胃肠道间质瘤病理及转移灶免疫组织化学表达

徐志强　唐大荣

[摘 要] 目的：利用免疫组化检测CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100、p53、Ki-67、PCNA等蛋白在胃肠道间质瘤（GIST）中的表达及临床意义。方法：对89例确诊为GIST的石蜡标本，运用免疫组织化学方法检测CD117、CD34、DOG-1、SMA等蛋白表达，对出现肝转移病例，对比原发灶和转移灶的p53、Ki-67、PCNA蛋白的表达。结果：89例 GST中 CD117、CD 34 、DOG-1、SMA 、S-100 的阳性率分别是 95.5% （85/89）、 91.01% （81/89 ）、 37.1%（33/89）、23.5%（21/89）、 14.6% （13/89）。转移灶中的Ki-67、PCNA、p53蛋白表达量明显增加（P<0.05）。结论：CD117、CD34、DOG-1、SMA对GIST具有诊断和鉴别意义；p53、Ki-67、PCNA对GIST判断预后有一定价值。

[关键词] 胃肠道间质瘤；病理

中图分类号：R735.2 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2016）03-073-03

[Abstract] Objective： Using immunohistochemical technique to to detect CD117、CD34、Dog-1、SMA、S-100、p53、Ki-67、PCNA in gastric stromal tumor （GIST）. Methods： Detected 89 cases.To compare the expression of p53、Ki-67、 PCNA of primary foci and metastatic foci. Results： The positive expression rate of CD117， CD 34， Dog - 1， SMA， S-100 was 95.5% （85/89）， 91.01% （81/89）， 37.1% （33/89）， 23.5% （21/89）， 14.6% （13/89）.In the metastatic foci，the expression of Ki-67/PCNA/p53 protein was significantly increased （P<0.05）. Conclusion：CD117， CD34， Dog-1， SMA have diagnostic of GIST.p53， Ki - 67， PCNA reflect the prognosis of GIST.

[Key words] gastric stromal tumor； pathological

胃肠道间质瘤是起源于中胚层的间质肿瘤。1983年，Mazurt等[1]运用电镜技术发现胃肠道间叶肿瘤无平滑肌等超微结构，运用免疫组织化学法进一步研究，发现这组肿瘤无肌性或神经分化特征，而是一种非定向分化的间质细胞，于是将其命名为胃肠间质瘤（GIST）。1998年，Hirota等[2]发现GIST能特异性表达标记物KIT蛋白（CD117 ），而KIT蛋白表达来源于c-kit原癌基因突变。2003年，Heinrich等[3]发现部分GIST有血小板衍生生长因子受体α（plate let derived growth factor receptor alpha，PDGFRA）基因突变。本文利用免疫组织化学法检测我院89例组织病理明确的胃肠道间质瘤病例的CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100表达情况，分析上述指标对GIST的诊断价值。

大量报道指出[4-6]，GIST预后极差，40%～90%的手术病人出现术后复发和转移的症状。而肿瘤抑制因子（53）、细胞增殖核抗原（PCNA）及细胞增殖指数（Ki-67）这三个蛋白指标与GIST的预后密切相关。在收集的89例病例中，5例发生肝转移，运用免疫组织化学方法对比5例原发灶和转移灶的p53、Ki-67、PCNA蛋白的表达，了解这些指标对GIST预后判断价值。

1 材料和方法

1.1 标本来源

收集我院从2013年1月至2015年6月期间临床资料完整、经手术和病理检查诊断明确的GIST 病例89例。记录患者年龄、性别、肿瘤部位、 肿瘤大小、 肿瘤有无转移等基本资料，GIST病理诊断由两位病理医师复阅切片，不一致病例由第三名高年资医师评估，讨论达成共识。

1.2 材料及免疫组织化学实验方法

CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100、p53、Ki-67等抗体及柠檬酸盐修复液购自福州迈新生物技术有限公司；DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物公司。

免疫组化步骤为1）脱蜡和水化；2）抗原修复；3）免疫组织化学染色， 3%H2O2滴加在组织上，室温静置10min；PBS洗3次各5min；滴加正常山羊血清封闭液，室温20min；滴加Ⅰ抗50μL， 4℃过夜；PBS洗3次各5min；滴加Ⅱ抗50μL，37℃20min；PBS洗3次各5min；DAB显色2～3min，在显微镜下掌握染色程度；自来水冲洗5min；苏木精复染3min，盐酸酒精分化3s；自来水冲洗10min；脱水、透明、封片、镜检。4）结果判读标准为CD117、CD34、SMA、S-100、p53、Ki-67、PCNA以细胞核内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞；DOG-1以胞浆出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性结果的判断标准按照染色程度和显色细胞的数量结合进行归类：细胞显色比例 < 5%（-）；细胞显色的比例在 5%～25%之间，呈现为淡黄色（+）；细胞显色的比例在25%～50%之间，呈现为黄色（++）；细胞显色的比例 > 50% ，呈现棕黄色（+++）。

