病毒感染免疫检验的研究进展

万来春

【摘 要】 病毒感染免疫检验对疾病诊断、预防接种及治疗、发病机制的判断等具有非常重要的作用。由于免疫检验不仅能够明确待检物病毒类型，且对特定抗体浓度也可进行测定，因此它在病毒检验中占据着非常重要的地位。本研究基于早期病毒检验技术到新兴病毒检验技术的变更，对病毒感染免疫检验的研究进展进行了分析，以期对病毒检验技术的改进有所帮助。

【关键词】 病毒； 机制； 感染； 免疫检验

[Abstract] Virus infection immunity test plays a very important role in disease diagnosis， vaccination and treatment， judgment of pathogenesis. Immune test can not only determine the virus type of analyte， and it can be used for the determination of specific antibody concentration， so it occupies a very important position in virus testing. This study is based on the change from early virus detection technology to new virus detection technology， analysis of the research progress of virus infection immunity test， in order to improve the virus detection technology.

[Key words] Virus； Mechanism； Infection； Immunity test

大量实验证实，病毒感染是许多疾病的主要诱发因素[1-2]。由于病毒通常于人体细胞内寄存、繁殖、变异，因此采用传统检验方法根本不能达到对病毒感染检验与疾病诊断的基本要求。随着医疗技术水平的提升，免疫检验法的出现有效地弥补了传统检验方法的弊端。有研究发现，通过免疫检验法对人体免疫细胞数量、抗体类型及浓度等进行测定，可在较短时间内明确病毒种类，对疾病诊断、免疫治疗等极具意义[3]。

1 病毒损害机体的机制

病毒具有结构简单、体积微小等特点，可损坏人体宿主细胞功能，从而诱发免疫病理变化，主要表现在以下两个方面：第一，免疫抑制。宿主细胞感染病毒后，会减少人体免疫分子的合成，损坏机体免疫应答系统。第二，免疫损害。宿主细胞遭到病毒侵袭后，会诱发病理性免疫性应答作用，导致人体非免疫组织与脏器系统损伤。

病毒感染引发免疫损害的作用机制与以下几点密切相关，具体为：1）宿主细胞感染病毒后，会减少人体免疫分子的合成，损坏机体免疫应答系统，从而对免疫系统产生抑制作用，引发宿主细胞感染。2）宿主细胞遭到病毒侵袭后，会诱发病理性免疫性应答作用，导致人体非免疫组织与脏器系统损伤机体。3）蛋白质表达主要由病毒合成，在细胞毒作用的介导下，可导致细胞损伤。4）特异性CTL可对此类膜抗原进行识别，从而提升病毒杀伤力。5）基膜与血流速度较慢区域沉积有大量的病毒抗原及抗体，可对基膜及血流区域造成严重损害。6）补体被激活后，会引发一系列炎性反应，使细胞受损。7）交叉免疫反应造成的组织、器官损伤。

2 早期病毒免疫检验方法

早期病毒免疫检验方法主要包括ELISA、免疫荧光法、RIA、血细胞凝集法等，由于早期检测技术水平有限，因此这些方法多操作繁琐、特异性与敏感性较差、用时长、安全性低。

2.1 ELISA

该方法产生于酶联吸附试验中，称为酶联免疫法。酶联免疫法是一种结合了酶催化放大与免疫特异性的检验技术，主要由捕获法、竞争法、间接法及双抗夹心法等构成，其中在早期病毒免疫检测中应用最为频繁的方法即为双抗夹心法。大量研究证实，酶联免疫法是用于检验猪伪狂犬病、植物病毒、丙型肝炎病毒、蓝舌病等病毒的标准方法[4-5]。

2.2 免疫荧光法

该方法是属于一种免疫标记检验法，主要包括了荧光抗体、荧光抗原两种技术。由于在免疫荧光试验中产生的荧光色素不仅可与抗体球蛋白相结合，还可与蛋白质相结合，因此可用于对抗体、抗原的定位和检测。免疫荧光法虽具有一定的灵敏性、特异性及高效性，但因其实验操作环节较多，过程繁琐，因此检验结果的客观性有失偏颇。

2.3 RIA

RIA即为放射免疫技术，由二十世纪 60年代德国的一位科学家所发明，属于一种体外微量检验技术，主要通过联合2种抗原（未经同位素标记、经标记），使其与抗体相结合并产生竞争抑制反应，从而获取试验结论。该方法具有操作简便、特异性高、灵敏性强等特点，但由于其所产生的放射物质不仅可对参与试验者的健康造成危害，还易受外界环境干扰而发生假阳性反应，因此在病毒感染免疫检验使用中受到了一些限制[6]。通常放射免疫技术多用于对乙型肝炎病毒的检验分类。

2.4 血细胞凝集法

多项研究证实，部分病毒存在促进红细胞凝集的性能，而此种性能则被称之为血凝[7]。血细胞凝集法就是基于此种特性所研制出的一种病毒检验技术。对此种病毒检验技术具有辅助作用的血凝抑制试验也是基于病毒促进红细胞凝集的能力可能被相应抗体抑制的这种特性而研制出来。血细胞凝集法仅适用于对梅毒的确诊[8]，因此多用于对梅毒螺旋体的检测，但对梅毒疗效的检测却并不适用。

