组织因子途径抑制物—2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈

[摘 要] 目的：探讨TFPI-2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中表达。方法：选取2013年1月—2015年12月本院诊治的宫颈癌患者45例、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者45例以及正常宫颈组织45例的病理标本，采用免疫组化检测方法，测定3组标本中TFPI-2的表达情况，表达量与宫颈癌分期、分型、淋巴转移的关系。结果：正常宫颈患者、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者、宫颈癌患者组织病理标本中TFPI-2的表达逐渐下降，3组间比较差异有统计学意义（P < 0.05）；宫颈癌中TFPI-2的表达与其FIGO分期和淋巴结转移有关，肿瘤越晚期，TFPI-2的表达越低（P < 0.05）；但是与其病理分类和分化程度无关（P>0.05）。结论：TFPI-2的表达在宫颈癌患者中显著降低，其含量降低可能是导致宫颈癌发生的原因之一。

[关键词] TFPI-2；宫颈癌；免疫组化

中图分类号：R737.33 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2016）03-079-03

DOI：10.11876/mimt201603029

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，发病可能与HPV感染、分娩次数、初产年龄小以及性生活紊乱等多种因素有关[1]。随着对肿瘤分子水平发病机制的不断研究，参与宫颈癌病理机制的其他因素也在不断被揭示。TFPI-2（组织因子途径抑制物-2）因其最早是从胎盘中分离提取故又称为胎盘蛋白-5[2]，文献报道，TFPI-2与肾癌[3]、肺癌[4]、肝癌[5]等恶性肿瘤的发生发展相关。本研究观察宫颈癌、宫颈上皮内瘤变（CIN）以及正常宫颈的组织病理标本中TFPI-2的表达，探讨TFPI-2是否参与宫颈癌的发生发展。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月—2015年12月本院诊治的宫颈癌患者45例、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者45例以及正常宫颈组织45例的病理标本。宫颈癌患者取材前未行手术或放化疗；健康对照组排除妊娠以及哺乳期妇女。3组患者的年龄、孕产等一般资料相比，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 检测方法

取宫颈组织，甲醛固定、脱水、浸蜡、包埋，，连续切片厚度4μm。切片给予常规脱蜡、水化处理，即：二甲苯3次，20min/次；100%酒精3次，100min/次；之后98%酒精、80%酒精、70%酒精各10min。蒸馏水、PBS液冲洗3次，5min/次；将切片置入枸橼酸缓冲液中进行加热，沸腾后停止加热，5min之后重复加热，之后在室温下进行冷却；用PBS溶液冲洗3次，5min/次；在37℃的温度下，使用3%的H2O2孵育20min，阻断内源性酶的活性；再次用PBS溶液冲洗3次，5min/次；滴加山羊血清封闭15mim，除去多余液体后加入浓度为1：160的TFPI-2抗体，在4℃的温度下孵育过夜；复温并在PBS冲洗后加入生物素标记的二抗IgG工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液冲洗3次，5min/次；加入辣根标记的链霉卵白素工作液，在37℃下孵育15min；用PBS溶液冲洗3次，5min/次；DAB（联苯胺）显色，在室温条件下显色，显微镜下控制标本的染色程度；在苏木素进行复染约20～30s后使用清水进行冲洗、返蓝；使用梯度酒精进行脱水，即：70%酒精、80%酒精、98%酒精、100%酒精脱水三次，每次5min；二甲苯进行透明，3次，5min/次。结束后使用中性树胶进行封片处理，放于显微镜下进行观察。

1.3 结果判读

病理科医生在200倍镜下，随机选择5个视野观察，阳性结果为胞质被染为棕黄色。其中不表达是阴性，弱阳性为小于10%、阳性为10%～50%、次强阳性为50%～70%、强阳性为75%～100%。

1.4 统计学分析

使用SPSS 17.0，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用率表示，采用χ2检验，等级资料采用秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组患者宫颈组织中TFPI-2的表达情况

免疫组化结果显示：正常宫颈患者、宫颈上皮内瘤变（CIN）患者、宫颈癌患者组织病理标本中TFPI-2的表达逐渐下降，3组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。具体结果见表1。

2.2 宫颈癌样本TFPI-2的表达与病理类型、分化程度、分期以及淋巴结转移的关系

宫颈癌中TFPI-2的表达与其FIGO分期和淋巴结转移有关，肿瘤越晚期，TFPI-2的表达越低，差异有统计学意义（P<0.05）；但是与其病理分类和分化程度无关，差异无统计学意义（P>0.05）。具体结果见表2。

3 讨论

3.1 TFPI-2概述

TFPI-2是一种丝氨酸蛋白酶家族抑制剂，基因位于染色体7q22，全长7Kb，其编码产物的相对分子质量为32000，广泛分布于人体细胞内[6]。TFPI-2可在内皮细胞、表皮细胞中分泌合成，在胎盘组织、骨骼肌、肝脏、血管内皮细胞中高度表达[7]。研究发现，恶性肿瘤患者发生了蛋白质的水解失调。Chand 等[8]进行体外实验发现TFPI-2可抑制纤溶酶、基质金属蛋白酶等多种蛋白酶。TFPI-2可以显著的抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纤溶酶的作用，从而参与到机体的组织发生、纤溶、胚胎发育及肿瘤侵袭等过程中[9]。在许多肿瘤中都能够发现TFPI-2基因的缺失。

3.2 TFPI-2的作用机制及与宫颈癌的关系

宫颈癌导致患者死亡的一个主要原因就是癌细胞的侵袭以及远处转移，在宫颈癌发生侵袭或者远处转移时，需要将基底膜、ECM进行降解[10]。在整个过程中，肿瘤细胞分泌的丝氨酸蛋白酶起着重要的作用。作为丝氨酸蛋白酶抑制剂，TFPI-2可以通过以下方面抑制宫颈癌的侵袭和转移：1）抑制、降解MMP（基质金属蛋白酶），肿瘤细胞可以分泌MMP并与ECM中的生长因子结合，改变基质的微环境，不仅促进肿瘤的增生，还会使MMP的表达、分泌上调。而TFPI-2可以与MMP及其前体结合，竞争性的抑制MMP和ECM的结合，从而保证ECM结构的完整性，发挥抑制肿瘤的侵袭、转移作用[11-12]。2）抑制肿瘤新生血管的形成，一方面可以抑制MMP的表达和纤溶物质，增加其抑制物的功能活性起作用；另一方面可以使IL-8的表达水平和血管生成因子的表达下调，发挥抑制血管生成的作用[13]。3）促进癌细胞的凋亡，TFPI-2可以通过降解丝氨酸蛋白产物，与凋亡受体结合，导致肿瘤细胞的死亡[14]。

本研究结果表明，宫颈癌中TFPI-2的表达与其FIGO分期和淋巴结转移有关，但是与其病理分类和分化程度无关（P>0.05），推测宫颈癌中TFPI-2表达可能作为判断患者的病情进展以及预后的指标。可在后续实验中进行进一步研究。

参 考 文 献

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