踝蛋白在大肠癌中的表达及临床意义

郭宏华　高　申　王　海　何成彦　李玲霞

(吉林大学中日联谊医院，吉林　长春　130033)

踝蛋白在大肠癌中的表达及临床意义

郭宏华高申王海何成彦李玲霞

(吉林大学中日联谊医院，吉林长春130033)

〔摘要〕目的探讨踝蛋白(Talin)在大肠癌组织及癌旁组织中的表达及意义。方法采用二维色谱与质谱联用技术鉴定大肠癌组织及癌旁组织的差异蛋白，并用免疫印迹验证其表达情况。结果试验筛选出大肠癌组织与癌旁组织的差异蛋白44个，其中23个下调蛋白。结论Talin在大肠癌组织中表达下调，可作为研究大肠癌发生机制指标之一。

〔关键词〕大肠癌；Talin；二维色谱与质谱联用技术

大多数大肠癌(CRC)患者在就诊时已经出现远处转移，导致患者治疗失败和死亡的主要原因之一是侵袭和转移〔1〕。因此，早发现、早诊断及早治疗对改善患者预后具有非常重要的意义。本研究通过检测踝蛋白(Talin)表达水平，探讨该蛋白在诊断CRC中的准确性，为临床中CRC筛查提供新的检验指标。

1材料与方法

1.1对象收集佳木斯大学附属第一医院接受手术治疗的CRC患者65例的肿瘤组织标本及距离肿瘤组织边缘10 cm以上的上端癌旁正常组织标本。患者术前未接受任何治疗，病理检查证实为Duck C期腺癌。手术即时取材，冲洗，液氮速冻，-80℃保存。

1.2方法从采用二维色谱与质谱联用技术分离并鉴定出的CRC组织及癌旁组织的44个有显著差异的蛋白质中选择Talin做免疫印迹，进一步验证准确性。

1.3主要试剂N,N,N′,N′-四甲基乙二胺(TMED)、十二烷基磺酸钠(SDS)、溴酚蓝、考马斯亮蓝、苯甲基磺酰氟(PMSF)购于Sigma公司。碘代乙酰胺(IAM)、IPG预制胶条、矿物油、蛋白质定量试剂盒(RCDC Protein Assay Kit)购于Bio-Rad公司。二硫代苏糖醇(DTT)、TPCK修饰的测序级胰酶购自Promeg公司。Agilent 1200高效液相色谱仪购自美国Agilent公司，LTQXL离子肼质谱仪购自美国Thermo Fisher公司。

1.4统计学处理二维色谱与质谱联用图谱依据SEQUEST算法，采用SPSS11.0软件分析。

2结果

2.1CRC组织与癌旁组织差异蛋白质的质谱分析采用谱图数评价每个蛋白的丰度。参照以下标准界定蛋白丰度的变化：①两个不同样品中的蛋白谱图数差值≥72；②两个不同样品中的蛋白谱图数比值≥1。将CRC组织与癌旁组织的蛋白分析数据依据上述标准进行比对，得到显著差异蛋白44个，其中23个下调蛋白。见图1。

2.2Talin在CRC组织与癌旁组织表达水平的比较44个有显著差异的蛋白质通过上述实验鉴定出来，其中选择Talin做蛋白免疫印迹实验。结果表明，Talin蛋白在癌组织中表达明显低于癌旁组织。此结果通过液质联用技术进一步验证了CRC肿瘤组织与癌旁组织蛋白质表达有差异。

图1　Talin中VMLVNSMNTVK序列肽段的串联质谱图

图1　Talin在CRC及癌旁组织中的表达

3讨论

到目前为止，Talin表达水平与肿瘤侵袭和转移有关的研究不多。Talin在某些肿瘤中低表达，如：肝癌〔2〕、胃癌〔3〕、卵巢癌〔4〕、大肠癌〔5〕等。研究表明，Talin在人前列腺癌细胞的侵袭及抗凋亡中发挥着重要的促进作用。肿瘤转移能力的下降和体内Talin的缺失关系显著〔6〕。本研究通过差异蛋白质组学筛选出的CRC相关蛋白Talin(～270 kD)，包含C端约220 kD的杆状区域及N端约50 kD的球形头部，它连接整合素和肌动蛋白，是一种重要的细胞骨架蛋白，在细胞迁移、黏附、生存和增殖等过程中发挥至关重要的作用〔7〕。Talin通过与整合素、FAK及其他细胞骨架蛋白的信号转导作用，调节癌细胞的移动及播散等功能，进而促进CRC的发生发展过程。本文结果提示Talin可能在CRC的发生、发展中扮演着某种抑癌基因的重要角色。

4参考文献

1Siegel R,Naishadham D,Jemal A,etal.Cancer statistics〔J〕.CA Cancer J Clin,2012;62(1):10-29.

2Hideaki Kanamori,Takao Kawakami,Kathry Effendi,etal.Identification by differential tissue proteome analysis of talin-1 as a novel molecular marker of progression of hepatocellular carcinoma〔J〕.Oncology,2011;80(5-6):406-15.

3Indo HP,Matsui H,Chen J,etal.Manganese superoxide dismutase promotes interaction of actin,S100A4 and Talin,and enhances rat gastric tumor cell invasion〔J〕.J Clin Biochem Nutr,2015;57(1):13-20.

4Tang H,Yao L,Tao X,etal.miR-9 functions as a tumor suppressor in ovarian serous carcinoma by targetting TLN1〔J〕.Intern J Mol Med,2013;32(2):381-8.

5Izard T,EvansG,Borgon RA,etal.Vinculin activation by talin through helical bundle conversion〔J〕.Nature,2004;427(6970):171-5.

6Sakamoto S,McCann RO,Dhir R,etal.Talin 1 promotes tumor invation and metastasis via focal adhesion signaling and anoikis resistance〔J〕.Cancer Res,2010;70(5):1885-95.

7Roberts GC,Critchley DR.Structural and biophysical properties of the integrin-associated cytoskeletal proteintalin〔J〕.Biophys Rev,2009;1(2):61-9.

〔2015-12-17修回〕

(编辑徐杰)

基金项目：国家自然科学基金资助项目(81572082，31100930)；吉林省科技厅资助项目(20140311092YY，2011713,20090461,2010739，20140414005GH)；长春市科技项目资助(12Z931)

通讯作者：李玲霞(1991-)，女，硕士，主要从事肿瘤的发病机制和诊断研究。

〔中图分类号〕R73

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)11-2576-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.004

第一作者：郭宏华(1964-)，女，主任医师，副教授，硕士生导师，主要从事消化系肿瘤的发病机制及治疗研究。