1.3 统计学处理

使用SPSS11.0软件系统，计数资料进行χ2检验或Fisher`s确切概率法检验，相关比较采用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 原发灶中CD117、CD 34 、DOG-1、SMA 、S-100

表达

免疫组织化学结果（图1）显示，在89例 GIST中 CD117、CD 34、DOG-1、SMA、S-100 的阳性率分别是 95.5% （85/89）、 91.01% （81/89 ）、 37.1%（33/89）、23.5%（21/89）、 14.6% （13/89）。可见CD 117和CD 34 在GIST组织中阳性表达较高，而肌源性 SMA 或者神经源性肿瘤标记物S-100 在GST中表达较低。

2.2 原发灶、转移灶中p53、PCNA、Ki-67表达

免疫组织化学结果（图2）显示，p53、PCNA蛋白在原发部位中不表达，在转移灶中表达量明显增加（P<0.05）；在原发部位Ki-67增殖指数约13%，在转移灶中增加到约89%（P<0.05）。

3 讨论

胃肠道间质瘤最常见发生部位为胃（60%），其次为小肠（30%）、十二指肠（5%）、大肠（4%）[7]。临床特征以消化道出血、腹痛、肿瘤阻塞为主。GIST组织病理学分型可以分为3种[8]：梭形细胞型、上皮细胞型、混合型。梭形细胞型约占70%，上皮细胞型约占20%，混合型约占10%。

目前认为GIST很大程度是由于C-kit基因发生突变引起。C-kit基因是酪氨酸激酶受体，编码CD117蛋白。GIST患者C-kit基因外显子突变，导致基因过表达，从而使CD117蛋白表达增加。CD34 蛋白是骨髓造血前体细胞的特殊性抗原，在原始造血干细胞、内皮细胞、肌纤维母细胞都可以看到阳性表达。本组实验，89例GIST患者中CD117、CD34的阳性表达率高，而肌源性的SMA和神经源性肿瘤标记物S-100阳性表达率低。CD117阳性、CD34阳性可以作为GIST诊断依据[9]，而SMA和S-100低表达可以用来排除平滑肌源性肿瘤、神经源性肿瘤。

然而在实验中我们观察到，C-kit仍有5%左右的阴性表达率。C-kit阴性通常与PDGFRA相关基因突变相关。Rizzardi C等[10]提出C-kit阴性的GIST，存在PDGFRA基因14外显子缺失，导致疾病发生。但是膜通道蛋白DOG-1蛋白[11-12]在C-kit阴性GIST中可以表达[13]。DOG-1的免疫组织化学在瘤细胞的胞浆和胞膜均有表达，因为敏感性和特异性很高，DOG-1在GIST诊断中越来越受重视。本研究表明，DOG-1可以作为C-kit阴性的胃肠道间质瘤的一个重要诊断指标。

胃肠道间质肿瘤的预后差，易发生转移[14-15]，P53与PCNA在转移灶的表达量明显增加预示着GIST预后差。原因可能是p53调控cyclin依赖激酶抑制因子（p21），而p21与PCNA结合抑制PCNA的活性。当GIST发生恶性转移时，p53表达增加，打乱这条通路，同时直接激活PCNA，从而促进细胞增殖。

Ki-67[16]作为增殖指数，与细胞有丝分裂密切相关。有观点认为，在判定GIST预后因素中，Ki-67蛋白比PCNA更具特异性和准确性。然而，Ray等[17]提出相反意见，他们认为对于GIST预后判断，PCNA更具优势。从本实验结果看，PCNA和Ki-67在转移灶中表达均增加，对预测疾病的复发和患者生存率均具有一定价值。但是对PCNA和Ki-67 在临床应用的优先级，仍存在争论。

总之，GIST在形态学上显示为非定向性肿瘤，因此准确诊断是一个复杂过程。借助于免疫组织化学，通过检测CD117、CD34、DOG-1、SMA、S-100等蛋白指标可以明确GIST诊断。p53、Ki-67、PCNA蛋白的高表达可以直接反映GIST预后，为临床治疗提供参考。

参 考 文 献

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