相比，木霉M23对纳他霉素的敏感性最高，且相对防效也较好，具有很好的应用前景。混配试验表明，纳他霉素与百菌清在B（3∶1）、C（1∶1）混配比例下的增效作用明显，可作为2种药剂混配的依据；纳他霉素与多菌灵以及纳他霉素与苯醚甲环唑在E（1∶6）混配比例下的增效作用明显，可作为杀菌剂混配的依据。

室内毒力试验结果表明，与常规农用杀菌剂相比，纳他霉素具有良好防效，且与几种杀菌剂按一定比例混配也具有良好防效，为纳他霉素的实际应用提供了借鉴。室内毒力测定是在相对均一的条件下进行的，生产上实际用药会因环境因素而出现与室内试验不同的结论，有研究表明多菌灵的室内毒力测定与田间药效结果存在差别[14]，所以需要进一步试验对结果室内毒力测定进行验证。木霉为半知菌亚门真菌，与平菇及其他食用菌品种担子菌亚门的生长特性有差异，也需进一步对包括平菇在内的其他食用菌品种做进一步的安全性评价。

参考文献

[1]吕作舟.食用菌栽培学[M].北京：高等教育出版社2006：372.

[2]徐同，钟静萍，孟征.木霉在植病生防中的地位[C]//第三届全国真菌地衣学术讨论会学术报告及论文摘要汇编.北京：中国真菌学会，1990：57-61.

[3]徐同.木霉分子生物学研究进展[J].真菌学报，1996，15（2）：143-148.

[4]张绍升，罗佳，林时迟，等.食用菌病虫害诊治图谱[M].福州：福建科学技术出版社，2004.

[5]祁之秋，王建新，陈长军，等.现代杀菌剂抗性研究进展[J].农药，2006（10）：655-659.

[6]刘国镕.研制杀菌剂混剂的基本原则[J].农药科学与管理，1992（3）：5-10.

[7]PARK M S，BAE K S，YU S H.Molecular and morphological analysis of Trichoderma isolates associated with green mold epidemic of Oyster mushroom in Korea[J].Journal of Huazhong Agricultural University，2004，23（1）：157-164.

[8]刘长令.世界农药大全：杀菌剂卷[M].北京：化学工业出版社，2005：122-126.

[9]慕立义.植物化学保护研究方法[M].北京：中国农业出版社，1994：76-81.

[10]叶佳，张传清.葡萄炭疽病菌对甲基硫菌灵、戊唑醇和醚菌酯的敏感性检测[J].农药学学报，2012，14（23）：111-114.

[11]邢家华，朱冰春，袁静，等.新型杀虫剂氯氟氰虫酰胺对不同鳞翅目害虫的毒力和田间防效[J].农药学学报，2013，15（2）：159-164.

[12]唐启义，冯明光.实用统计分析及其DPS数据处理系统[M].北京：科学出版社，2007：418-449.

[13]SUN Y P，JOHNSON E R.Analysis of joint action of insecticides against house files[J].Journal of economic entomology，1960，53（5）：887-892.

[14]许文耀，兀旭辉，林成辉.香蕉枯萎病防治剂的筛选[J].福建农林大学学报，2005，34（4）：420-424.