2.5 中和试验法

该方法主要由固定血清-稀释病毒法、固定病毒-血清稀释法两部分组成，可用于检测病毒感染力。通过分析与血清结合后的病毒所剩余的感染力，来判断免疫血清对病毒感染所产生的抑制能力。该方法在临床上多用于对病毒抗原性与类型进行鉴别。

2.6 免疫电泳法

该方法结合了抗原抗体带电的作用原理，使带电物体在电场的作用下进行运动。试验者通过对该物质的数量、运动的快慢等进行观察，来判断病毒类型[9]。

2.7 其他检验技术

除了ELISA、免疫荧光法、RIA、血细胞凝集法、中和试验法及免疫电泳法之外，还有对流电泳法、沉淀法等也可用于测定病毒感染，但这些检验技术程序复杂或结果客观性差等原因，在临床上应用较少。

3 新兴病毒感染免疫检验方法

随着临床检验技术的发展，发光免疫鉴定技术、胶体金技术等新兴病毒检验方法的出现及应用，使得临床病毒感染免疫检验结果更为精准。与早期病毒感染免疫检测方法相比，新兴病毒检测方法具有操作简便、高特异性与灵敏性、用时短、安全性强等优点，更能满足临床检验的需求。

3.1 发光免疫鉴定

该技术是结合了发光系统与免疫反应用于进行抗原、抗体检验的新型技术，具有高特异性、高敏感性等优点。和荧光免疫法不同的是，该方法结合了发光剂与发光系统，应用的标记物为发光剂，且常于安全环境下进行病毒感染免疫检验，所以该技术具有高稳定性、无毒无害性的特点。发光免疫鉴定技术用于检测病毒时，耗时非常短，可快速检验病毒类型，明确疾病诊断，是用于临床检验的优质技术，具有非常好的发展前景[10]。

3.2 胶体金技术

该技术的示踪物质为胶体金，是用于对抗体、抗原进行标记、检验的新型技术，不仅安全、操便，且具有良好的敏感性与特异性。当前，在临床中多用于检测血清内的甲胎蛋白、艾滋病病毒。

3.3 重组免疫试验

重组免疫试验主要通过使抗原以横线条式吸附于含有硝酸纤维素膜的膜条上，并于长条凹槽反应盘内和标本抗体反应、洗涤，加入底物显色，观察条带可发现血清内存在的特异性抗体，从而对抗体效价进行估计的一种检验技术。该方法非常适用于对复杂病原体抗体的检验。

笔者结合临证分析发现，重组免疫试验可用于检测丙肝抗体、艾滋病病毒抗体。有研究表明，该方法还可用于对动物口蹄疫病毒的检测[11]。

4 结语

以往临床多用传统检验技术进行病毒感染免疫检验，由于其特异性与灵敏性较弱，因此缺乏一个相对客观的检验结果。随着科技的进步，为临床病毒感染检验技术的发展带来了新的契机，越来越多的新兴技术逐渐将传统技术所取代。由于新兴的病毒感染免疫检验技术具有高效、简便、安全、灵敏等特点，因此得到了广大试验人员的肯定，但不可忽略的是，仍有各种问题存在于整个检验过程中，这主要由参与者本身的差异性与生物学差异性所致。此外，一些技术上的误差、标本选取时间、操作方法不当等也会对检验结果产生影响。因此，我们应严格控制病毒感染免疫检验过程与各种因素，以取得一个客观的检验结果。

参考文献

[1] 王博，马昉.产前检查免疫检验项目应用的临床意义[J].中国卫生标准管理，2015，10（06）：33-34.

[2] 刘丹青，李黎，王斌冰.中国首例免疫缺陷疫苗衍生脊髓灰质炎病毒病例的流行病学调查分析及其控制对策[J].中国计划免疫，2009，18（06）：459-463.

[3] 沈家瑜，徐德顺，韩建康.诺如病毒检测技术研究应用进展[J].中国卫生检验杂志，2014，20（13）：1974-1976.

[4] 张浩.登革病毒全基因序列的时空特点和登革热以及重症登革的病原学诊断、临床特点和预后预测分析[D].南方医科大学，2015.

[5] 王清华.刍议病毒感染免疫检验的研究分析[J].中国医药指南，2015，109（32）：290-291.

[6] 何惠，周迎春，庞志宇，等.化学发光免疫测定在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用[J].国际检验医学杂志，2011，32（13）：1469-1472.

[7] 朱丽坤.不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果的评价分析[J].按摩与康复医学，2011，29（01）：22-23.

[8] 杨闽楠.RNAi靶向PRRSVN基因及GP5基因ADE表达缺失重组腺病毒免疫原性研究[D].吉林大学，2014.

[9] Khalid Hattaf，Noura Yousfi，Abdessamad Tridane.Stability analysis of a virus dynamics model with general incidence rate and two delays[J].Applied Mathematics and Computation，2013，07（16）：1109-1112.

[10]孟繁君，张成磊，代超，等.乙型肝炎病毒血清标志物组合模式的探讨[J].宁夏医学杂志，2015，10（04）：21-23.

[11]Xiangyun Shi，Xueyong Zhou，Xinyu Song.Dynamical behavior of a delay virus dynamics model with CTL immune response[J].Nonlinear Analysis：Real World Applications，2009，14（03）：221-224.